本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體地，本發(fā)明涉及抗cd7的納米抗體及其相關(guān)產(chǎn)品和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、cd7抗原是一種單鏈糖蛋白，是t細(xì)胞發(fā)育過程中的標(biāo)志性抗原分子。除健康人胸腺細(xì)胞、t細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞外，淋系、髓系前體細(xì)胞等造血干祖細(xì)胞也表達(dá)cd7。大量研究顯示在多數(shù)的人t淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤上表達(dá)cd7分子(karube?k,ohshima?k,tsuchiya?t,et?al.non-b,non-t?neoplasms?with?lymphoblast?morphology:furtherclarification?and?classification[j].the?american?journal?of?surgicalpathology,2003,27(10):1366-1374.；shiyong?li,jonathan?juco,karen?p.mann,etal.flow?cytometry?in?the?differential?diagnosis?of?lymphocyte-rich?thymomafrom?precursor?t-cell?acute?lymphoblastic?leukemia/lymphoblastic?lymphoma[j].,american?journal?of?clinical?pathology,2004,121:268-274.)和約10％的急性髓系白血病(acute?myeloidleukemia，aml)上表達(dá)cd7抗原(foon?k?a,todd?rf.immunologic?classification?of?leukemia?and?lymphoma[j].blood.1986,68:1-31)；此外，當(dāng)cd7分子與其對應(yīng)的抗體結(jié)合后會快速地發(fā)生內(nèi)吞作用，這一特性使得cd7可作為一個適合靶向遞送各類功能分子到cd7陽性細(xì)胞內(nèi)的抗原受體；相關(guān)研究還表明人體內(nèi)存在一群cd7陰性的t淋巴細(xì)胞群，這一群細(xì)胞可以維持人體正常的免疫功能，避免了使用cd7納米抗體相關(guān)的免疫細(xì)胞清除全部cd7陽性細(xì)胞而造成的免疫功能丟失，可見靶向cd7是一個極具潛力的抗腫瘤方向。

2、嵌合抗原受體修飾t細(xì)胞(chimeric?antigen?receptor?modification?t?cells，car-t)和嵌合抗原受體修飾nk細(xì)胞(chimeric?antigen?receptor?modification?nkcells，car-nk)免疫療法是目前研究進(jìn)展最為迅速的兩種腫瘤細(xì)胞免疫療法，而car-t/car-nk細(xì)胞的有效激活均嚴(yán)重依賴識別腫瘤相關(guān)抗原的抗體的特異性以及抗原結(jié)合的親和力高低等性質(zhì)。所以在目前car-t/car-nk細(xì)胞胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)的設(shè)計(jì)已經(jīng)趨于成熟的現(xiàn)狀下，抗原結(jié)合區(qū)的設(shè)計(jì)成為新型car-t技術(shù)開發(fā)的重點(diǎn)和關(guān)鍵。駱駝科(駱駝、羊駝)或鯊魚體內(nèi)存在一種天然缺乏輕鏈的重鏈抗體(heavy?chain?antibody，hcab)，該抗體只包含一個重鏈可變區(qū)和兩個常規(guī)的ch2與ch3區(qū)。其重鏈可變區(qū)具有與重鏈抗體相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性和抗原結(jié)合活性，其大小僅為2.4×4nm，是能夠結(jié)合抗原的最小片段，稱為單域抗體(variabledomain?of?heavy?chain?of?heavy-chain?antibody，vhh)或納米抗體。與傳統(tǒng)抗體相比，vhh單域抗體分子量小且表達(dá)量高，化學(xué)穩(wěn)定性好，親和力高并且與人源抗體同源性高，免疫原性低。分子量小易于進(jìn)行基因工程改造，構(gòu)建雙重或多重特異性的單域抗體組合，達(dá)到一個分子多靶點(diǎn)或多種功能的效果。vhh組織滲透性好，在進(jìn)行腫瘤治療時(shí)，具有接觸到不能被常規(guī)抗體接觸的較為隱蔽的靶點(diǎn)的可能性。正由于這些優(yōu)點(diǎn)，利用單域抗體作為car的抗原結(jié)合區(qū)進(jìn)行car修飾及car-t/car-nk細(xì)胞療法能夠?yàn)楸绢I(lǐng)域提供全新的腫瘤治療策略。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明的目的在于為本領(lǐng)域提供抗cd7的納米抗體及其相關(guān)產(chǎn)品和應(yīng)用。

2、本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明的第一方面提供了抗cd7納米抗體。

4、進(jìn)一步，所述納米抗體為vhh01、vhh03、vhh04、vhh06、vhh07、vhh08、vhh09、vhh10、vhh12、vhh13、vhh14、vhh15、vhh16、vhh17、vhh18、vhh19或vhh20中的至少一種；

5、優(yōu)選地，所述vhh01的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:3、seq?idno:5、seq?id?no:7所示；

6、優(yōu)選地，所述vhh03的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:11、seq?idno:13、seq?id?no:15所示；

7、優(yōu)選地，所述vhh04的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:19、seq?idno:21、seq?id?no:23所示；

8、優(yōu)選地，所述vhh06的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:27、seq?idno:29、seq?id?no:31所示；

