本發(fā)明屬于棉花耐旱蛋白檢測，具體涉及一種用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、universal?stress?protein蛋白(蛋白kat2)是一種催化脂肪酸β氧化的酶。在植物幼苗萌發(fā)和生長過程中，參與aba信號傳導(dǎo)，參與茉莉酸在衰老過程中的生物合成。kat2在所有主要aba反應(yīng)中正調(diào)控aba信號，包括aba誘導(dǎo)的對擬南芥種子萌發(fā)和萌發(fā)后生長的抑制，以及aba誘導(dǎo)的氣孔關(guān)閉和氣孔開放的抑制。kat2對aba產(chǎn)生活性氧(ros)起重要作用，表明kat2至少部分通過調(diào)節(jié)植物細胞ros穩(wěn)態(tài)來調(diào)節(jié)aba信號。同時kat2可能在一個重要的wrky轉(zhuǎn)錄抑制物wrky40的下游發(fā)揮作用，后者可能將kat2與aba受體abar/chlh介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)聯(lián)系起來。

2、以往研究發(fā)現(xiàn)，在棉花在干旱狀態(tài)下，蛋白kat2的表達量與棉花耐旱能力之間具有明確的調(diào)控關(guān)系，即蛋白kat2的表達量的高低，決定了棉花的耐旱的能力。目前農(nóng)業(yè)種植中，有大量的不同耐旱品種棉花在種植，大部分是自然選育出來的天然耐旱品種。但是目前市面上并沒有專門針對棉花蛋白kat2的抗體，因此在蛋白檢測層面上，對于該研究領(lǐng)域缺乏有效的抗體工具，無法用于棉花廣譜耐旱性的基礎(chǔ)研究，以及廣泛種植的耐旱品種棉花在蛋白層面的檢測。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體及其應(yīng)用。所述的蛋白kat2是表達kat2的全長重組蛋白，蛋白kat2的氨基酸序列為：mekainrqqvllqhlnpsassfsshqnnsalsasaclagdsaayqrtnvfgddvvivaayrtalckskrggfkdtypddllapvlraviektnlnpsevgdivvgtvlapgsqrasecrmaafyagfpetvpvrtvnrqcssglqavadvaaaikagfyeigigaglesmttnpmawegsvnprvkqmeqaqncllpmgitsenvahrfgvtrqeqdqaaveshrkaaaatasgkfkdeivpvatkivdpktgdekpvtisvddgirantsvsdlgklkpvfkkngtttagnssqvsdgagavllmkrsvamrkglpilgvfrtfaavgvdpaimgvgpavaipaavksaglelddvdlfeineafasqfvycqkkleldpqkinvnggamaighplgvtgarcvatllhemkrrgkdcrfgvvsmcigtgmgaaavfergdcvdelcnarkvetnsllskdar，如seq?id?no.1所示。

2、用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體，蛋白kat2氨基酸序列如seq?id?no.1所示；以蛋白kat2作為免疫原，免疫小鼠，獲得用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體。本發(fā)明提供的單克隆抗體靶向檢測蛋白kat2，通過蛋白kat2的表達量高低來判定棉花品種是否耐旱，使得對農(nóng)業(yè)中廣泛種植的不同耐旱品種棉花中的蛋白kat2的表達變化及蛋白網(wǎng)絡(luò)圖譜可以實現(xiàn)更深層次研究。

3、本發(fā)明提供的一種用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體，所述的單克隆抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；重鏈可變區(qū)序列包含seq?id?no.2所示的cdr1-1的氨基酸序列g(shù)lnikdyy、seq?id?no.3所示的cdr2-1的氨基酸序列idpengnt和seq?idno.4所示的cdr3-1的氨基酸序列nvrwe；輕鏈可變區(qū)序列包含seq?id?no.5所示的cdr1-2的氨基酸序列ksvstsgysy、cdr2-2的氨基酸序列l(wèi)vs和seq?id?no.6所示的cdr3-2的氨基酸序列qhirelt。

4、用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，選擇健康的balb/c小鼠，制備蛋白kat2抗原溶液，利用蛋白kat2抗原溶液免疫balb/c小鼠，經(jīng)過免疫之后，得到淋巴細胞，并利用雜交瘤細胞融合技術(shù)制得融合細胞，得到能夠產(chǎn)出的單克隆抗體的細胞株，由該細胞株分泌的單克隆抗體為用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體。

5、優(yōu)選的，用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，所述小鼠為8周齡～12周齡balb/c小鼠。

