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23種大豆轉(zhuǎn)化體檢測引物組分、試劑盒及方法

文檔序號:41946516發(fā)布日期:2025-05-16 14:03閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種同時準(zhǔn)確檢測多個待檢測樣本中大豆轉(zhuǎn)化體的特異性核酸引物組,其特征在于,所述特異性核酸引物組包含23對檢測引物擴(kuò)增的核苷酸序列如seq?id?no.1-no.23所示;23對擴(kuò)增引物對的核苷酸序列如seq?id?no.24-seq?id?no.69所示。

2.權(quán)利要求1所述同時準(zhǔn)確檢測多個待檢測樣本中大豆轉(zhuǎn)化體的特異性核酸引物組在檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列產(chǎn)品中的應(yīng)用;所述的檢測大豆轉(zhuǎn)化體指的是轉(zhuǎn)基因大豆種植監(jiān)管、非轉(zhuǎn)基因大豆轉(zhuǎn)化體成分篩查及豆制品轉(zhuǎn)基因成分篩查。

3.一種用于大豆轉(zhuǎn)化體特異性序列的產(chǎn)品,其特征在于所述產(chǎn)品包括權(quán)利要求1所述的引物基因組。

4.一種準(zhǔn)確檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括如權(quán)利要求1所述的特異性核酸序引物組以及多重pcr試劑;所述多重pcr預(yù)混液的組分包括所述引物組每條按照1:1的比例進(jìn)行預(yù)混,單條引物的終濃度為400?nm,根據(jù)不同的實驗?zāi)康倪M(jìn)行各引物的混合。

5.權(quán)利要求4所述準(zhǔn)確檢測大豆轉(zhuǎn)基因成分檢測試劑盒,其特征在于分別得到23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列;所述23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列,分設(shè)計出如權(quán)利要求1所述的引物組;提取帶檢測大豆樣品的基因組dna,以所得基因組dna片段為模板,利用所述引物組為擴(kuò)增體系進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),得到擴(kuò)增產(chǎn)物;將以上所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序,得到高通量測序數(shù)據(jù);將所述高通量測序數(shù)據(jù)與23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列進(jìn)行比對分析,若大豆轉(zhuǎn)化體特性序列reads檢出≥1,則判定陽性確定待檢測大豆樣品中是否含有上述23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列成分。

6.權(quán)利要求5所述采用準(zhǔn)確檢測大豆轉(zhuǎn)基因成分檢測試劑盒檢測大豆轉(zhuǎn)基因成分的方法,其特征在于將所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序,得到高通量文庫,具體包括:利用純化磁珠分離純化所述擴(kuò)增產(chǎn)物,進(jìn)行高通量測序文庫的構(gòu)建,并測定所得文庫的dna濃度;根據(jù)高通量測序文庫說明標(biāo)準(zhǔn)判斷所得高通量測序文庫是否合格;高通量文庫測定濃度>所述高通量測序文庫說明的最低濃度。

7.權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于所述高通量文庫標(biāo)準(zhǔn)濃度≥10?ng/μl,方法檢測的靈敏度高達(dá)0.1%。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種同時準(zhǔn)確檢測多個樣本中多個大豆轉(zhuǎn)化體的特異性核酸引物組、試劑盒及方法。本發(fā)明提供的用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的引物組能夠檢測23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列,23對檢測引物擴(kuò)增的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1~NO.23所示;23對擴(kuò)增引物對的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.24~SEQ?ID?NO.69所示;上述試劑盒包含引物組預(yù)混液。該引物組可以檢測能夠檢測待檢測樣本中大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列,本檢測方法檢測靶標(biāo)通量高、樣本通量大,檢測成本低。本發(fā)明能夠廣泛應(yīng)用于開大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化前的生物安全評價及上市后的品種及衍生品的檢測監(jiān)管。

技術(shù)研發(fā)人員:齊欣,楊禮勝,王永,陳紅,趙新,王灝潛,蘭青闊,張華,劉娜,陳子言,李瑞環(huán),趙桐桐,王成
受保護(hù)的技術(shù)使用者:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/15
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