9、優(yōu)選地，所述vhh07的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:35、seq?idno:37、seq?id?no:39所示；

10、優(yōu)選地，所述vhh08的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:43、seq?idno:45、seq?id?no:47所示；

11、優(yōu)選地，所述vhh09的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:51、seq?idno:53、seq?id?no:55所示；

12、優(yōu)選地，所述vhh10的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:59、seq?idno:61、seq?id?no:63所示；

13、優(yōu)選地，所述vhh12的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:67、seq?idno:69、seq?id?no:71所示；

14、優(yōu)選地，所述vhh13的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:75、seq?idno:77、seq?id?no:79所示；

15、優(yōu)選地，所述vhh14的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:83、seq?idno:85、seq?id?no:87所示；

16、優(yōu)選地，所述vhh15的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:91、seq?idno:93、seq?id?no:95所示；

17、優(yōu)選地，所述vhh16的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:99、seq?idno:101、seq?id?no:103所示；

18、優(yōu)選地，所述vhh17的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:107、seqid?no:109、seq?id?no:111所示；

19、優(yōu)選地，所述vhh18的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:115、seqid?no:117、seq?id?no:119所示；

20、優(yōu)選地，所述vhh19的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:123、seqid?no:125、seq?id?no:127所示；

21、優(yōu)選地，所述vhh20的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:131、seqid?no:133、seq?id?no:135所示；

22、本發(fā)明所述的納米抗體vhh01、vhh03、vhh04、vhh06、vhh07、vhh08、vhh09、vhh10、vhh12、vhh13、vhh14、vhh15、vhh16、vhh17、vhh18、vhh19或vhh20的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列還分別包括與對應(yīng)納米抗體cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列。

23、更優(yōu)選地，所述vhh01的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:4、seqid?no:6、seq?id?no:8所示；

24、更優(yōu)選地，所述vhh03的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:12、seqid?no:14、seq?id?no:16所示；

25、更優(yōu)選地，所述vhh04的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:20、seqid?no:22、seq?id?no:24所示；

26、更優(yōu)選地，所述vhh06的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:28、seqid?no:30、seq?id?no:32所示；

27、更優(yōu)選地，所述vhh07的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:36、seqid?no:38、seq?id?no:40所示；

28、更優(yōu)選地，所述vhh08的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:44、seqid?no:46、seq?id?no:48所示；

29、更優(yōu)選地，所述vhh09的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:52、seqid?no:54、seq?id?no:56所示；

30、更優(yōu)選地，所述vhh10的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:60、seqid?no:62、seq?id?no:64所示；

31、更優(yōu)選地，所述vhh12的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:68、seqid?no:70、seq?id?no:72所示；

32、更優(yōu)選地，所述vhh13的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:76、seqid?no:78、seq?id?no:80所示；

33、更優(yōu)選地，所述vhh14的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:84、seqid?no:86、seq?id?no:88所示；

34、更優(yōu)選地，所述vhh15的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:92、seqid?no:94、seq?id?no:96所示；

35、更優(yōu)選地，所述vhh16的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:100、seqid?no:102、seq?id?no:104所示；

36、更優(yōu)選地，所述vhh17的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:108、seqid?no:110、seq?id?no:112所示；

37、更優(yōu)選地，所述vhh18的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:116、seqid?no:118、seq?id?no:120所示；

38、更優(yōu)選地，所述vhh19的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:124、seqid?no:126、seq?id?no:128所示；

39、更優(yōu)選地，所述vhh20的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:132、seqid?no:134、seq?id?no:136所示；

40、本發(fā)明所述的納米抗體vhh01、vhh03、vhh04、vhh06、vhh07、vhh08、vhh09、vhh10、vhh12、vhh13、vhh14、vhh15、vhh16、vhh17、vhh18、vhh19或vhh20的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列還分別包括與對應(yīng)納米抗體cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列。

41、最優(yōu)選地，所述vhh01、vhh03、vhh04、vhh06、vhh07、vhh08、vhh09、vhh10、vhh12、vhh13、vhh14、vhh15、vhh16、vhh17、vhh18、vhh19、vhh20的氨基酸序列分別如seq?id?no:1、seq?id?no:9、seq?id?no:17、seq?id?no:25、seq?id?no:33、seq?id?no:41、seq?id?no:49、seq?id?no:57、seq?id?no:65、seq?id?no:73、seq?id?no:81、seq?id?no:89、seq?id?no:97、seq?id?no:105、seq?id?no:113、seq?id?no:121、seq?id?no:129所示或分別為與seqid?no:1、seq?id?no:9、seq?id?no:17、seq?id?no:25、seq?id?no:33、seq?id?no:41、seqid?no:49、seq?id?no:57、seq?id?no:65、seq?id?no:73、seq?id?no:81、seq?id?no:89、seqid?no:97、seq?id?no:105、seq?id?no:113、seq?id?no:121、seq?id?no:129具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

