本發(fā)明涉及一種小鼠抑郁癥模型的構(gòu)建方法，屬于病理學(xué)實驗領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

抑郁癥是一種嚴(yán)重危害人類身心健康的精神疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)顯示，全球抑郁癥的發(fā)病率為3.1%，而據(jù)不完全統(tǒng)計，目前我國抑郁癥發(fā)病率高達(dá)5%～6%，而且發(fā)病率近年來呈逐年上升趨勢。抑郁癥不僅發(fā)病率高，而且患者往往病程漫長且容易復(fù)發(fā)，自殺率高，給許多家庭和社會造成沉重負(fù)擔(dān)，根據(jù)發(fā)病源及癥狀表現(xiàn)，抑郁癥可分為躁狂抑郁癥、精神病性抑郁癥、應(yīng)激抑郁癥、季節(jié)性抑郁癥、產(chǎn)后抑郁癥、更年期抑郁癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激綜合癥 (PTSD)等多種類型。不同類型的抑郁癥發(fā)病機制或許有所不同，因此建立不同抑郁類型的動物模型，并找到最合理的治療方案是病理學(xué)、神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的一大重要任務(wù)。

小鼠是當(dāng)代生物學(xué)領(lǐng)域最主要的模式生物之一。目前，關(guān)于小鼠的抑郁模型主要有環(huán)境刺激模型、藥物誘導(dǎo)模型、轉(zhuǎn)基因小鼠、手術(shù)制備等。但現(xiàn)有環(huán)境刺激抑郁模型大都采用在小鼠日常活動中不常見的刺激源，比如強迫游泳、禁食、禁水、噪音、強光、電擊、懸尾、社會隔離、束縛等，公開號CN102405878B的發(fā)明就采用了束縛刺激。這些作為單純的物理應(yīng)激模型存在不同的缺陷，引發(fā)不少研究者的爭議。小鼠在日常活動中經(jīng)常會遭遇到天敵威脅，以小鼠自身的天敵作為刺激源更應(yīng)該能引起小鼠的焦慮恐懼反應(yīng)，而強烈的恐懼是引起PTSD重要原因。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決現(xiàn)有技術(shù)和實際情況中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種小鼠抑郁模型的構(gòu)建方法，所述方法包括：把小鼠放進(jìn)透明鼠籠中，鼠籠一側(cè)通過通道與天敵籠相連；把小鼠天敵隨機放進(jìn)天敵籠中，每天1.5-2.5小時，連續(xù)21天以上即可獲得抑郁小鼠模型。

優(yōu)選地，把小鼠天敵隨機放進(jìn)天敵籠中每天2小時。

優(yōu)選地，所述小鼠為ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一種。

優(yōu)選地，所述透明鼠籠，材質(zhì)為有機玻璃，長×寬×高：30cm×18 cm×16 cm。

優(yōu)選地，所述通道，材質(zhì)為有機玻璃，直徑為為1cm, 長為8 cm。

優(yōu)選地，所述天敵籠，材質(zhì)為有機玻璃，長×寬×高：60 cm×60 cm×60 cm，有帶孔上蓋。

優(yōu)選地，所述天敵為SD大鼠或散養(yǎng)家貓。

本發(fā)明提供了一種簡單方便的小鼠抑郁模型構(gòu)建方法，為不同類型抗抑郁癥藥物的篩選及評價提供了研究基礎(chǔ)。

本發(fā)明的有益效果：建立了一種新型小鼠抑郁模型，為探索不同抑郁類型的發(fā)病機制，及篩選治療不同類型抑郁癥的藥物提供了研究基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例的小鼠抑郁癥模型的構(gòu)建方法的實驗裝置示意圖。

圖2是本發(fā)明實施例的小鼠抑郁癥模型的構(gòu)建方法的小鼠體重變化圖。

圖3是本發(fā)明實施例的小鼠抑郁癥模型的構(gòu)建方法的小鼠糖水偏好實驗結(jié)果圖。

圖4是本發(fā)明實施例的小鼠抑郁癥模型的構(gòu)建方法的小鼠血清皮質(zhì)酮檢測結(jié)果示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖詳細(xì)介紹本發(fā)明技術(shù)方案。

如圖1所示，該小鼠抑郁模型的裝置包括鼠籠1（長×寬×高：30cm×18 cm×16 cm）、連接通道2（直徑1cm, 長8cm）及天敵籠3（長×寬×高：60 cm×60 cm×60 cm）；連接通道2用來連接鼠籠1及天敵籠3。

上述鼠籠1、連接通道2及天敵籠3的材質(zhì)均為有機玻璃；鼠籠蓋為普通的鏤空不銹鋼籠蓋；天敵蓋為普通帶孔上蓋（防止天敵逃跑）。

本發(fā)明公開了一種小鼠抑郁模型的構(gòu)建方法，所述方法包括：把小鼠放進(jìn)透明鼠籠中，鼠籠一側(cè)通過通道與天敵籠相連；把小鼠天敵隨機放進(jìn)天敵籠中，每天2小時，連續(xù)21天以上即可獲得抑郁小鼠模型。

所述小鼠為ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一種。

所述天敵為SD大鼠或散養(yǎng)家貓。

試驗例1：小鼠體重變化

材料與方法：

32只成年雄性C57BL/6小鼠購買于鄭州大學(xué)實驗動物中心 (3月齡左右, 初始體重21.3 ± 0.4 g), 單籠適應(yīng)飼養(yǎng)一周后，隨機分為實驗組和對照組，每組16只。實驗組每天放入如圖1所示的透明鼠籠中，天敵籠不定時放入成年散養(yǎng)家貓，每天2小時，對照組天敵籠中不放任何東西。連續(xù)刺激21天后進(jìn)行行為和生理學(xué)測試。

