本公開文本總體上涉及免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更特別地，本公開文本涉及包含多鏈?zhǔn)荏w的組合物和方法。本公開文本還涉及包括此類受體的增強(qiáng)的car?t細(xì)胞療法。

背景技術(shù)：

1、基于淋巴細(xì)胞(例如，t細(xì)胞)過繼轉(zhuǎn)移的免疫療法的開發(fā)已經(jīng)取得了許多重要進(jìn)展，其中最重要的是表達(dá)包括嵌合抗原受體在內(nèi)的嵌合免疫受體的t細(xì)胞(car-t細(xì)胞)。然而，限制這些療法的一個(gè)重要問題是無法在需要時(shí)調(diào)節(jié)或關(guān)閉car-t活性。car-t活性的調(diào)節(jié)對于減少或消除在施用嵌合抗原受體t細(xì)胞時(shí)引起顯著副作用的相互作用特別重要。

2、與t細(xì)胞受體(tcr)不同，諸如car的嵌合免疫受體包括腫瘤抗原識別和細(xì)胞內(nèi)激活相結(jié)合的分子。此類免疫受體的結(jié)構(gòu)和設(shè)計(jì)最低限度地包括通過tmd連接至一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞內(nèi)激活結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外抗原識別結(jié)構(gòu)域。此類免疫受體的例子包括synnotch受體，其能夠結(jié)合用戶定義的細(xì)胞表面展示配體，從而觸發(fā)受體的蛋白水解切割和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子在細(xì)胞中誘導(dǎo)定制轉(zhuǎn)錄程序。其他例子包括這樣的受體，其摻入信號傳導(dǎo)(例如，共刺激、cd3ζ)，所述信號傳導(dǎo)可啟動伴隨定制轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的t細(xì)胞激活。免疫受體的那些例子被設(shè)計(jì)為具有共刺激、cd3ζ和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域的連續(xù)融合的單蛋白質(zhì)鏈。

3、還需要能夠同時(shí)進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的受體，以更有效且更可靠地誘導(dǎo)近側(cè)t細(xì)胞激活信號和原代t細(xì)胞中的基因調(diào)節(jié)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開文本總體上涉及多鏈嵌合多肽(例如，嵌合免疫受體)，其具有能夠使用不同蛋白質(zhì)鏈進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的架構(gòu)。特別地，本公開文本涉及具有不同多肽鏈的多鏈嵌合多肽，所述不同多肽鏈在翻譯后彼此締合(經(jīng)由位于跨膜結(jié)構(gòu)域內(nèi)的殘基)以使得能夠在結(jié)合配體后同時(shí)激活信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和釋放轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。

2、本文尤其提供了多鏈嵌合多肽，所述多鏈嵌合多肽包含(a)第一多肽，其具有(i)對所選配體具有結(jié)合親和力的細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、(ii)含有第一修飾界面的第一跨膜結(jié)構(gòu)域(tmd)和(iii)含有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(icd)，以及(b)第二多肽，其具有(i)含有第二界面的第二tmd和(ii)含有信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的第二icd，其中所述第一修飾界面和所述第二修飾界面各自包含具有相反電荷的氨基酸殘基，其中所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述第一修飾界面和所述第二界面偶聯(lián)，并且其中所述所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性和所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放。在一些實(shí)施方案中，所述所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性和所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放。

3、在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽按從所述第一多肽的n末端到c末端的順序包含(i)所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、(ii)所述第一tmd和(iii)所述第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述第一tmd包含(i)10至25個(gè)連續(xù)纈氨酸殘基或(ii)notch?1tmd。

4、在所述多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述第二多肽按從所述第二多肽的n末端到c末端的順序包含(i)所述第二tmd和(ii)所述第二細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。