42、最優(yōu)選地，所述vhh01、vhh03、vhh04、vhh06、vhh07、vhh08、vhh09、vhh10、vhh12、vhh13、vhh14、vhh15、vhh16、vhh17、vhh18、vhh19、vhh20的核苷酸序列分別如seq?id?no:2、seq?id?no:10、seq?id?no:18、seq?id?no:26、seq?id?no:34、seq?id?no:42、seq?id?no:50、seq?id?no:58、seq?id?no:66、seq?id?no:74、seq?id?no:82、seq?id?no:90、seq?idno:98、seq?id?no:106、seq?id?no:114、seq?id?no:122、seq?id?no:130所示或分別為與seq?id?no:2、seq?id?no:10、seq?id?no:18、seq?id?no:26、seq?id?no:34、seq?id?no:42、seq?id?no:50、seq?id?no:58、seq?id?no:66、seq?id?no:74、seq?id?no:82、seq?id?no:90、seq?id?no:98、seq?id?no:106、seq?id?no:114、seq?id?no:122、seq?id?no:130具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列。

43、進(jìn)一步，所述vhh01、vhh03、vhh04、vhh06、vhh07、vhh08、vhh09、vhh10、vhh12、vhh13、vhh14、vhh15、vhh16、vhh17、vhh18、vhh19或vhh20中的一種或多種的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列或核苷酸序列任意組合得到的納米抗體同樣在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。

44、進(jìn)一步，cd7是t細(xì)胞表面一個非常穩(wěn)定的標(biāo)志物，無論是幼稚的t細(xì)胞還是成熟的t細(xì)胞均會表達(dá)cd7，所以不管是幼稚t細(xì)胞腫瘤(t-all/lbl/nkt細(xì)胞白血病)患者，還是成熟t細(xì)胞腫瘤(外周t細(xì)胞淋巴瘤、nkt細(xì)胞淋巴瘤、間變大細(xì)胞淋巴瘤)患者，基本都高表達(dá)cd7，因此，針對該靶點(diǎn)的car-t治療t系血液腫瘤是目前臨床上發(fā)展最為迅速的技術(shù)之一。

45、本發(fā)明的第二方面提供了人源化的抗cd7納米抗體。

46、進(jìn)一步，所述人源化的抗cd7納米抗體為以通用人源化框架h-nbbcii10fgla為參考，并通過與dp-47進(jìn)行比對，對納米抗體關(guān)鍵位置的殘基進(jìn)行人源化改造后得到的；

47、優(yōu)選地，所述人源化的抗cd7納米抗體為hvhh01、hvhh03、hvhh04、hvhh06、hvhh07、hvhh08、hvhh09、hvhh10、hvhh12、hvhh13、hvhh14、hvhh15、hvhh16、hvhh17、hvhh18、hvhh19或hvhh20中的至少一種；

48、更優(yōu)選地，所述hvhh06的cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no:139、seq?id?no:141、seq?id?no:143所示或分別為與seq?id?no:139、seq?id?no:141、seq?idno:143具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；最優(yōu)選地，所述hvhh06的cdr1、cdr2、cdr3的核苷酸序列分別如seq?id?no:140、seqid?no:142、seq?id?no:144所示或分別為與seq?id?no:140、seq?id?no:142、seq?id?no:144具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

49、最優(yōu)選地，所述hvhh06的氨基酸序列如seq?id?no:137所示或與seq?id?no:137具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；最優(yōu)選地，所述hvhh06的核苷酸序列如seq?id?no:138所示或與seq?id?no:138具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列。

50、本發(fā)明的第三方面提供了基于單納米抗體的嵌合抗原受體。

51、進(jìn)一步，所述嵌合抗原受體包含本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意一種；

52、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含跨膜結(jié)構(gòu)域；

53、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；

54、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含鉸鏈區(qū)；

55、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含信號肽；

56、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含共刺激信號結(jié)構(gòu)域；

57、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含啟動子ef1α、自斷裂肽t2a、檢測標(biāo)簽/輔助功能元件tegfr；

58、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含tegfr信號肽；

59、更優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域包括下列分子的跨膜結(jié)構(gòu)域：cd8α、cd28、igg1、igg4、4-1bb，pd-1、cd34、ox40、cd3ε、il-2受體、il-7受體、il-11受體；

60、更優(yōu)選地，所述胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括下列分子的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域：cd3ζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、tcrζ、cd4、cd5、cd8、cd21、cd22、cd79a、cd79b、cd278、fcεri、dap10、dap12、cd66d；

61、更優(yōu)選地，所述鉸鏈區(qū)包括下列分子的鉸鏈區(qū)：cd8α、cd28、igg1、igg4、4-1bb，pd-1、cd34、ox40、cd3ε、il-2受體、il-7受體、il-11受體；

62、更優(yōu)選地，所述信號肽包括下列分子的信號肽：t細(xì)胞受體的α鏈及β鏈、cd3ζ、cd3ε、cd4、cd5、cd8、cd9、cd28、cd16、cd22、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、gitr、gm-csf；

63、更優(yōu)選地，所述共刺激信號結(jié)構(gòu)域包括下列分子的共刺激信號結(jié)構(gòu)域：4-1bb(cd137)、cd27、cd19、cd4、cd28、icos(cd278)、cd8α、cd8β、baffr、hvem、light、kirds2、slamf7、nkp30、nkp46、cd40、cds、icam-1、b7-h3、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、cd2、cd7、cd226；

