本發(fā)明屬于植物基因工程，更具體地說，涉及一種調(diào)控植物衰老的mirna及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、micrornas是真核生物中廣泛存在的內(nèi)源性非編碼小rna，主要通過堿基互補配對與靶基因的mrna結(jié)合，引導(dǎo)形成rna沉默復(fù)合體，抑制靶rna的翻譯或者切割靶rna，在轉(zhuǎn)錄后水平負調(diào)控基因的表達。近年來的研究表明，mirnas及其靶點對園藝作物各器官的形態(tài)建成與生長發(fā)育都有重要影響。

2、nac轉(zhuǎn)錄因子是植物中特有的轉(zhuǎn)錄因子家族，一般由保守的n端特殊的dna結(jié)合域以及多樣的c端調(diào)控結(jié)構(gòu)域組成。其中n端由150-160個氨基酸組成，并由a、b、c、d和e這5個子結(jié)構(gòu)域組成，賦予多樣性的功能，而c端為轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域，具有蛋白質(zhì)結(jié)合活性。nac轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用，例如間接或直接調(diào)控植物側(cè)根生長、次生壁形成、葉片衰老、花器官形成、果實發(fā)育等過程。

3、桂花屬木犀科木樨屬，常綠小喬木，是我國十大傳統(tǒng)名花之一。桂花以其馥郁、獨特的香氣在園林綠化中充當(dāng)重要的芳香源植物，廣泛用于香料、制茶、食品、酒釀等方面，觀賞與實用兼?zhèn)?。但是由于花期較短，一般為5~7d，最佳觀賞期和采花期只有2~3d，極大地影響了桂花的觀賞和采收。

4、因此，研究調(diào)控桂花花朵衰老的分子機制對于延長桂花的觀賞期以及花香散發(fā)持續(xù)時間具有重要意義。而桂花全基因組的公布以及small?rna的測序為研究人員從分子生物學(xué)的角度研究調(diào)控桂花花朵衰老這一難題提供了基礎(chǔ)和新的思路。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種mirna在調(diào)控ofnac10基因表達/調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供mirna的前體在調(diào)控ofnac10基因表達/調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供桂花ofnac10基因在調(diào)控植物衰老以及調(diào)控植物體內(nèi)1-氨基環(huán)丙烷羧酸含量中的應(yīng)用。

2、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

3、ofr-mir164a在調(diào)控ofnac10基因表達中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4、ofr-mir164a前體在調(diào)控ofnac10基因表達中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，向植物體內(nèi)共注射ofr-mir164a前體和ofnac10基因，所述ofr-mir164a前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，ofnac10基因的核苷酸序列如seq?idno.3所示。

5、ofr-mir164a前體在調(diào)控ofnac10基因表達中的應(yīng)用，包括：

6、1）構(gòu)建ofr-mir164a前體和靶基因ofnac10的表達載體，即載體35s:ofr-mir164a與35s:ofnac10；

7、2）分別將構(gòu)建的載體35s:ofr-mir164a與35s:ofnac10轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞；

8、3）將35s:ofr-mir164a、35s:ofnac10及35s:psuper1300的菌液按照體積比1：1：1的比例進行混合后，注射到本氏煙草葉片中；

9、4）培育篩選并獲得ofnac10基因表達量顯著下降的轉(zhuǎn)基因本氏煙草植株。

10、ofr-mir164a在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a的核苷酸序列如seq?idno.1所示。

11、ofr-mir164a前體在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，包括：

12、1）構(gòu)建ofr-mir164a前體的表達載體；

13、2）將構(gòu)建的表達載體35s:ofr-mir164a轉(zhuǎn)化到大花煙草中；

14、3）培育篩選并獲得花朵衰老速度顯著下降的轉(zhuǎn)基因大花煙草植株。

15、所述表達載體為植物表達載體。

16、ofnac10基因在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述桂花ofnac10基因的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

17、桂花ofnac10基因在調(diào)控植物體內(nèi)1-氨基環(huán)丙烷羧酸含量中的應(yīng)用，所述桂花ofnac10基因的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

18、相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

19、1）本發(fā)明公開的ofr-mir164a或ofr-mir164a的前體在調(diào)控ofnac10基因表達中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；所述ofr-mir164a的前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。本發(fā)明向本氏煙草體內(nèi)共注射ofr-mir164a前體和靶基因ofnac10；培育篩選并獲得ofnac10基因表達量顯著下降的轉(zhuǎn)基因本氏煙草植株。結(jié)果表明，ofr-mir164a抑制of?nac10的表達。

20、2）本發(fā)明公開的ofr-mir164a或ofr-mir164a的前體在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a的核苷酸序列如seq?id?no.1所示；所述ofr-mir164a的前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。本發(fā)明將ofr-mir164a前體轉(zhuǎn)化到大花煙草體內(nèi)，培育篩選并獲得花朵衰老速度顯著下降的轉(zhuǎn)基因大花煙草植株。結(jié)果表明，ofr-mir164a轉(zhuǎn)基因株系花朵衰老速度與對照組相比明顯緩慢。

21、3）本發(fā)明公開的桂花ofnac10基因在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述桂花ofnac10基因的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。本發(fā)明將桂花ofnac10基因轉(zhuǎn)化到大花煙草體內(nèi)，結(jié)果表明，ofnac10轉(zhuǎn)基因株系的花朵衰老速度稍快于對照組，同時過表達ofnac10基因促進了株系花冠筒內(nèi)acc含量的積累。

技術(shù)特征：

1.ofr-mir164a在調(diào)控ofnac10基因表達中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.ofr-mir164a前體在調(diào)控ofnac10基因表達中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，向植物體內(nèi)共注射ofr-mir164a前體和ofnac10基因，所述ofr-mir164a前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，ofnac10基因的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，包括：

5.ofr-mir164a在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a的核苷酸序列如seq?idno.1所示。

6.ofr-mir164a前體在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述ofr-mir164a前體的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述表達載體為植物表達載體。

9.ofnac10基因在調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述桂花ofnac10基因的核苷酸序列如seqid?no.3所示。

10.桂花ofnac10基因在調(diào)控植物體內(nèi)1-氨基環(huán)丙烷羧酸含量中的應(yīng)用，所述桂花ofnac10基因的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種調(diào)控植物衰老的miRNA及其應(yīng)用，涉及植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開的miRNA或其前體在調(diào)控OfNAC10基因表達/調(diào)控植物衰老中的應(yīng)用，所述miRNA及其前體的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1和2所示。本發(fā)明向本氏煙草體內(nèi)共注射ofr?miR164a前體和靶基因OfNAC10，結(jié)果表明，ofr?miR164a抑制OfNAC10的表達。將ofr?miR164a前體轉(zhuǎn)化到大花煙草體內(nèi)，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因株系花朵衰老速度與對照組相比明顯緩慢。過表達OfNAC10基因加快了大花煙草花朵的衰老速度，并促進了株系花冠筒內(nèi)ACC含量的積累。

技術(shù)研發(fā)人員：楊秀蓮,田清尹,顧恒,任飛燕,方夏萍,岳遠征,王良桂
受保護的技術(shù)使用者：南京林業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15