5、在所述多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述第一修飾界面包含帶正電荷的殘基，所述第二界面包含帶負(fù)電荷的殘基，并且所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述第一修飾界面與所述第二修飾界面之間的靜電力偶聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，所述帶正電荷的殘基是賴氨酸或精氨酸。在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述第一tmd包含seq?id?no:21或其功能變體，并且所述賴氨酸或精氨酸殘基位于選自seq?id?no:21的位置10至14的位置；或(ii)所述第一tmd包含seq?id?no:18，并且所述賴氨酸或精氨酸位于選自seq?id?no:18的位置8至11的位置。在其中所述第一跨膜包含seq?id?no:21的一些實(shí)施方案中，所述賴氨酸或精氨酸殘基位于seq?id?no:21的位置12。在其中所述第一跨膜包含seqid?no:18的一些實(shí)施方案中，所述賴氨酸或精氨酸殘基位于相對于seq?id?no:18的位置9。

6、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域包括結(jié)合(或能夠結(jié)合)細(xì)胞表面上的配體的抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合部分選自抗體、納米抗體、雙抗體、三抗體、微型抗體、f(ab')2片段、f(ab)片段、單鏈可變片段(scfv)、單結(jié)構(gòu)域抗體(sdab)及其功能片段。

7、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述配體包括蛋白質(zhì)或碳水化合物。在一些實(shí)施方案中，所述配體是腫瘤相關(guān)抗原或腫瘤特異性抗原。在一些實(shí)施方案中，所述配體包括細(xì)胞表面受體、粘附蛋白、整合素、粘蛋白、凝集素、腫瘤相關(guān)抗原和腫瘤特異性抗原。在一些實(shí)施方案中，所述配體包括cd1、cd1a、cd1b、cd1c、cd1d、cd1e、cd2、cd3d、cd3e、cd3g、cd4、cd5、cd7、cd8a、cd8b、cd19、cd20、cd21、cd22、cd23、cd25、cd27、cd28、cd33、cd34、cd40、cd45、cd48、cd52、cd59、cd66、cd70、cd71、cd72、cd73、cd79a、cd79b、cd80(b7.1)、cd86(b7.2)、cd94、cd95、cd134、cd140(pdgfr4)、cd152、cd154、cd158、cd178、cd181(cxcr1)、cd182(cxcr2)、cd183(cxcr3)、cd210、cd246、cd252、cd253、cd261、cd262、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd276(b7h3)、cd279、cd295、cd339(jag1)、cd340(her2)、egfr、fgfr2、cea、afp、ca125、muc-1、mage、胎盤堿性磷酸酶樣蛋白2(alppl2)、b細(xì)胞成熟抗原(bcma)、綠色熒光蛋白(gfp)、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(egfp)或信號調(diào)節(jié)蛋白a(sirpα)。

8、在一些實(shí)施方案中，所述配體存在于細(xì)胞表面上。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是人細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。

9、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子包括轉(zhuǎn)錄激活因子或轉(zhuǎn)錄阻遏因子。在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子包括ga14-vp16、ga14-vp64、tetr-vp64、zfhd1-vp64、ga14-krab或hap1-vp16。

10、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是人或人源化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是hnf1a。

11、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述第二多肽包含信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括cd3ζ、tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b、cd278(icos)、fcεri、dap10、dap12或cd66d信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

12、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括dap12、cd3ζ、tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b、cd278(icos)、fc.ε.ri、dap10、dap12或cd66d信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

13、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述第一多肽還包含以下中的一種或多種：鉸鏈結(jié)構(gòu)域、配體誘導(dǎo)型蛋白水解切割位點(diǎn)、自身蛋白水解肽序列、核定位信號、近膜結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述近膜結(jié)構(gòu)域是多元結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述多元結(jié)構(gòu)域包括notch-1或notch-2近膜結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述自身蛋白水解肽序列來自豬捷申病毒-1?2a(p2a)、口蹄疫病毒(fmdv)2a(f2a)、馬甲型鼻炎病毒(erav)2a(e2a)、明脈扁刺蛾β四體病毒2a(t2a)、質(zhì)型多角體病毒2a(bmcpv2a)、軟化病病毒2a(bmifv2a)或其組合。

14、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述第一多肽還包含來自cd8、cd28、ox40或igg4的鉸鏈結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域源自cd8。在一些實(shí)施方案中，所述鉸鏈結(jié)構(gòu)域包括截短的cd8α鉸鏈結(jié)構(gòu)域(也稱為cd8鉸鏈或cd8鉸鏈2)。

