提供了一組單克隆抗體，所述單克隆抗體與tim-3特異性結(jié)合。

背景技術(shù)：

1、tim-3，即t細胞免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和粘蛋白結(jié)構(gòu)域3，是33kd?i型跨膜糖蛋白，是包含t細胞免疫球蛋白和粘蛋白結(jié)構(gòu)域的家族的成員，在促進慢性病毒感染和腫瘤逃避免疫監(jiān)視的t細胞耗竭中起重要作用。成熟的人tim-3含有280個氨基酸殘基(ncbi登錄號：np_116171.3)。其胞外域由氨基酸殘基1-181組成，跨膜域和胞質(zhì)c-末端尾部包含殘基182-280。沒有已知的抑制性信號傳導(dǎo)基序，諸如在胞質(zhì)域中發(fā)現(xiàn)的基于免疫受體酪氨酸的抑制性基序(itim)和酪氨酸轉(zhuǎn)換基序(itsm)。

2、tim-3最初在th1細胞中被鑒定出來。隨后的研究顯示除了t細胞之外，tim-3還在其他類型的免疫細胞，諸如nk細胞、巨噬細胞、dc和肥大細胞中表達。tim-3很少在其他人體組織中表達。

3、已經(jīng)報道了幾種tim-3配體(tim-3l)，包括半乳糖凝集素-9(gal-9)和磷脂酰絲氨酸(ptdser)。tim-3配體與tim-3的結(jié)合誘導(dǎo)抑制t細胞活化的細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致細胞增殖、il-2和ifn-γ分泌減少。

4、在癌癥和病毒感染中，tim-3信號傳導(dǎo)的活化促進免疫細胞功能障礙，導(dǎo)致癌癥生長或病毒感染擴大。在腫瘤浸潤性淋巴細胞、巨噬細胞和腫瘤細胞中tim-3表達的上調(diào)已經(jīng)在許多類型的癌癥中報道。這些癌癥中tim-3表達的增加與患者生存預(yù)后不良的結(jié)果相關(guān)。tim-3信號的上調(diào)不但在對癌癥的免疫耐受中起重要作用，而且對慢性病毒感染也起作用。在hiv和hcv感染期間，t細胞上tim-3的表達顯著高于健康人，并且與病毒載量和疾病進展呈正相關(guān)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種與人tim-3特異性結(jié)合的單克隆抗體，其中所述單克隆抗體包含(a)如seq?id?no:2所示的vh中包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，以及如seq?id?no:1所示的vl中包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3；

2、(b)如seq?id?no:22所示的vh中包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，以及如seq?idno:21所示的vl中包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3；

3、(c)如seq?id?no:42所示的vh中包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，以及如seq?idno:41所示的vl中包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3；

4、(d)如seq?id?no:62所示的vh中包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，以及如seq?idno:61所示的vl中包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3；

5、(e)如seq?id?no:82所示的vh中包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，以及如seq?idno:81所示的vl中包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3；或

6、(f)如seq?id?no:102所示的vh中包含的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，以及如seq?idno:101所示的vl中包含的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3。

7、在一個實施方案中，所述單克隆抗體包含(a1)如seq?id?no:12所示的cdr-h1、如seq?id?no:13所示的cdr-h2、如seq?id?no:14所示的cdr-h3、如seq?id?no:3所示的cdr-l1、如seq?id?no:4所示的cdr-l2和如seq?id?no:5所示的cdr-l3；

8、(a2)如seq?id?no:15所示的cdr-h1、如seq?id?no:16所示的cdr-h2、如seq?idno:17所示的cdr-h3、如seq?id?no:6所示的cdr-l1、如seq?id?no:7所示的cdr-l2和如seqid?no:8所示的cdr-l3；

9、(a3)如seq?id?no:18所示的cdr-h1、如seq?id?no:19所示的cdr-h2、如seq?idno:20所示的cdr-h3、如seq?id?no:9所示的cdr-l1、如seq?id?no:10所示的cdr-l2和如seqid?no:11所示的cdr-l3；

10、(b1)如seq?id?no:32所示的cdr-h1、如seq?id?no:33所示的cdr-h2、如seq?idno:34所示的cdr-h3、如seq?id?no:23所示的cdr-l1、如seq?id?no:24所示的cdr-l2和如seq?id?no:25所示的cdr-l3；

