專利名稱：噻蟲胺抗原、抗體及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及噻蟲胺抗原、抗體及其應用，屬于免疫化學分析技術領域。專用于噻蟲胺多克隆抗體的制備，及其在環(huán)境和農產品中噻蟲胺殘留的酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ELISA)。
背景技術：
噻蟲胺(clothianidin),化學名I-(2_氯-I, 3_噻唑_5_基甲基)_3_甲基_2_硝基胍，由日本住化武田/拜耳聯(lián)合開發(fā)，于2001年12月在日本獲得登記，化學結構見下圖，分子式=C6H8CIN5O2S,相對分子質量249. 68，熔點176. 8°C。噻蟲胺是含噻唑環(huán)的新型煙堿類殺蟲劑，主要作用于昆蟲神經系統(tǒng)突觸后膜的煙堿型乙酰膽堿受體。噻蟲胺以其新穎的作用機制、廣譜高效的殺蟲活性、靈活的使用方法，被廣泛應用于防治危害水稻、蔬菜、果園、茶葉等作物的半翅目、鞘翅目、雙翅目和某些鱗翅目害蟲。人們長期食用被噻蟲胺污染 的農產品會造成內分泌系統(tǒng)的紊亂甚至導致癌癥的發(fā)生。此外，噻蟲胺對蜜蜂和家蠶高毒。因而，需要一種靈敏、快速、選擇性的殘留檢測方法。
N-NO2 N
H3C-N 人
HH S Cl
噻蟲胺美國發(fā)布部分蔬菜和水果的噻蟲胺最大允許殘留量為O. 05mg/kg。目前噻蟲胺殘留檢測方法采用儀器分析方法，如液相色譜分析法、氣相色譜分析法、液相-質譜連用分析法等。這些儀器分析方法靈敏準確，但檢測儀器昂貴、樣品前處理較繁瑣、檢測費時費力、難以滿足大量樣品快速簡便檢測的需要。免疫檢測方法具有快速、廉價、簡便、靈敏、特異的優(yōu)點，在大量樣品快速篩選和現(xiàn)場監(jiān)測中顯示出獨特優(yōu)勢。ELISA是一種將酶催化反應和免疫反應相結合的免疫標記測定技術，有酶催化反應的高靈敏度和抗原抗體反應的高特異性，在靈敏度方面有很大的優(yōu)勢。ELISA作為一種快速靈敏的檢測方法，在許多小分子免疫分析中已得到較成熟的應用。通過化學合成噻蟲胺半抗原和人工抗原，制備針對噻蟲胺的特異性抗體，建立噻蟲胺免疫學檢測方法。該發(fā)明方法的完成，將解決噻蟲胺半抗原合成，抗體制備等關鍵技術，建立噻蟲胺的ELISA快速檢測技術。該發(fā)明不僅為食品安全檢測，而且為我國農產品等的出入境檢測、環(huán)境監(jiān)測部門的水域監(jiān)測提供有效的技術手段和檢測方法。對我國農產品的可持續(xù)發(fā)展和食品安全問題具有重要的現(xiàn)實意義和重要的社會、經濟價值。目前國內外尚未見有關噻蟲胺的免疫學研究報道。
發(fā)明內容
技術問題
本發(fā)明的目的在于提供一種噻蟲胺的酶聯(lián)免疫吸附分析方法，對環(huán)境和農產品中噻蟲胺的殘留進行準確、靈敏、快速、簡單的檢測。技術方案本發(fā)明噻蟲胺殘留ELISA檢測方法，包括I人工半抗原制備將8mmol (O. 45g)K0H溶解于20mL乙醇中，加入4mmol (O. 42g) β_巰基丙酸攪拌，待完全溶解后加入4mmol (I. 02g)噻蟲胺，80°C攪拌回流2h。反應結束后，過濾反應液，濾液減壓濃縮得淡黃色固體。加入50mL水，用lmol/L的鹽酸調節(jié)pH = 2. O。用乙酸乙酯萃取，有機相經水洗和無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得白色粉末狀物質，經甲醇重結晶，得白色晶體。噻蟲胺人工半抗原化學名為3-(5-((3-甲基-2-硝基胍)-基甲基)噻唑-2-巰基)
丙酸，分子結構如下·
權利要求
1.噻蟲胺多克隆抗體，是由免疫新西蘭大白兔獲得的。
2.權利要求I所述噻蟲胺抗體的制備方法，包括 1)人工半抗原，其特征在于它的分子結構式為
3.權利要求I所述噻蟲胺多克隆抗體酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ELISA)建立，及在檢測環(huán)境和農產品中噻蟲胺殘留量中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及噻蟲胺抗原、抗體及其應用，屬于免疫化學分析技術領域。專用于噻蟲胺特異性多克隆抗體制備和酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ELISA)，及其在環(huán)境和農產品中噻蟲胺殘留的高靈敏快速檢測。通過對噻蟲胺噻唑環(huán)上氯原子進行取代，合成了半抗原，化學名為3-(5-((3-甲基-2-硝基胍)-基甲基)噻唑-2-巰基)丙酸，將其分別于牛血清蛋白和卵清蛋白偶聯(lián)制備免疫抗原和包被抗原。用免疫抗原免疫新西蘭大白兔，獲得噻蟲胺的特異性多克隆抗體。建立的ELISA線性范圍為1.1μg/L-2mg/L，檢測限為1.1μg/L。本發(fā)明半抗原合成技術簡便可行，抗體特異性高，適用于環(huán)境和農產品中大批量樣品檢測和現(xiàn)場監(jiān)測。
文檔編號G01N33/53GK102875671SQ20121036382
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月27日 優(yōu)先權日2012年9月27日
發(fā)明者王鳴華, 李明, 施海燕 申請人:南京農業(yè)大學