64、更優(yōu)選地，所述啟動子并不局限于ef1α啟動子，還包括：cmv啟動子、efs啟動子、cag啟動子、cbh啟動子、sffv啟動子、mscv啟動子、sv40啟動子、mpgk啟動子、hpgk啟動子、ubc啟動子；

65、更優(yōu)選地，所述自斷裂肽并不局限于t2a，還包括：p2a、e2a、f2a；

66、更優(yōu)選地，所述檢測標(biāo)簽/輔助功能元件并不局限于tegfr，還包括：tcd34、tcd19、tcd20、tcd22、免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ctla-4、pd-1/pd-l1、lag-3、tim-3、tigit、cd226、cd155、cd47、b7-h3、b7-h4)納米抗體、細(xì)胞因子及其受體(il2、il2受體、il7、il7受體、il15、il15受體)；

67、最優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域?yàn)閏d8α跨膜結(jié)構(gòu)域；

68、最優(yōu)選地，所述胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域?yàn)閏d3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；

69、最優(yōu)選地，所述鉸鏈區(qū)為cd8α鉸鏈區(qū)；

70、最優(yōu)選地，所述共刺激信號結(jié)構(gòu)域?yàn)?-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域；

71、最優(yōu)選地，所述信號肽的氨基酸序列如seq?id?no:145所示或與seq?id?no:145具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

72、最優(yōu)選地，所述信號肽的核苷酸序列如seq?id?no:146所示或與seq?id?no:146具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

73、最優(yōu)選地，所述cd8α鉸鏈區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:147所示或與seq?id?no:147具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

74、最優(yōu)選地，所述cd8α鉸鏈區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no:148所示或與seq?id?no:148具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

75、最優(yōu)選地，所述cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如seq?id?no:149所示或與seq?idno:149具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

76、最優(yōu)選地，所述cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列如seq?id?no:150所示或與seq?idno:150具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

77、最優(yōu)選地，所述4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如seq?id?no:151所示或與seq?id?no:151具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

78、最優(yōu)選地，所述4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列如seq?id?no:152所示或與seq?id?no:152具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

79、最優(yōu)選地，所述cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如seq?id?no:153所示或與seq?id?no:153具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

80、最優(yōu)選地，所述cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列如seq?id?no:154所示或與seq?id?no:154具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

81、最優(yōu)選地，所述t2a的氨基酸序列如seq?id?no:155所示或與seq?id?no:155具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

82、最優(yōu)選地，所述t2a的核苷酸序列如seq?id?no:156所示或與seq?id?no:156具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

83、最優(yōu)選地，所述ef1α的核苷酸序列如seq?id?no:157所示或與seq?id?no:157具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

84、最優(yōu)選地，所述tegfr信號肽的氨基酸序列如seq?id?no:158所示或與seq?id?no:158具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

85、最優(yōu)選地，所述tegfr信號肽的核苷酸序列如seq?id?no:159所示或與seq?id?no:159具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

86、最優(yōu)選地，所述tegfr的氨基酸序列如seq?id?no:160所示或與seq?id?no:160具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的氨基酸序列；

87、最優(yōu)選地，所述tegfr的核苷酸序列如seq?id?no:161所示或與seq?id?no:161具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列；

88、最優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體為ef1α、信號肽、本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意一種、cd8α鉸鏈區(qū)、cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域、cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、t2a、tegfr信號肽、tegfr依次串聯(lián)得到。

89、本發(fā)明的第四方面提供了基于雙納米抗體的嵌合抗原受體。

90、進(jìn)一步，所述嵌合抗原受體包含本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意兩種；

91、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含跨膜結(jié)構(gòu)域；

92、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；

93、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含鉸鏈區(qū)；

94、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含信號肽；

95、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含共刺激信號結(jié)構(gòu)域；

96、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含啟動子ef1α、自斷裂肽t2a、檢測標(biāo)簽/輔助功能元件tegfr；

97、優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包含tegfr信號肽；

98、更優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域包括下列分子的跨膜結(jié)構(gòu)域：cd8α、cd28、igg1、igg4、4-1bb，pd-1、cd34、ox40、cd3ε、il-2受體、il-7受體、il-11受體；

99、更優(yōu)選地，所述胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括下列分子的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域：cd3ζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、tcrζ、cd4、cd5、cd8、cd21、cd22、cd79a、cd79b、cd278、fcεri、dap10、dap12、cd66d；

100、更優(yōu)選地，所述鉸鏈區(qū)包括下列分子的鉸鏈區(qū)：cd8α、cd28、igg1、igg4、4-1bb，pd-1、cd34、ox40、cd3ε、il-2受體、il-7受體、il-11受體；

101、更優(yōu)選地，所述信號肽包括下列分子的信號肽：t細(xì)胞受體的α鏈及β鏈、cd3ζ、cd3ε、cd4、cd5、cd8、cd9、cd28、cd16、cd22、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、gitr、gm-csf；

