本發(fā)明屬于生物，具體地，涉及tgf-β在促進細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體中的用途。

背景技術：

1、外泌體是細胞釋放的一種細胞外囊泡，直徑范圍約為40～160nm，是通過細胞膜的內陷形成多囊泡體后釋放到細胞外的。外泌體包含多種細胞成分，包括dna、rna、代謝物以及細胞質和細胞表面蛋白。外泌體在細胞間的信號傳遞中起著重要作用。它們可以將蛋白質、代謝物和核酸等生物分子傳遞給目標細胞，從而影響這些細胞的生物反應。這種機制可能在調節(jié)細胞生存、凋亡和免疫反應等方面發(fā)揮作用。外泌體可能有助于去除細胞內的多余或不必要的成分，從而維持細胞的內環(huán)境穩(wěn)定。外泌體與多種生理和病理過程相關，特別是癌癥進展等。

2、由于外泌體具有免疫原性低、穩(wěn)定性好和靶向能力等優(yōu)點，使其成為理想的藥物遞送系統(tǒng)。特別是利用工程化外泌體通過修飾可以實現(xiàn)更高效、更安全的藥物遞送，負載化療藥物、非編碼rna(ncrna)、蛋白藥物、小分子藥物等，以實現(xiàn)更精確的腫瘤靶向和更強的治療效果。利用工程化外泌體過表達相關腫瘤相關抗原能夠調節(jié)免疫細胞的發(fā)育、成熟和抗腫瘤能力。

3、tgf-β，即轉化生長因子-β，是一種調節(jié)細胞生長和分化的細胞因子，屬于tgf-β超家族。tgf-β是由兩個結構相同或相近的、分子量為12.5kda的亞單位通過二硫鍵連接而成的雙體。在哺乳動物中，至少存在tgf-β1、tgf-β2、tgf-β3、tgf-β1β2四個亞型。

4、腫瘤微環(huán)境中的tgf-β能夠通過腫瘤細胞和免疫細胞兩者來影響腫瘤發(fā)展。在腫瘤細胞的發(fā)展前期，tgf-β能夠通過誘導p15、p21和p27的表達，阻止腫瘤細胞在分裂周期中由g1期向s期過渡以及通過下調c-myc的表達，來抑制腫瘤細胞分裂，抑制腫瘤細胞增殖。另外，tgf-β不僅可以抑制腫瘤細胞增殖，也可以通過作用于凋亡相關效應分子來促進腫瘤細胞凋亡，在腫瘤治療早期接階段利用tgf-β可能作為腫瘤的治療策略。由于外泌體具有免疫原性低、穩(wěn)定性好以及良好的可工程化。在外泌體上構建過表達tgf-β，可以對腫瘤的免疫治療產(chǎn)生較好治療效果，并在腫瘤治療應用中展現(xiàn)出廣泛的潛力，對實際生產(chǎn)具有重要意義。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題至少之一。為此，本發(fā)明提供了tgf-β在促進細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體中的用途。

2、本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：

3、目前腫瘤細胞中產(chǎn)生和/或釋放外泌體的數(shù)量較少，本申請發(fā)現(xiàn)構建過表達tgf-β基因的慢病毒載體，將其轉染腫瘤細胞，能夠獲得穩(wěn)定表達tgf-β的腫瘤細胞株，經(jīng)過實驗驗證后驚喜的發(fā)現(xiàn)能夠提高腫瘤細胞中外泌體的表達量和生長速度，并進一步有效提高腫瘤治療和免疫調節(jié)的有效性。

4、在本發(fā)明的第一個方面，本發(fā)明提出了tgf-β在促進細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體中的用途。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，在細胞中穩(wěn)定表達tgf-β能夠提高外泌體的生長速度，提高單位細胞和單位培養(yǎng)基體積的外泌體得率，從而提高外泌體的產(chǎn)量，增強其抑制腫瘤增殖。

5、在本發(fā)明的第二個方面，本發(fā)明提出了試劑在制備試劑盒中的用途。根據(jù)本發(fā)明實施例的用途，所述試劑用于調控tgf-β的表達或活性，所述試劑盒用于調控細胞中外泌體的產(chǎn)生和/或釋放。如前所述，細胞中穩(wěn)定表達tgf-β能夠提高外泌體的生長速度，提高單位細胞和單位培養(yǎng)基體積的外泌體得率，從而提高外泌體的產(chǎn)量，因此，調控tgf-β的表達或活性的試劑能夠進一步調控細胞中外泌體的產(chǎn)生和/或釋放。

6、在本發(fā)明的第三個方面，本發(fā)明提出了試劑在制備藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明實施例的用途，所述試劑用于促進腫瘤細胞中tgf-β的表達或活性，所述藥物用于治療或預防癌癥或用于增加對腫瘤細胞的免疫治療效果。

7、在本發(fā)明的第四個方面，本發(fā)明提出了一種調節(jié)細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施方案，所述方法包括：將試劑與待處理細胞進行接觸，所述試劑用于調節(jié)tgf-β的表達或活性。根據(jù)本發(fā)明實施例的方法，能夠提高腫瘤細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體的產(chǎn)量。

8、本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。

技術特征：

1.tgf-β在促進細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體中的用途。

2.根據(jù)權利要求1所述的用途，其特征在于，所述tgf-β的核苷酸序列如seq?id?no：1所示或seq?id?no：1所示序列經(jīng)過缺失、替換、插入、倒位和異位一個或者多個堿基獲得的核苷酸序列；

3.試劑在制備試劑盒中的用途，所述試劑用于調控tgf-β的表達或活性，所述試劑盒用于調控細胞中外泌體的產(chǎn)生和/或釋放。

4.根據(jù)權利要求3所述的用途，所述試劑用于促進tgf-β的表達或活性，所述試劑盒用于促進細胞中外泌體的產(chǎn)生和/或釋放；

5.根據(jù)權利要求3所述的用途，所述試劑用于抑制tgf-β的表達或活性，所述試劑盒用于抑制細胞中外泌體的產(chǎn)生和/或釋放；

6.試劑在制備藥物中的用途，所述試劑用于促進腫瘤細胞中tgf-β的表達或活性，所述藥物用于治療和/或或預防癌癥，或用于增加對腫瘤細胞的免疫殺傷效果；

7.一種調節(jié)細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體的方法，其特征在于，包括：將試劑與待處理細胞進行接觸，所述試劑用于調節(jié)tgf-β的表達或活性；

8.根據(jù)權利要求7所述的方法，所述試劑用于促進tgf-β的表達或活性，所述試劑包括用于過表達tgf-β的病毒載體和病毒中的至少之一。

9.根據(jù)權利要求7所述的方法，所述試劑用于抑制tgf-β的表達或活性，所述試劑包括用于抑制tgf-β表達的sirna。

10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，所述sirna針對的靶點的核苷酸序列如seq?id?no：2所示。

技術總結
本發(fā)明提供了TGF?β在促進細胞產(chǎn)生和/或釋放外泌體中的用途。本發(fā)明通過構建過表達TGF?β基因的慢病毒載體，并將其轉染腫瘤細胞，最終獲得了穩(wěn)定表達TGF?β的腫瘤細胞株。根據(jù)本發(fā)明實施方案的細胞株明顯提高了單位細胞和單位培養(yǎng)基體積的外泌體得率，外泌體的產(chǎn)量得到顯著提高，過表達的外泌體可以被腫瘤細胞高效攝取，充分抑制早期腫瘤細胞的增殖。

技術研發(fā)人員：謝偉,丁帥杰,楊標,王怡,楊靜
受保護的技術使用者：合肥綜合性國家科學中心大健康研究院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/4/7