11、(b2)如seq?id?no:35所示的cdr-h1、如seq?id?no:36所示的cdr-h2、如seq?idno:37所示的cdr-h3、如seq?id?no:26所示的cdr-l1、如seq?id?no:27所示的cdr-l2和如seq?id?no:28所示的cdr-l3；

12、(b3)如seq?id?no:38所示的cdr-h1、如seq?id?no:39所示的cdr-h2、如seq?idno:40所示的cdr-h3、如seq?id?no:29所示的cdr-l1、如seq?id?no:30所示的cdr-l2和如seq?id?no:31所示的cdr-l3；

13、(c1)如seq?id?no:52所示的cdr-h1、如seq?id?no:53所示的cdr-h2、如seq?idno:54所示的cdr-h3、如seq?id?no:43所示的cdr-l1、如seq?id?no:44所示的cdr-l2和如seq?id?no:45所示的cdr-l3；

14、(c2)如seq?id?no:55所示的cdr-h1、如seq?id?no:56所示的cdr-h2、如seq?idno:57所示的cdr-h3、如seq?id?no:46所示的cdr-l1、如seq?id?no:47所示的cdr-l2和如seq?id?no:48所示的cdr-l3；

15、(c3)如seq?id?no:58所示的cdr-h1、如seq?id?no:59所示的cdr-h2、如seq?idno:60所示的cdr-h3、如seq?id?no:49所示的cdr-l1、如seq?id?no:50所示的cdr-l2和如seq?id?no:51所示的cdr-l3；

16、(d1)如seq?id?no:72所示的cdr-h1、如seq?id?no:73所示的cdr-h2、如seq?idno:74所示的cdr-h3、如seq?id?no:63所示的cdr-l1、如seq?id?no:64所示的cdr-l2和如seq?id?no:65所示的cdr-l3；

17、(d2)如seq?id?no:75所示的cdr-h1、如seq?id?no:76所示的cdr-h2、如seq?idno:77所示的cdr-h3、如seq?id?no:66所示的cdr-l1、如seq?id?no:67所示的cdr-l2和如seq?id?no:68所示的cdr-l3；

18、(d3)如seq?id?no:78所示的cdr-h1、如seq?id?no:79所示的cdr-h2、如seq?idno:80所示的cdr-h3、如seq?id?no:69所示的cdr-l1、如seq?id?no:70所示的cdr-l2和如seq?id?no:71所示的cdr-l3；

19、(e1)如seq?id?no:92所示的cdr-h1、如seq?id?no:93所示的cdr-h2、如seq?idno:94所示的cdr-h3、如seq?id?no:83所示的cdr-l1、如seq?id?no:84所示的cdr-l2和如seq?id?no:85所示的cdr-l3；

20、(e2)如seq?id?no:95所示的cdr-h1、如seq?id?no:96所示的cdr-h2、如seq?idno:97所示的cdr-h3、如seq?id?no:86所示的cdr-l1、如seq?id?no:87所示的cdr-l2和如seq?id?no:88所示的cdr-l3；

21、(e3)如seq?id?no:98所示的cdr-h1、如seq?id?no:99所示的cdr-h2、如seq?idno:100所示的cdr-h3、如seq?id?no:89所示的cdr-l1、如seq?id?no:90所示的cdr-l2和如seq?id?no:91所示的cdr-l3；

22、(f1)如seq?id?no:112所示的cdr-h1、如seq?id?no:113所示的cdr-h2、如seq?idno:114所示的cdr-h3、如seq?id?no:103所示的cdr-l1、如seq?id?no:104所示的cdr-l2和如seq?id?no:105所示的cdr-l3；

23、(f2)如seq?id?no:115所示的cdr-h1、如seq?id?no:116所示的cdr-h2、如seq?idno:117所示的cdr-h3、如seq?id?no:106所示的cdr-l1、如seq?id?no:107所示的cdr-l2和如seq?id?no:108所示的cdr-l3；或(f3)如seq?id?no:118所示的cdr-h1、如seq?id?no:119所示的cdr-h2、如seq?id?no:120所示的cdr-h3、如seq?id?no:109所示的cdr-l1、如seq?idno:110所示的cdr-l2和如seq?id?no:111所示的cdr-l3。