102、更優(yōu)選地，所述共刺激信號結(jié)構(gòu)域包括下列分子的共刺激信號結(jié)構(gòu)域：4-1bb(cd137)、cd27、cd19、cd4、cd28、icos(cd278)、cd8α、cd8β、baffr、hvem、light、kirds2、slamf7、nkp30、nkp46、cd40、cds、icam-1、b7-h3、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、cd2、cd7、cd226；

103、更優(yōu)選地，所述啟動子并不局限于ef1α啟動子，還包括：cmv啟動子、efs啟動子、cag啟動子、cbh啟動子、sffv啟動子、mscv啟動子、sv40啟動子、mpgk啟動子、hpgk啟動子、ubc啟動子；

104、更優(yōu)選地，所述自斷裂肽并不局限于t2a，還包括：p2a、e2a、f2a；

105、更優(yōu)選地，所述檢測標(biāo)簽/輔助功能元件并不局限于tegfr，還包括：tcd34、tcd19、tcd20、tcd22、免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ctla-4、pd-1/pd-l1、lag-3、tim-3、tigit、cd226、cd155、cd47、b7-h3、b7-h4)納米抗體、細(xì)胞因子及其受體(il2、il2受體、il7、il7受體、il15、il15受體)；

106、最優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域?yàn)閏d8α跨膜結(jié)構(gòu)域；

107、最優(yōu)選地，所述胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域?yàn)閏d3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；

108、最優(yōu)選地，所述鉸鏈區(qū)為cd8α鉸鏈區(qū)；

109、最優(yōu)選地，所述共刺激信號結(jié)構(gòu)域?yàn)?-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域；

110、最優(yōu)選地，所述本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意兩種納米抗體通過連接肽linker進(jìn)行連接；

111、最優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體為ef1α、信號肽、本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意兩種、cd8α鉸鏈區(qū)、cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域、cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、t2a、tegfr信號肽、tegfr依次串聯(lián)得到；

112、最優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體為ef1α、信號肽、本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意一種、linker、本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體中的任意一種、cd8α鉸鏈區(qū)、cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域、cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、t2a、tegfr信號肽、tegfr依次串聯(lián)得到；

113、最優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體為ef1α、信號肽、本發(fā)明第一方面中所述的vhh06、linker、本發(fā)明第一方面中所述的vhh03、cd8α鉸鏈區(qū)、cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域、cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、t2a、tegfr信號肽、tegfr依次串聯(lián)得到。

114、最優(yōu)選地，所述信號肽、cd8α鉸鏈區(qū)、cd8α跨膜結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激信號結(jié)構(gòu)域、cd3ζ胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域、t2a、ef1α、tegfr信號肽、tegfr的氨基酸序列和核苷酸序列如前所述。

115、本發(fā)明的第五方面提供了核酸分子。

116、進(jìn)一步，所述核酸分子包含編碼本發(fā)明第一方面所述的納米抗體、本發(fā)明第二方面所述的納米抗體、本發(fā)明第三方面所述的嵌合抗原受體或本發(fā)明第四方面所述的嵌合抗原受體的核苷酸序列；

117、優(yōu)選地，所述核苷酸序列如seq?id?no:2、seq?id?no:10、seq?id?no:18、seq?idno:26、seq?id?no:34、seq?id?no:42、seq?id?no:50、seq?id?no:58、seq?id?no:66、seq?idno:74、seq?id?no:82、seq?id?no:90、seq?id?no:98、seq?id?no:106、seq?id?no:114、seqid?no:122、seq?id?no:130所示或與所述序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列。

118、本發(fā)明的第六方面提供了重組表達(dá)載體。

119、進(jìn)一步，所述重組表達(dá)載體包含本發(fā)明第五方面所述的核酸分子；

120、優(yōu)選地，所述表達(dá)載體包括dna載體、rna載體、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子載體、crispr/cas9載體、或病毒載體；更優(yōu)選地，所述病毒載體包含慢病毒載體、腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。

121、本發(fā)明的第七方面提供了經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞。

122、進(jìn)一步，所述經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞表達(dá)本發(fā)明第一方面所述的納米抗體、本發(fā)明第二方面所述的納米抗體、本發(fā)明第三方面所述的嵌合抗原受體或本發(fā)明第四方面所述的嵌合抗原受體；

123、優(yōu)選地，所述經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞包含本發(fā)明第六方面所述的重組表達(dá)載體；

124、優(yōu)選地，所述經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞包含經(jīng)工程改造的免疫細(xì)胞；更優(yōu)選地，所述經(jīng)工程改造的免疫細(xì)胞包含t細(xì)胞、nk細(xì)胞、inkt細(xì)胞、ctl細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、nkt細(xì)胞。

125、本發(fā)明的第八方面提供了一種綴合物或藥物組合物或試劑盒或檢測cd7蛋白或其抗原片段的試劑。

126、進(jìn)一步，所述綴合物包含本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體、以及連接于所述納米抗體的修飾部分，所述修飾部分包括可檢測的標(biāo)記、治療劑；

