本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，尤其涉及adgre5基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其篩選方法。

背景技術(shù)：

1、在惡性腫瘤的免疫監(jiān)視過程中，腫瘤細(xì)胞往往通過免疫防御檢查點(diǎn)逃避被識(shí)別與清除。天然殺傷(nk)細(xì)胞在腫瘤免疫防御中扮演重要角色，能直接誘導(dǎo)焦亡(pyroptosis)，且無需抗原呈遞即可識(shí)別并殺傷惡性腫瘤細(xì)胞，成為篩選免疫逃逸檢查點(diǎn)的有效工具。然而，腫瘤細(xì)胞可以通過多種途徑阻斷nk細(xì)胞的識(shí)別和殺傷功能。為此本發(fā)明提出adgre5基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其篩選方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供adgre5基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其篩選方法，旨在解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

2、本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

3、adgre5基因在制備用于增強(qiáng)nk細(xì)胞抗腫瘤活性的藥物中的應(yīng)用，通過敲低腫瘤細(xì)胞的adgre5基因，提高nk細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，表現(xiàn)為nk細(xì)胞釋放的ifn-γ量增加以及cd107a表達(dá)水平上升。

4、進(jìn)一步的，所述腫瘤細(xì)胞包括nci-h446、nci-h1688和a375細(xì)胞系。

5、adgre5基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，通過敲低腫瘤細(xì)胞的adgre5基因，抑制腫瘤生長，促進(jìn)腫瘤內(nèi)nk細(xì)胞和t細(xì)胞的浸潤，并增強(qiáng)nk細(xì)胞和t細(xì)胞的活性。

6、進(jìn)一步的，所述腫瘤細(xì)胞包括b16、ct26和4t1腫瘤。

7、一種篩選惡性腫瘤細(xì)胞免疫防御檢查點(diǎn)的方法，包括以下步驟：

8、a)將sirna文庫導(dǎo)入gsdme陽性的nci-h446細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，以抑制多個(gè)潛在負(fù)調(diào)節(jié)基因的表達(dá)；

9、b)在轉(zhuǎn)染48h后，將轉(zhuǎn)染的nci-h446細(xì)胞與經(jīng)il-15激活的健康供者來源的原代nk細(xì)胞共同培養(yǎng)24h；

10、c)通過elisa檢測共培養(yǎng)上清液中的干擾素γ釋放量，并通過ldh釋放實(shí)驗(yàn)檢測共培養(yǎng)上清液中l(wèi)dh的釋放水平，整合ldh釋放及ifn-γ釋放篩選數(shù)據(jù)并取交集，篩選出腫瘤細(xì)胞逃避nk細(xì)胞介導(dǎo)的免疫防御檢查點(diǎn)候選基因，即adgre5基因。

11、進(jìn)一步的，所述篩選標(biāo)準(zhǔn)包括：

12、ifn-γ釋放量較對(duì)照組增加3.0或4.0倍以識(shí)別抑制nk細(xì)胞抗腫瘤活性的負(fù)調(diào)節(jié)因子；

13、ldh釋放量超過30％用于篩選抑制腫瘤細(xì)胞焦亡的負(fù)調(diào)節(jié)因。

14、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

15、1、本發(fā)明成功識(shí)別了adgre5基因這一與nk細(xì)胞抗腫瘤活性相關(guān)的關(guān)鍵抑制分子。這一發(fā)現(xiàn)不僅為惡性腫瘤的免疫防御機(jī)制提供了新的見解，還為免疫治療領(lǐng)域開辟了新的靶點(diǎn)和方向，有望為患者帶來更為精準(zhǔn)、有效的治療方案。

16、2、本發(fā)明提出的篩選方法通過使用小干擾rna文庫并結(jié)合ifn-γ和ldh的檢測，篩選出抑制nk細(xì)胞抗腫瘤活性的潛在免疫檢查點(diǎn)分子。該篩選方法具有周期短、操作便捷、可靠性高等優(yōu)點(diǎn)。此外，本發(fā)明采用健康供者的原代nk細(xì)胞，并通過嚴(yán)格的體內(nèi)外驗(yàn)證，確保了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。這一方法不僅為識(shí)別和靶向惡性腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制提供了新的手段，還為開發(fā)基于nk細(xì)胞的腫瘤免疫防御策略提供了實(shí)用工具和潛在的治療靶標(biāo)，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.adgre5基因在制備用于增強(qiáng)nk細(xì)胞抗腫瘤活性的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，通過敲低腫瘤細(xì)胞的adgre5基因，提高nk細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，表現(xiàn)為nk細(xì)胞釋放的ifn-γ量增加以及cd107a表達(dá)水平上升。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞包括nci-h446、nci-h1688和a375細(xì)胞系。

3.adgre5基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，通過敲低腫瘤細(xì)胞的adgre5基因，抑制腫瘤生長，促進(jìn)腫瘤內(nèi)nk細(xì)胞和t細(xì)胞的浸潤，并增強(qiáng)nk細(xì)胞和t細(xì)胞的活性。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞包括b16、ct26和4t1腫瘤。

5.一種篩選惡性腫瘤細(xì)胞免疫防御檢查點(diǎn)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于，所述篩選標(biāo)準(zhǔn)包括：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明適用于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，提供了ADGRE5基因在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用及其篩選方法。本發(fā)明成功識(shí)別了ADGRE5基因這一與NK細(xì)胞抗腫瘤活性相關(guān)的關(guān)鍵抑制分子。這一發(fā)現(xiàn)不僅為惡性腫瘤的免疫防御機(jī)制提供了新的見解，還為免疫治療領(lǐng)域開辟了新的靶點(diǎn)和方向，有望為患者帶來更為精準(zhǔn)、有效的治療方案。本發(fā)明提出的篩選方法具有周期短、操作便捷、可靠性高等優(yōu)點(diǎn)；本發(fā)明采用健康供者的原代NK細(xì)胞，并通過嚴(yán)格的體內(nèi)外驗(yàn)證，確保了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。這一方法不僅為識(shí)別和靶向惡性腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制提供了新的手段，還為開發(fā)基于NK細(xì)胞的腫瘤免疫防御策略提供了實(shí)用工具和潛在的治療靶標(biāo)，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：李玲玉,王宇峰
受保護(hù)的技術(shù)使用者：吉林大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15