15、在本公開文本的多鏈嵌合多肽的一些實(shí)施方案中，所述配體誘導(dǎo)型蛋白水解切割位點(diǎn)可被γ分泌酶切割。

16、在一個(gè)方面，本文還提供了多鏈嵌合多肽，所述多鏈嵌合多肽包含(a)第一多肽，其具有(i)包含cd19scfv的細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、(ii)包含含有賴氨酸或精氨酸殘基的連續(xù)纈氨酸殘基段的第一tmd、和(iii)notch?2近膜結(jié)構(gòu)域、和(iv)具有g(shù)al4vp64轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的第一icd；以及(b)具有dnax激活蛋白12(dap12)的第二多肽；其中所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述連續(xù)纈氨酸殘基段內(nèi)的賴氨酸或精氨酸殘基偶聯(lián)，并且其中cd19與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性并釋放所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在一些實(shí)施方案中，其中所述連續(xù)纈氨酸殘基段包含5至25個(gè)纈氨酸殘基，并且所述賴氨酸殘基的側(cè)翼是連續(xù)5至15個(gè)纈氨酸殘基段。在一些實(shí)施方案中，所述連續(xù)纈氨酸殘基段包含5至25個(gè)纈氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述第一tmd包含15至20個(gè)纈氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，所述賴氨酸殘基位于所述第一tmd的位置9或10。

17、在一個(gè)方面，本文還提供了多鏈嵌合多肽，所述多鏈嵌合多肽包含(a)第一多肽，所述第一多肽具有(i)包含cd19scfv的所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、包含含有賴氨酸或精氨酸殘基的連續(xù)纈氨酸殘基段的所述第一tmd，所述第一多肽還包含notch?2近膜結(jié)構(gòu)域和含有g(shù)al4vp64轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的所述第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；第二多肽，所述第二多肽包含cd3z信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，并且其中所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述連續(xù)纈氨酸殘基段內(nèi)的賴氨酸殘基偶聯(lián)，并且其中cd19與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性并釋放所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。

18、在一個(gè)方面，本文還提供了多鏈嵌合多肽，所述多鏈嵌合多肽包含(a)第一多肽，所述第一多肽具有(i)包含cd19scfv的細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、包含含有賴氨酸或精氨酸殘基的連續(xù)纈氨酸殘基段的所述第一tmd，所述第一多肽還包含notch?2近膜結(jié)構(gòu)域和含有人或人源化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的所述第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；第二多肽，所述第二多肽包含dnax激活蛋白12(dap12)或cd3z，并且其中所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述連續(xù)纈氨酸殘基段內(nèi)的賴氨酸殘基偶聯(lián)，并且其中cd19與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性并釋放所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。

19、在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是hnf1a。

20、在一些實(shí)施方案中，本公開文本的多鏈嵌合多肽是免疫受體。在一些實(shí)施方案中，所述免疫受體是嵌合抗原受體。

21、在一個(gè)方面，本文提供了多鏈嵌合多肽，所述多鏈嵌合多肽包含(a)第一多肽，所述第一多肽包含(i)對所選配體具有結(jié)合親和力的細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、(ii)含有第一修飾界面的第一跨膜結(jié)構(gòu)域(tmd)和(iii)含有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子或信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；以及(b)第二多肽，所述第二多肽包含(i)含有第二界面的第二tmd和(ii)含有信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的第二細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；其中所述第一修飾界面和所述第二修飾界面各自包含具有相反電荷的氨基酸殘基，并且其中所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述第一修飾界面和所述第二界面偶聯(lián)，并且其中所述所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性和所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放。

22、在一些實(shí)施方案中，所述第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包含轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子包括ga14-vp16、ga14-vp64、tetr-vp64、zfhd1-vp64、ga14-krab或hap1-vp16。在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是人或人源化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。在一些實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子是hnf1a。