6、優(yōu)選的，用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，所述蛋白kat2抗原溶液是將蛋白kat2溶于生理鹽水中后得到的。

7、優(yōu)選的，用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，取小鼠全脾和淋巴結(jié)，與骨髓瘤sp2/0細胞系融合，融合的細胞進行培養(yǎng)，收集上清，選擇免疫原親和力最高的至少60個親代克隆進入亞克?。煌ㄟ^有限稀釋法和elisa法繼續(xù)進行亞克隆及篩選，得到陽性的融合細胞。

8、優(yōu)選的，用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，能夠產(chǎn)出的單克隆抗體的細胞株注射到balb/c小鼠腹部，產(chǎn)生的腹水抗體用proteina/g純化，得到純化的單克隆抗體。

9、本發(fā)明提供一種所述的單克隆抗體的應(yīng)用，所述單克隆抗體用于鑒別耐旱棉花品種和不耐旱棉花品種。

10、優(yōu)選的，所述的單克隆抗體的應(yīng)用，通過所述單克隆抗體測試蛋白kat2表達量，通過蛋白kat2表達量來鑒別棉花品種的耐旱性能，進而鑒定區(qū)分耐旱棉花品種與不耐旱棉花品種。

11、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

12、本發(fā)明提供的一種用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體，對蛋白kat2具有高親和力和高特異性，能廣泛地用于對蛋白kat2的檢測，特別可用于檢測農(nóng)業(yè)中廣泛種植各品種耐旱棉花的蛋白kat2的表達情況。

13、本發(fā)明的單克隆抗體提供了一個靶向蛋白kat2研究的工具，使得對不同耐旱品種棉花中蛋白kat2的表達與最終棉花能否有效耐旱的形成之間的調(diào)控關(guān)系能夠有效地研究。

技術(shù)特征：

1.用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體，其特征在于，蛋白kat2的氨基酸序列如seq?id?no.1所示；以蛋白kat2作為免疫原，免疫小鼠，獲得用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體，其特征在于，所述的單克隆抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；重鏈可變區(qū)序列包含cdr1-1的氨基酸序列g(shù)lnikdyy、cdr2-1的氨基酸序列idpengnt和cdr3-1的氨基酸序列nvrwe；輕鏈可變區(qū)序列包含cdr1-2的氨基酸序列ksvstsgysy、cdr2-2的氨基酸序列l(wèi)vs和cdr3-2的氨基酸序列qhirelt。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，制備蛋白kat2抗原溶液，利用蛋白kat2抗原溶液免疫健康的balb/c小鼠，經(jīng)過免疫之后，得到淋巴細胞，并利用雜交瘤細胞融合技術(shù)制得融合細胞，得到能夠產(chǎn)出的單克隆抗體的細胞株，由該細胞株分泌的單克隆抗體為用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述小鼠為8周齡～12周齡balb/c小鼠。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述蛋白kat2抗原溶液是將蛋白kat2溶于生理鹽水中后得到的。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，蛋白kat2抗原溶液的濃度為1mg/ml～5mg/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，細胞株注射到balb/c小鼠腹部，產(chǎn)生的腹水抗體用proteina/g純化，得到純化的單克隆抗體。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于，所述單克隆抗體用于鑒別耐旱棉花品種和不耐旱棉花品種。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的單克隆抗體的應(yīng)用，其特征在于，通過所述單克隆抗體測試蛋白kat2表達量，通過蛋白kat2表達量來鑒別棉花品種的耐旱性能。

10.一種檢測試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白kat2的單克隆抗體。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于棉花檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白KAT2的單克隆抗體及其應(yīng)用。蛋白KAT2氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。以蛋白KAT2作為免疫原，免疫小鼠得到淋巴細胞，并利用雜交瘤細胞融合技術(shù)制得融合細胞，得到能夠產(chǎn)出的單克隆抗體的細胞株，由該細胞株分泌的單克隆抗體為用于檢測棉花耐旱能力相關(guān)的蛋白KAT2的單克隆抗體。本發(fā)明提供的一種KAT2的單克隆抗體，對蛋白KAT2具有高親和力和高特異性，能廣泛地用于對蛋白KAT2的檢測，特別可用于檢測農(nóng)業(yè)中廣泛種植各品種耐旱棉花的蛋白KAT2的表達情況。

技術(shù)研發(fā)人員：楊曉杰,聶利紅,呂淑平,趙付安,李武,孫瑤,薄曉培,王庭峰,王紅衛(wèi),趙元明
受保護的技術(shù)使用者：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/22