127、優(yōu)選地，所述可檢測的標(biāo)記包括酶、放射性核素、熒光染料、發(fā)光物質(zhì)、生物素，

128、優(yōu)選地，所述治療劑包括具有抗腫瘤活性的藥物或細(xì)胞毒劑；更優(yōu)選地，所述具有抗腫瘤活性的藥物包括化療藥物、抗腫瘤血管生成藥物、免疫檢查點(diǎn)抑制劑；最優(yōu)選地，所述化療藥物包括紫杉烷類化療藥物、長春花堿類化療藥物、金屬鉑類化療藥物、蒽環(huán)類化療藥物、抗葉酸類化療藥物、氮芥類化療藥物、鬼臼生物堿類化療藥物；最優(yōu)選地，所述紫杉烷類化療藥物包括紫杉醇、紫杉醇脂質(zhì)體、白蛋白結(jié)合型紫杉醇、多西他賽；最優(yōu)選地，所述長春花堿類化療藥物包括長春新堿、長春地辛、長春花堿；最優(yōu)選地，所述金屬鉑類化療藥物包括順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、奈達(dá)鉑、洛鉑；最優(yōu)選地，所述蒽環(huán)類化療藥物包括表柔比星、吡柔比星、阿霉素、表阿霉素；最優(yōu)選地，所述抗葉酸類化療藥物包括甲氨蝶呤、培美曲塞二鈉；最優(yōu)選地，所述氮芥類化療藥物包括環(huán)磷酰胺、苯達(dá)莫司??；最優(yōu)選地，所述鬼臼生物堿類化療藥物包括依托泊苷、替尼泊苷；最優(yōu)選地，所述抗腫瘤血管生成藥物包括小分子多靶點(diǎn)血管生成抑制劑、大分子單靶點(diǎn)血管生成抑制劑、內(nèi)源性泛靶點(diǎn)血管生成抑制劑；最優(yōu)選地，所述小分子多靶點(diǎn)血管生成抑制劑包括索拉非尼、舒尼替尼、培唑帕尼、凡德他尼、卡博替尼、瑞戈非尼、阿昔替尼、尼達(dá)尼布、樂伐替尼、阿帕替尼、安羅替尼、呋喹替尼、厄達(dá)替尼；最優(yōu)選地，所述大分子單靶點(diǎn)血管生成抑制劑包括貝伐珠單抗、雷莫蘆單抗、阿柏西普；最優(yōu)選地，所述內(nèi)源性泛靶點(diǎn)血管生成抑制劑包括恩度；最優(yōu)選地，所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑包括伊匹木單抗、帕博利株單抗、納武利尤單抗、阿替利珠單抗、度伐利尤單抗、阿維魯單抗、信迪利單抗；更優(yōu)選地，所述細(xì)胞毒劑包括生物堿類細(xì)胞毒劑、抗生素類細(xì)胞毒劑；最優(yōu)選地，所述生物堿類細(xì)胞毒劑包括氫溴酸山莨菪堿、高三尖杉酯堿；最優(yōu)選地，所述抗生素類細(xì)胞毒劑包括伊達(dá)比星、鹽酸多柔比星。

129、優(yōu)選地，所述藥物組合物或試劑盒包含本發(fā)明第一方面所述的納米抗體、本發(fā)明第二方面所述的納米抗體、本發(fā)明第三方面所述的嵌合抗原受體、本發(fā)明第四方面所述的嵌合抗原受體、本發(fā)明第五方面所述的核酸分子、本發(fā)明第六方面所述的重組表達(dá)載體、本發(fā)明第七方面所述的經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞或所述綴合物；

130、優(yōu)選地，所述檢測cd7蛋白或其抗原片段的試劑包含本發(fā)明第一方面所述的納米抗體、本發(fā)明第二方面所述的納米抗體或所述綴合物。

131、進(jìn)一步，所述藥物組合物中還包含另外的藥學(xué)活性劑；優(yōu)選地，所述另外的藥學(xué)活性劑包括另外的抗體、融合蛋白或藥物(如抗腫瘤藥物，如用于放療的藥物或化療藥物)。

132、進(jìn)一步，所述藥物組合物中還包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。

133、本發(fā)明的第九方面提供了如下任一種方法：

134、(1)一種非診斷目的的檢測cd7蛋白或其抗原片段的方法，所述方法包括如下步驟：

135、①獲取含有cd7蛋白或其抗原片段的樣品；

136、②將步驟①收集的樣品與本發(fā)明第一方面所述的納米抗體、本發(fā)明第二方面所述的納米抗體或本發(fā)明第八方面所述的綴合物接觸；

137、③檢測抗體-抗原復(fù)合物的存在；

138、(2)一種本發(fā)明第七方面所述的經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞的制備方法，所述方法包括如下步驟：將本發(fā)明第六方面所述的重組表達(dá)載體引入到宿主細(xì)胞中；

139、優(yōu)選地，所述引入的方法包括脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法、微注射、電穿孔、dna載體、rna載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、慢病毒載體、痘病毒載體、單純皰疹病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體。

140、本發(fā)明的第十方面提供了如下任一方面的應(yīng)用：

141、(1)本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體在檢測cd7蛋白或其抗原片段中的應(yīng)用；

142、(2)本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或本發(fā)明第二方面所述的納米抗體在制備用于檢測cd7蛋白或其抗原片段的試劑或試劑盒中的應(yīng)用；