23、在一些實(shí)施方案中，所述第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包含信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括以下中的一種或多種：cd3ζ、tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b、cd278(icos)、fcεri、dap10、dap12、cd66d、4-1bb或共同γ鏈信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

24、在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括cd3ζ、tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b、cd278(icos)、fcεri、dap10、dap12、cd66d或4-1bb信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

25、在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽的信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括il-2rb、il-4ra、il-7ra、il-9ra、il-13r、il-15r或il-21r胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。

26、在一些實(shí)施方案中，所述所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的活性和所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放。

27、在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽按從所述第一多肽的n末端到c末端的順序包含(i)所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、(ii)所述第一tmd和(iii)所述第一細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。

28、在一些實(shí)施方案中，所述第一tmd包含：(i)10至25個(gè)連續(xù)纈氨酸殘基，或(ii)notch?1跨膜結(jié)構(gòu)域。

29、在一些實(shí)施方案中，所述第二多肽按從所述第二多肽的n末端到c末端的順序包含(i)所述第二tmd和(ii)所述第二細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。

30、在一些實(shí)施方案中，所述第一修飾界面包含帶正電荷的殘基，并且其中所述第二界面包含帶負(fù)電荷的殘基，并且其中所述第一多肽與所述第二多肽經(jīng)由所述第一修飾界面與所述第二修飾界面之間的靜電力偶聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，所述帶正電荷的殘基是賴氨酸或精氨酸。

31、在一些實(shí)施方案中，(i)所述第一tmd包含seq?id?no:21或其功能變體，并且所述賴氨酸或精氨酸殘基位于選自seq?id?no:21的位置10至14的位置；或(ii)所述第一tmd包含seq?id?no:18，并且所述賴氨酸或精氨酸位于選自seq?id?no:18的位置8至11的位置。在一些實(shí)施方案中，所述賴氨酸或精氨酸殘基位于(i)seq?id?no:21的位置12，或(ii)seq?idno:18的位置9。

32、在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域包含能夠與細(xì)胞表面上的配體結(jié)合的抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗原結(jié)合部分選自抗體、納米抗體、雙抗體、三抗體、微型抗體、f(ab')2片段、f(ab)片段、單鏈可變片段(scfv)、單結(jié)構(gòu)域抗體(sdab)及其功能片段。

33、在一些實(shí)施方案中，所述配體包括蛋白質(zhì)或碳水化合物。

34、在一些實(shí)施方案中，所述配體是腫瘤相關(guān)抗原或腫瘤特異性抗原。

35、在一些實(shí)施方案中，所述配體包括細(xì)胞表面受體、粘附蛋白、整合素、粘蛋白、凝集素、腫瘤相關(guān)抗原或腫瘤特異性抗原。

36、在一些實(shí)施方案中，所述配體包括cd1、cd1a、cd1b、cd1c、cd1d、cd1e、cd2、cd3d、cd3e、cd3g、cd4、cd5、cd7、cd8a、cd8b、cd19、cd20、cd21、cd22、cd23、cd25、cd27、cd28、cd33、cd34、cd40、cd45、cd48、cd52、cd59、cd66、cd70、cd71、cd72、cd73、cd79a、cd79b、cd80(b7.1)、cd86(b7.2)、cd94、cd95、cd134、cd140(pdgfr4)、cd152、cd154、cd158、cd178、cd181(cxcr1)、cd182(cxcr2)、cd183(cxcr3)、cd210、cd246、cd252、cd253、cd261、cd262、cd273(pd-l2)、cd274(pd-l1)、cd276(b7h3)、cd279、cd295、cd339(jag1)、cd340(her2)、egfr、fgfr2、cea、afp、ca125、muc-1、mage、胎盤堿性磷酸酶樣蛋白2(alppl2)、b細(xì)胞成熟抗原(bcma)、綠色熒光蛋白(gfp)、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(egfp)或信號調(diào)節(jié)蛋白a(sirpα)。