分別在實驗的第1、7、14、21天測量兩組小鼠的體重，體重變化如圖2所示。

可以看出，兩組小鼠在第14天時，體重呈現(xiàn)明顯差異(22.7 ± 0.5 vs. 27.4 ± 0.4 g; P < 0.05), 實驗組小鼠明顯小于對照組，第21天時兩組體重差異達(dá)到極顯著水平(22.0 ± 0.2 vs. 30.2 ± 0.3; P < 0.01)。

試驗例2：曠場實驗

曠場是由有機玻璃組成的75×45×35 cm³的無蓋的箱子。它的底板用記號筆分成15×15 cm²的格子。實驗開始時，將被測鼠放在曠場一角的格子，讓它自由探測10 min，用秒表記錄其各種行為。測試者們記錄下的主要行為指標(biāo)包括：第一次離開曠場角落格子的潛伏期，運動能力（所穿越的總格子數(shù)），穿越的中心格子數(shù)量，修飾次數(shù)（用前肢摩擦鼻子或者整理毛發(fā)），中心格子和外圍格子中停留的時間等。每次實驗結(jié)束，測試者都用水和75%的酒精擦洗曠場，并用吹風(fēng)機干燥，以減少上一只被測鼠遺留下來的氣味對后面被測鼠的影響，測試結(jié)果如表1

表1 曠場測試結(jié)果

數(shù)據(jù)表示為平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差。獨立樣本t檢驗或Mann-Whitney U檢驗；^*P < 0.05，實驗組vs. 對照組。

結(jié)果顯示，實驗組小鼠穿越的中心格子數(shù)量，在中心格子的停留時間明顯少于對照組 (54.36 ± 8.280 vs. 36.00 ± 2.717, P = 0.024; 57.65 ± 7.633 vs. 41.48 ± 5.125 s, P = 0.015; 實驗組在后)。

試驗例3：高架十字迷宮測試

高架十字迷宮由不銹鋼鋼板組成。包括5×5 cm²的中心區(qū)域，兩個開放臂（30×5 cm）和封閉臂（30×5×15 cm）。封閉臂和開放臂相互對立，呈十字形。迷宮距離地面高度為70 cm。

將小鼠放在朝向開放臂的中心區(qū)域，讓其自由探究5 min, 用秒表記錄下小鼠在每個臂的時間（后肢進(jìn)入臂定義為進(jìn)入），進(jìn)入兩個臂的次數(shù)；統(tǒng)計時使用每個臂累積的時間，統(tǒng)計時需要主要參數(shù)有: 開放臂的時間和頻次，封閉臂的時間和頻次以及中心格子停留的時間[174,175]。作為焦慮行為的參數(shù)，我們還計算了在開放臂的時間百分?jǐn)?shù)（公式：開放臂時間/開放臂與封閉臂的總時間），開放臂頻次的百分?jǐn)?shù)（進(jìn)入開放臂的頻次/開放臂與封閉臂總的進(jìn)入次數(shù)）。

表2 高架十字迷宮結(jié)果

數(shù)據(jù)表示為平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差。 獨立樣本t檢驗或Mann-Whitney U檢驗；^*P < 0.05，^**P < 0.01實驗組vs. 對照組。

試驗例4：糖水偏好實驗

實驗前訓(xùn)練小鼠適應(yīng)含糖飲水，每籠同時放置2個水瓶，一瓶為l％蔗糖水，一瓶為純水，連續(xù)3天，每天交換蔗糖水和純水的位置。實驗開始前1天每組小鼠均禁食禁水24小時，然后給與每只小鼠預(yù)先稱量好的兩瓶水：一瓶1％蔗糖水，一瓶純水。24 h后，取走兩瓶并稱重。計算兩組動物的糖水偏好(糖水偏好 = 糖水消耗/糖水消耗+純水消耗×100％)，糖水偏好實驗結(jié)果見圖3。

與對照組比，實驗組小鼠對糖水的偏好率明顯降低 (60.2% ± 1.6% vs. 89.4% ± 2.5%; P < 0.01)。

試驗例5：血清皮質(zhì)酮檢測

實驗結(jié)束后，小鼠眼球取血，血液在4℃, 3000 r/min條件下離心15min, 取上清。血清皮質(zhì)酮(CORT)的測定嚴(yán)格按照小鼠CORT酶聯(lián)免疫檢測（ELASA）試劑盒（南京建成?，貨號：20160302020）。說明書所列步驟進(jìn)行操作。皮質(zhì)酮的測定范圍為0.5―100 ng/mL,批內(nèi)與批間變異系數(shù)分別為6.5% 與8.2%，試驗結(jié)果如圖4。

ELASA激素檢測的結(jié)果顯示，與對照組相比，實驗組小鼠的血清皮質(zhì)酮含量遠(yuǎn)高于對照組 （30.6 ± 5.3 vs. 22.3 ± 3.1 ng/mL; P < 0.05）。

結(jié)論

以上試驗首先對數(shù)據(jù)進(jìn)行Kolmogorov Smirnov正態(tài)性檢驗，對正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用獨立樣本T檢驗，對于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用Mann-Whitney U 檢驗，取顯著水平為α= 0.05。

綜合以上實驗結(jié)果可以看出，經(jīng)過21天的天敵應(yīng)激刺激，實驗組小鼠在行為和生理上均表現(xiàn)出明顯的抑郁現(xiàn)象，表明按照本方法，能夠成功獲得抑郁癥動物模型。

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。