24、本發(fā)明進一步提供了一種與人tim-3特異性結(jié)合的單克隆抗體，其中所述單克隆抗體包含

25、(a)如seq?id?no:2所示的vh和如seq?id?no:1所示的vl；

26、(b)如seq?id?no:22所示的vh和如seq?id?no:21所示的vl；

27、(c)如seq?id?no:42所示的vh和如seq?id?no:41所示的vl；

28、(d)如seq?id?no:62所示的vh和如seq?id?no:61所示的vl；

29、(e)如seq?id?no:82所示的vh和如seq?id?no:81所示的vl；或

30、(f)如seq?id?no:102所示的vh和如seq?id?no:101所示的vl。

31、本發(fā)明進一步提供了一種與人tim-3特異性結(jié)合的單克隆抗體，其中所述單克隆抗體：

32、i)與抗tim-3參考抗體競爭結(jié)合人tim-3，所述抗tim-3參考抗體包含(a)如seq?idno:2所示的vh和如seq?id?no:1所示的vl；(b)如seq?id?no:22所示的vh和如seq?id?no:21所示的vl；(c)如seq?id?no:42所示的vh和如seq?id?no:41所示的vl；(d)如seq?id?no:62所示的vh和如seq?id?no:61所示的vl；(e)如seq?id?no:82所示的vh和如seq?id?no:81所示的vl；或(f)如seq?id?no:102所示的vh和如seq?id?no:101所示的vl，和/或

33、ii)與抗tim-3參考抗體結(jié)合人tim-3上的相同表位，所述抗tim-3參考抗體包含(a)如seq?id?no:2所示的vh和如seq?id?no:1所示的vl；(b)如seq?id?no:22所示的vh和如seq?id?no:21所示的vl；(c)如seq?id?no:42所示的vh和如seq?id?no:41所示的vl；(d)如seq?id?no:62所示的vh和如seq?id?no:61所示的vl；(e)如seq?id?no:82所示的vh和如seqid?no:81所示的vl；或(f)如seq?id?no:102所示的vh和如seq?id?no:101所示的vl；和/或

34、iii)以小于10ng/ml、小于9ng/ml、小于8ng/ml、小于7ng/ml、小于6ng/ml或小于5ng/ml的ec50值與人tim-3結(jié)合，例如在實施例1所述elisa中；和/或

35、iv)抑制或甚至阻斷tim-3與配體gal-9結(jié)合，例如在實施例2所述elisa中；和/或

36、v)抑制或甚至阻斷tim-3與配體ceacam-1結(jié)合，例如在實施例3所述facs中；和/或

37、iv)以小于25ng/ml、小于10ng/ml、小于9ng/ml、小于8ng/ml、小于7ng/ml、小于6ng/ml或小于5ng/ml的ic50值抑制或甚至阻斷tim-3與配體ptdser結(jié)合，例如在實施例4所述報告基因測定法中。

38、在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體是鼠抗體、嵌合抗體或人源化抗體。

39、在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體是抗原結(jié)合片段，任選地，選自：fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv片段和雙抗體。

40、在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體是全長抗體。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體包含人igg(特別是igg4)重鏈恒定區(qū)，任選地，如seq?id?no:122所示。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體包含人κ輕鏈恒定區(qū)，任選地，如seq?idno:121所示。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體是嵌合抗體(例如鼠/人嵌合抗體)。

41、本發(fā)明提供了一種編碼本發(fā)明的單克隆抗體的核酸。本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的核酸的載體(例如克隆載體或表達載體)。本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的核酸或本發(fā)明的載體的宿主細胞。本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體的方法，所述方法包括培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細胞從而產(chǎn)生所述抗體。在一個實施方案中，所述方法進一步包括從宿主細胞或細胞培養(yǎng)物中回收所述抗體。

42、本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明的單克隆抗體的組合物。

43、本發(fā)明提供了本發(fā)明的單克隆抗體、核酸、載體、宿主細胞或組合物制備用于治療(tim-3陽性)癌癥和病毒感染的藥物的用途。本發(fā)明提供了本發(fā)明的單克隆抗體或組合物制備用于檢測tim-3的試劑或試劑盒的用途。