143、(3)本發(fā)明第一方面所述的納米抗體、本發(fā)明第二方面所述的納米抗體、本發(fā)明第三方面所述的嵌合抗原受體、本發(fā)明第四方面所述的嵌合抗原受體、本發(fā)明第五方面所述的核酸分子、本發(fā)明第六方面所述的重組表達(dá)載體或本發(fā)明第七方面所述的經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；

144、(4)本發(fā)明第五方面所述的核酸分子或本發(fā)明第六方面所述的重組表達(dá)載體在制備經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞中的應(yīng)用，所述經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞為本發(fā)明第七方面所述的經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞；

145、優(yōu)選地，所述抗腫瘤藥物包括抗腫瘤免疫細(xì)胞治療劑、抗腫瘤的基因治療藥物；

146、優(yōu)選地，所述腫瘤為表達(dá)cd7的腫瘤；

147、更優(yōu)選地，所述腫瘤為t淋巴細(xì)胞系血液腫瘤；

148、最優(yōu)選地，所述腫瘤包括急性髓系白血病(aml)、急性淋巴細(xì)胞白血病(all)、淋巴母細(xì)胞淋巴瘤(lbl)、nkt細(xì)胞白血病、外周t細(xì)胞淋巴瘤(nhl)、nkt細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(alcl)。

149、本發(fā)明還提供了一種預(yù)防和/或治療患有表達(dá)cd7腫瘤的受試者的方法。

150、進(jìn)一步，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本發(fā)明第七方面所述的經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞或本發(fā)明第八方面所述的藥物組合物。

151、進(jìn)一步，所述經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞包含表達(dá)抗cd7的本發(fā)明第三方面所述的基于單納米抗體的嵌合抗原受體(car)或本發(fā)明第四方面所述的基于雙納米抗體的嵌合抗原受體的免疫細(xì)胞；

152、優(yōu)選地，所述免疫細(xì)胞包括t細(xì)胞、nk細(xì)胞、inkt細(xì)胞、ctl細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、nkt細(xì)胞；更優(yōu)選地，所述經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞為car-t細(xì)胞。

153、進(jìn)一步，選自以下的量給受試者施用所述的經(jīng)工程改造的宿主細(xì)胞：

154、(1)若所述受試者的體重小于100公斤(kg)并且年齡小于18歲，則從為或約0.05×106個car-t細(xì)胞/kg所述受試者的體重至為或約5.0×107個car-t細(xì)胞/kg所述受試者的體重；

155、(2)如果所述受試者的體重為或大于100公斤(kg)或年齡大于18歲，則從為或約0.05×106個car-t細(xì)胞/kg所述受試者的體重至為或約5.0×108個car-t細(xì)胞/kg所述受試者的體重。

156、在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述car-t細(xì)胞療法是通過自體轉(zhuǎn)移進(jìn)行的，其中從接受細(xì)胞療法的受試者或從源自這種受試者的樣品中分離和/或以其他方式制備細(xì)胞。因此，在一些方面，細(xì)胞源自需要治療的受試者(例如，患者)，并且在分離和處理后將細(xì)胞施用于同一受試者。

157、在本發(fā)明的另一些實(shí)施方案中，所述car-t細(xì)胞療法是通過同種異體轉(zhuǎn)移進(jìn)行，其中從將要接受或最終接受細(xì)胞療法的受試者以外的受試者(例如，第一受試者)分離和/或以其他方式制備細(xì)胞。在此類實(shí)施方案中，然后將細(xì)胞施用于相同物種的不同受試者，例如第二受試者。在一些實(shí)施方案中，所述第一和第二受試者在遺傳上是相同的。在一些實(shí)施方案中，所述第一和第二受試者在遺傳上是相似的。在一些實(shí)施方案中，所述第二受試者與所述第一受試者表達(dá)相同的hla類別或超類型。

158、在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，可以將所述car-t細(xì)胞通過任何合適的方式施用，例如通過推注輸注，通過注射例如靜脈內(nèi)或皮下注射、眼內(nèi)注射、眼周注射、視網(wǎng)膜下注射、玻璃體內(nèi)注射、經(jīng)中隔注射、鞏膜下注射、脈絡(luò)膜內(nèi)注射、前房注射、結(jié)膜下(subconjectval)注射、眼球筋膜囊下(sub-tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近鞏膜(posteriorjuxtascleral)遞送。在一些實(shí)施方案中，將它們通過腸胃外、肺內(nèi)和鼻內(nèi)以及(如果需要用于局部治療的話)病灶內(nèi)施用來施用。腸胃外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下施用。在一些實(shí)施方案中，給定劑量是通過所述細(xì)胞的單次推注施用來施用。在一些實(shí)施方案中，給定劑量通過例如在不超過3天的時(shí)間段內(nèi)細(xì)胞的多次推注施用，或通過細(xì)胞的連續(xù)輸注施用來施用。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞劑量或任何其他療法(例如，淋巴細(xì)胞清除療法、干預(yù)療法和/或組合療法)的施用是通過門診遞送進(jìn)行的。