37、在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是人細(xì)胞。

38、在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。

39、在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽還包含以下中的一種或多種：鉸鏈結(jié)構(gòu)域、配體誘導(dǎo)型蛋白水解切割位點(diǎn)、自身蛋白水解肽序列、核定位信號、近膜結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述近膜結(jié)構(gòu)域是多元結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述多元結(jié)構(gòu)域包括notch-1或notch-2近膜結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述自身蛋白水解肽序列來自豬捷申病毒-1?2a(p2a)、口蹄疫病毒(fmdv)2a(f2a)、馬甲型鼻炎病毒(erav)2a(e2a)、明脈扁刺蛾β四體病毒2a(t2a)、質(zhì)型多角體病毒2a(bmcpv2a)、軟化病病毒2a(bmifv2a)或其組合。

40、在一些實(shí)施方案中，所述第一多肽還包含來自cd8、cd28、ox40或igg4的鉸鏈結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述鉸鏈結(jié)構(gòu)域包含截短的cd8α鉸鏈結(jié)構(gòu)域。

41、在一個(gè)方面，本文提供了重組核酸構(gòu)建體，所述重組核酸構(gòu)建體在5’至3’方向上包含第一盒和第二盒，其中所述第一盒和所述第二盒通過自身蛋白水解肽連接，并且其中所述第一盒編碼本公開文本的多鏈嵌合多肽的第一多肽，并且所述第二盒編碼本公開文本的多鏈嵌合多肽的第二多肽。

42、在另外的方面，本文提供了核酸構(gòu)建體，所述核酸構(gòu)建體在5’至3’方向上包含第一盒和第二盒，其中所述第一盒和所述第二盒通過自身蛋白水解肽連接，并且其中所述第一盒編碼本公開文本的多鏈嵌合多肽的第二多肽，并且所述第二盒編碼本公開文本的多鏈嵌合多肽的第一多肽。

43、在另外的方面，本文提供了編碼本公開文本的任一種多鏈嵌合多肽的第一多肽的核酸構(gòu)建體。

44、在另外的方面，本文提供了編碼本公開文本的任一種多鏈嵌合多肽的第二多肽的核酸構(gòu)建體。

45、在一些實(shí)施方案中，所述自身蛋白水解肽是明脈扁刺蛾β四體病毒2a(t2a)肽。

46、在一些實(shí)施方案中，所述核酸構(gòu)建體具有這樣的核酸序列，所述核酸序列與seqid?no:2、3、4、5、6、7、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58或其功能變體具有70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。

47、在另外的方面，本公開文本提供了包含本公開文本的重組核酸分子的載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體是表達(dá)載體。在一些實(shí)施方案中，所述載體是病毒載體。在一些實(shí)施方案中，所述病毒載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。在一些實(shí)施方案中，所述病毒載體選自慢病毒載體、腺病毒載體和腺相關(guān)病毒載體。

48、在另一個(gè)方面，本文提供了重組細(xì)胞，所述重組細(xì)胞包含a)本公開文本的多鏈嵌合多肽，或b)本公開文本的重組核酸分子，或c)本公開文本的載體。在一些實(shí)施方案中，所述重組細(xì)胞是人細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述重組細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述重組細(xì)胞是免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述免疫細(xì)胞是b細(xì)胞、單核細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)性t細(xì)胞、輔助性t細(xì)胞、細(xì)胞毒性t細(xì)胞和其他t細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述t細(xì)胞是cd4+t細(xì)胞或cd8+t細(xì)胞。

49、本公開文本還提供了包含本公開文本的重組細(xì)胞和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物。

50、本文還提供了在t細(xì)胞中同時(shí)誘導(dǎo)t細(xì)胞信號傳導(dǎo)和基因調(diào)節(jié)的方法，所述方法包括(a)提供具有本公開文本的多鏈嵌合多肽或抗原受體的t細(xì)胞；和(b)使所述t細(xì)胞暴露于所選配體，其中所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放。

