最新的毛片基地免费,国产国语一级毛片,免费国产成人高清在线电影,中天堂国产日韩欧美,中国国产aa一级毛片,国产va欧美va在线观看,成人不卡在线

核酸的空間分辨表面捕獲的制作方法

文檔序號:41956328發(fā)布日期:2025-05-16 14:24閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種用于制備空間分辨核酸的方法,其包括:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟b)的所述細(xì)胞樣品包括單個(gè)細(xì)胞、多個(gè)細(xì)胞、組織、器官、生物體或切片的細(xì)胞樣品。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟b)的所述細(xì)胞樣品包括新鮮樣品、冷凍樣品、新鮮冷凍樣品或福爾馬林固定的石蠟包埋樣品。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟c)的所述多個(gè)模板轉(zhuǎn)換寡核苷酸包括嵌合dna和/或rna寡核苷酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟f)的所述單鏈環(huán)化寡核苷酸的所述接頭區(qū)包含用于多重化的至少一個(gè)樣品索引序列、用于分子標(biāo)記的至少一個(gè)唯一分子索引(umi)序列和/或針對壓實(shí)寡核苷酸的至少一個(gè)通用結(jié)合位點(diǎn)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟h)的所述滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)在多個(gè)壓實(shí)寡核苷酸的存在下進(jìn)行,其中所述壓實(shí)寡核苷酸包括單鏈寡核苷酸,所述單鏈寡核苷酸各自在第一遠(yuǎn)側(cè)端處具有與串聯(lián)體分子的一個(gè)部分雜交的第一區(qū)并且在第二遠(yuǎn)側(cè)端處具有與同一串聯(lián)體分子的第二部分雜交的第二區(qū),其中所述串聯(lián)體分子的第一部分和所述串聯(lián)體分子的所述第二部分接近,由此導(dǎo)致所述串聯(lián)體分子的壓實(shí)以形成dna納米球。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟i)的所述測序包括:

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟i)的所述測序包括:

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中步驟i)的所述測序包括:

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中步驟i)的所述測序包括:

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其進(jìn)一步包括:

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其進(jìn)一步包括:

13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中步驟b.的所述使所述多個(gè)第一復(fù)合聚合酶與多個(gè)多價(jià)分子接觸在抑制聚合酶催化的核苷酸摻入的非催化二價(jià)陽離子的存在下進(jìn)行,其中所述非催化二價(jià)陽離子包括鍶、鋇或鈣。

14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中多個(gè)多價(jià)分子中的單獨(dú)的多價(jià)分子包含:(a)核;和(b)多個(gè)核苷酸臂,所述多個(gè)核苷酸臂包含:(i)核附接部分,(ii)間隔區(qū),(iii)接頭和(iv)核苷酸單元,其中所述核經(jīng)由所述多個(gè)核苷酸臂的核附接部分附接至所述多個(gè)核苷酸臂,其中所述間隔區(qū)附接至所述接頭,并且其中所述接頭附接至所述核苷酸單元。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其中所述接頭包含具有2至6個(gè)亞基的脂族鏈或具有2至6個(gè)亞基的低聚乙二醇鏈。

16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,其中附接至給定核的所述多個(gè)核苷酸臂具有相同類型的核苷酸單元,并且其中所述類型的核苷酸單元包括datp、dgtp、dctp、dttp或dutp。

17.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中多個(gè)多價(jià)分子包括一種類型的多價(jià)分子,其中所述多個(gè)多價(jià)分子中的每個(gè)多價(jià)分子具有選自由以下項(xiàng)組成的組的相同類型的核苷酸單元:datp、dgtp、dctp、dttp和dutp。

18.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中多個(gè)多價(jià)分子包括兩種或更多種類型的多價(jià)分子的任意組合的混合物,每種類型具有選自由以下項(xiàng)組成的組的核苷酸單元:datp、dgtp、dctp、dttp和dutp。

19.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其進(jìn)一步包括形成多個(gè)結(jié)合復(fù)合物,包括以下步驟:

20.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其進(jìn)一步包括形成親合力復(fù)合物,包括以下步驟:

21.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中步驟c.的所述使所述多個(gè)第二復(fù)合聚合酶與所述多個(gè)核苷酸接觸在促進(jìn)聚合酶催化的核苷酸摻入的催化二價(jià)陽離子的存在下進(jìn)行,其中所述催化二價(jià)陽離子包括鎂或錳。

22.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中步驟c.中的所述多個(gè)核苷酸中的單獨(dú)的核苷酸包含芳香族堿基、五碳糖和1至10個(gè)磷酸酯基團(tuán)。

23.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中步驟c.的所述多個(gè)核苷酸包括選自由以下項(xiàng)組成的組的一種類型的核苷酸:datp、dgtp、dctp、dttp和dutp,或包括選自由以下項(xiàng)組成的組的兩種或更多種類型的核苷酸的任意組合的混合物:datp、dgtp、dctp、dttp和dutp。

24.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中步驟c.中的所述多個(gè)核苷酸中的所述核苷酸中的至少一個(gè)核苷酸用熒光團(tuán)標(biāo)記。

25.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中步驟c.中的所述多個(gè)核苷酸缺乏熒光團(tuán)標(biāo)記。

26.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法,其中步驟c.的所述多個(gè)核苷酸中的所述核苷酸中的至少一個(gè)核苷酸包含附接至糖基團(tuán)的3'碳位置的可移除鏈終止部分,其中所述可移除鏈終止部分包括烷基基團(tuán)、烯基基團(tuán)、炔基基團(tuán)、烯丙基基團(tuán)、芳基基團(tuán)、芐基基團(tuán)、疊氮基基團(tuán)、疊氮基基團(tuán)、o-疊氮甲基基團(tuán)、胺基基團(tuán)、酰胺基基團(tuán)、酮基基團(tuán)、異氰酸酯基團(tuán)、磷酸酯基團(tuán)、硫代基團(tuán)、二硫基團(tuán)、碳酸酯基團(tuán)、脲基團(tuán)或甲硅烷基基團(tuán),并且其中所述可移除鏈終止部分可用化學(xué)化合物裂解以在所述糖基團(tuán)上生成可延伸3'oh部分。


技術(shù)總結(jié)
本公開提供了用于在支持物上捕獲來自細(xì)胞樣品的核酸、在所述支持物上制備文庫分子、擴(kuò)增所述支持物上的文庫分子以產(chǎn)生核酸模板分子以及分析固定的核酸模板分子,包括對所述固定的核酸模板分子進(jìn)行檢測和/或測序的組合物、裝置和方法。所述固定的核酸模板分子對應(yīng)于來自所述細(xì)胞樣品的所述核酸。所述固定的核酸模板分子在空間上位于所述支持物上對應(yīng)于來自所述細(xì)胞樣品的所述核酸的空間位置的位置處。

技術(shù)研發(fā)人員:M·普雷維特,S·萊維
受保護(hù)的技術(shù)使用者:元素生物科學(xué)公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/15
當(dāng)前第2頁1 2 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點(diǎn)贊!
1