159、進(jìn)一步，對于疾病的預(yù)防或治療，適當(dāng)?shù)膭┝靠扇Q于要治療的疾病類型、細(xì)胞的類型、疾病的嚴(yán)重程度和病程、是針對預(yù)防目的還是針對治療目的而施用細(xì)胞、先前治療、受試者的臨床病史和對細(xì)胞的反應(yīng)以及主治醫(yī)師的決斷。在一些實(shí)施方案中，適合將藥物組合物和/或car-t細(xì)胞一次或在一系列治療中施用至受試者。

160、在一些實(shí)施方案中，所述car-t細(xì)胞是作為組合治療的一部分來施用，如與另一種或另外的治療性干預(yù)(如抗體或工程化細(xì)胞或受體或藥劑、如細(xì)胞毒性劑或治療劑)同時(shí)或以任何順序依序施用。在一些實(shí)施方案中，將所述car-t細(xì)胞與一種或多種另外的治療劑共同施用或與另一種治療性干預(yù)聯(lián)合施用(同時(shí)或以任何順序依次施用)。在一些實(shí)施方案中，所述另外的治療劑是現(xiàn)有技術(shù)中本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的可用于腫瘤干預(yù)治療的任何干預(yù)制劑或藥劑，在一些實(shí)施方案中，在所述一種或多種另外的治療劑之前施用所述細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，在所述一種或多種另外的治療劑之后施用所述細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，所述一種或多種另外的藥劑包括細(xì)胞因子如il-2，以例如增強(qiáng)持久性。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括施用化學(xué)治療劑。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括在所述施用之前施用化學(xué)治療劑(例如，調(diào)理性化學(xué)治療劑)，例如以減小腫瘤負(fù)荷。在一些實(shí)施方案中，用免疫清除(例如，淋巴細(xì)胞清除)療法預(yù)調(diào)理受試者可以改善細(xì)胞療法的效果。

161、在一些實(shí)施方案中，所提供的方法和應(yīng)用中涉及的施用car-t細(xì)胞或藥物組合物的全部或一部分，所述細(xì)胞如表達(dá)本發(fā)明第二方面所述的嵌合抗原受體car或本發(fā)明第三方面所述的嵌合抗原受體的工程化免疫細(xì)胞，在一些實(shí)施方案中，向受試者施用特定量或數(shù)量的細(xì)胞，或特定量的含有所述特定量或數(shù)量的細(xì)胞的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，向受試者施用一個或多個細(xì)胞劑量，其含有特定量或數(shù)量的細(xì)胞或特定量的含有所述特定量或數(shù)量的細(xì)胞的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)所提供方法和/或用所提供的制品或組合物將一定劑量的細(xì)胞施用至受試者。在一些實(shí)施方案中，劑量的大小、量或時(shí)間安排根據(jù)所述受試者的年齡來確定。在一些實(shí)施方案中，劑量的大小、量或時(shí)間安排根據(jù)所述受試者的體重來確定。在一些實(shí)施方案中，劑量的大小、量或時(shí)間安排根據(jù)受試者的腫瘤的特定類型來確定。

162、本發(fā)明還提供了一種用于診斷受試者是否患有表達(dá)cd7腫瘤的方法。

163、進(jìn)一步，所述方法包括如下步驟：

164、(1)提供來自懷疑患有表達(dá)cd7腫瘤的受試者的樣品；

165、(2)將樣品與本發(fā)明第一方面所述的納米抗體或第二方面所述的納米抗體接觸；

166、(3)檢測包含所述納米抗體與抗原的復(fù)合物的形成，得到在來自所述受試者的樣品中cd7的量，并將所述cd7在來自所述受試者的樣品中的量與其在已知標(biāo)準(zhǔn)品或參照樣品中的量進(jìn)行比較，并確定來自所述受試者的樣品的cd7水平是否落入與腫瘤相關(guān)的cd7水平內(nèi)；

167、優(yōu)選地，所述樣品可以選自尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、非組織締合的細(xì)胞、組織或組織學(xué)制備物；

168、優(yōu)選地，所述腫瘤為t淋巴細(xì)胞系血液腫瘤；更優(yōu)選地，所述腫瘤包括急性髓系白血病(aml)、急性淋巴細(xì)胞白血病(all)、淋巴母細(xì)胞淋巴瘤(lbl)、nkt細(xì)胞白血病、外周t細(xì)胞淋巴瘤(nhl)、nkt細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(alcl)。

169、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和有益效果如下：

170、本發(fā)明提供了抗cd7的納米抗體，所述納米抗體與cd7具有較好的親和力，將所述納米抗體作為嵌合抗原受體的抗原結(jié)合區(qū)進(jìn)行了嵌合抗原受體修飾并用于car-t細(xì)胞療法中，相對于傳統(tǒng)的基于單克隆抗體(scfv)構(gòu)建得到的car-t細(xì)胞而言，本發(fā)明基于單納米抗體或雙納米抗體構(gòu)建得到的car-t細(xì)胞具有多種優(yōu)勢，不僅有效避免了傳統(tǒng)的以scfv為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)的car-t所常有的表達(dá)困難、穩(wěn)定性差等缺陷，而且明顯增強(qiáng)了免疫細(xì)胞靶向識別腫瘤抗原的能力，加強(qiáng)了對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性，應(yīng)用前景廣闊。