51、在另外的方面，本公開文本提供了在t細(xì)胞中同時(shí)誘導(dǎo)t細(xì)胞信號傳導(dǎo)和基因調(diào)節(jié)的方法，所述方法包括(a)提供(i)包含本公開文本的多鏈嵌合多肽的載體或(ii)包含本公開文本的第一多肽的第一載體和包含本公開文本的第二多肽的第二載體；和(b)用一種或多種載體轉(zhuǎn)導(dǎo)t細(xì)胞，其中所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)和所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的釋放。在一些實(shí)施方案中，所述t細(xì)胞的誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)參與增殖、凋亡、非凋亡性死亡、分化、去分化、遷移、分子分泌、細(xì)胞粘附和/或細(xì)胞溶解活性的所選基因的表達(dá)。

52、在另外的方面，本公開文本提供了在t細(xì)胞中誘導(dǎo)增強(qiáng)的t細(xì)胞信號傳導(dǎo)的方法，所述方法包括(a)提供包含本公開文本的多鏈嵌合多肽的t細(xì)胞；和(b)將所述t細(xì)胞暴露于所選配體，其中所述所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。

53、在另一個(gè)方面，本公開文本提供了在t細(xì)胞中誘導(dǎo)增強(qiáng)的t細(xì)胞信號傳導(dǎo)的方法，所述方法包括(a)提供包含本公開文本的多鏈嵌合多肽的載體，或包含本公開文本的任一種多鏈多肽的第一多肽的載體和包含本公開文本的任一種多鏈多肽的第二多肽的第二載體；和(b)用一種或多種載體轉(zhuǎn)導(dǎo)t細(xì)胞，其中所述所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合誘導(dǎo)增強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。

54、在一些實(shí)施方案中，所釋放的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子調(diào)節(jié)所述t細(xì)胞中有效載荷的表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，所述有效載荷包括趨化因子、趨化因子受體、嵌合抗原受體、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、分化因子、生長因子、生長因子受體、激素、代謝酶、病原體衍生的蛋白質(zhì)、增殖誘導(dǎo)劑、受體、rna指導(dǎo)的核酸酶、位點(diǎn)特異性核酸酶、t細(xì)胞受體、毒素、毒素衍生的蛋白質(zhì)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、轉(zhuǎn)錄激活因子、轉(zhuǎn)錄阻遏因子、翻譯調(diào)節(jié)因子、翻譯激活因子、翻譯阻遏因子、激活性免疫受體、抗體、凋亡抑制劑、凋亡誘導(dǎo)劑、工程化的t細(xì)胞受體、免疫激活因子、免疫抑制劑或抑制性免疫受體。

55、在另一個(gè)方面，本文提供了用于治療有需要的受試者的健康狀況的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的本公開文本的重組細(xì)胞或藥物組合物，其中所述重組細(xì)胞或所述藥物組合物治療所述受試者的健康狀況。在一些實(shí)施方案中，所施用的重組細(xì)胞調(diào)節(jié)個(gè)體中靶細(xì)胞的活性。在一些實(shí)施方案中，所述靶細(xì)胞的活性包括所選基因的表達(dá)、增殖、凋亡、非凋亡性死亡、分化、去分化、遷移、分子分泌、細(xì)胞粘附和細(xì)胞溶解活性。在一些實(shí)施方案中，所述靶細(xì)胞是癌細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述癌細(xì)胞是實(shí)體瘤細(xì)胞或血液惡性腫瘤細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述血液惡性腫瘤細(xì)胞是多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞。

56、本文還提供了用于調(diào)節(jié)t細(xì)胞活性的方法，所述方法包括(a)提供有效量的任一種本公開文本的重組細(xì)胞；以及(b)使所述細(xì)胞與所選配體接觸，其中所選配體與所述細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合(i)誘導(dǎo)配體誘導(dǎo)型蛋白水解切割位點(diǎn)的切割并釋放所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，并且同時(shí)(ii)激活t細(xì)胞信號傳導(dǎo)，其中所釋放的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子調(diào)節(jié)所述重組細(xì)胞的活性。

57、前述
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
僅是說明性的，并不旨在以任何方式進(jìn)行限制。除了本文所述的說明性實(shí)施方案和特征之外，根據(jù)附圖、具體實(shí)施方式和權(quán)利要求，本公開文本的其他方面、實(shí)施方案、目的和特征將變得完全清楚。