專利名稱：一種明日葉快速繁殖方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物的繁殖方法，具體涉及一種明日葉的快速繁殖方法，屬于生物技術領域。
背景技術：
明日葉(Angelica keiskei koidzmi),別名八丈草、海峰人參、長壽菜,生命力旺盛，今日摘了明日又長出芽，其命名就是出于這種強韌生命力的特性和日本八丈島的原產(chǎn)地。明日葉的學名是Angdica Uterus,屬名是拉丁語天使的由來,種名是有用的意思,蘊含著藥效卓著之意。明日葉屬水芹科多年生草本植物，其喜好溫暖多濕的氣候，產(chǎn)地以伊豆七島為中心，延伸至伊豆半島前端、三浦半島和紀伊半島等地。有機會造訪伊豆七島或伊豆半島的話，可以看到，明日葉在路旁或庭院中像雜草一樣終年茂盛，似乎與無藥效的植物一樣 沒有什么特別，在大自然中生長著。之前當?shù)厝司投美么怂幉?，如用以作料理。明日葉含有的天然有機鍺高于名貴人參、靈芝，也高于大棗和大蒜。有機鍺具有凈化血液、使細胞活化的功效，并能溶解附著于血管壁的膽固醇，從而防止血管老化，促進細胞新陳代謝，維持血壓正常。明日葉還含有一般植物很少有的維生素B12，以及豐富的葉綠素、十多種礦物元素、十六種人體所需的氨基酸和黃酮、泛酸、膽堿等物質。日本醫(yī)學《大和本草》《重訂本草綱目啟蒙》(1844)以及中國的《本草綱目》等文獻都有關于明日葉強身健體的重要記載，相關研究發(fā)現(xiàn)長期食用和飲用明日葉，對肝炎、糖尿病、高血壓等疾病有良好的療效，尤其在癌癥防治及控制方面具有神奇的功效，并且沒有副作用。我國栽培明日葉起始于20多年前，但是至今栽培面積并不大，如此有價值的食藥兩用植物卻沒有很好地得以推廣和種植，其中的一個主要原因是明日葉的繁殖問題。明日葉是多年生草本植物，種子繁殖的植株要2-4年才能結實，種子發(fā)芽率也較低，市場上明曰葉壯苗每盆賣到80-100元。因此迫切需要一種新的明日葉繁殖方法來滿足生產(chǎn)和開發(fā)的需求。目前有關明日葉組織培養(yǎng)和快速繁殖的報道較少，南京大學李佳等在論文《明日葉的組織培養(yǎng)與快速繁殖》(李佳，張智俊，周長芳，《植物生理學通訊》2006(06))中披露，在添加6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上誘導明日葉的帶芽莖段、葉片及葉柄，其中帶芽莖段產(chǎn)生愈傷組織及叢生芽，而葉片和葉柄經(jīng)3個月培養(yǎng)未見分化。論文《明日葉的愈傷組織誘導和快速繁殖》(郭治友，羅應，錢紹方《廣東農業(yè)科學》2010(7))提出，以葉片、葉柄為外植體在N6培養(yǎng)基上添加6-BA和NAA，誘導近60天得到叢生芽。然而上述方法都是由叢生芽得到再生植株，其具有再生植株生根難、成苗率低、培養(yǎng)周期長的缺點。經(jīng)檢索，尚未見有從愈傷組織分化出體細胞胚并再生出植株的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是，克服現(xiàn)有明日葉常規(guī)繁殖方法的缺陷，提供一種明日葉快速繁殖方法，通過分化出體細胞胚并萌發(fā)再生植株的無性繁殖方法，實現(xiàn)明日葉的快速繁殖。
本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的—種明日葉快速繁殖方法，其特征是，在添加激素的MS培養(yǎng)基上，誘導明日葉的葉片和葉柄產(chǎn)生愈傷組織，并且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經(jīng)萌發(fā)長出新植株，最后將該新植株在生根培養(yǎng)基上生根。所述的添加激素的MS培養(yǎng)基的組分為0. 5-5mg/L的玉米素、O. 5-lmg/L的NAA以及MS基本培養(yǎng)基。所述的添加激素的MS培養(yǎng)基的ph值為5. 6-6. O。所述的葉柄沒有芽點。所述的葉片和葉柄經(jīng)過滅菌。所述的葉片和葉柄的滅菌方法為，將切下的明日葉的帶柄葉片分為葉片和葉柄兩部分，經(jīng)流水沖洗3-5次，用添加洗衣粉的自來水沖洗2次，在75%酒精中滅菌10s，之后將葉片和葉柄經(jīng)I %次氯酸鈉分別消毒3min和5min，然后用無菌水沖洗3_5次，置于無菌濾紙上吸干。所述的新植株是指，經(jīng)體細胞胚萌發(fā)的再生植株長到O. 2cm以上。所述的在生根培養(yǎng)基上生根是指，將新植株在1/2MS培養(yǎng)基或MS基本培養(yǎng)基上生根。所述的1/2MS培養(yǎng)基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養(yǎng)基含量的一半，余量為蒸餾水。與現(xiàn)有技術相比較，本發(fā)明最大的特點在于不同于現(xiàn)有明日葉采用由叢生芽得到再生植株的繁殖方法，而是首次采用了通過體細胞胚發(fā)生途徑再生植株的無性繁殖方法，以葉片、葉柄為外植體，在MS基礎培養(yǎng)基中添加一定濃度的玉米素及NAA，誘導分化出體細胞胚，并且經(jīng)萌發(fā)得到大量再生植株，從而克服了常規(guī)明日葉培育繁殖方法中愈傷組織不易分化的不足以及解決了由叢生芽得到再生植株生根難、成苗率低的問題。采用本發(fā)明所述方法繁殖明日葉培養(yǎng)周期為20-25d，大大縮短了通過組織培養(yǎng)得到再生植株的時間，實現(xiàn)了明日葉的快速繁殖。本發(fā)明具有再生植株生根容易、成苗率高以及培養(yǎng)周期短的優(yōu)點，對于明日葉快速市場化有極大的推動潛力。
具體實施例方式本發(fā)明所述的明日葉快速繁殖方法在添加激素的MS培養(yǎng)基上，誘導明日葉的葉片和沒有芽點的葉柄產(chǎn)生愈傷組織，并且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經(jīng)萌發(fā)長出O. 2cm以上的再生新植株，最后將該新植株在生根培養(yǎng)基上生根。所述的添加激素的MS培養(yǎng)基的組分為0. 5-5mg/L的玉米素、O. 5-lmg/L的NAA以及MS基本培養(yǎng)基，其ph值為5. 6-6. O。所述的葉片和葉柄經(jīng)過滅菌，其滅菌方法為，將切下的明日葉的帶柄葉片分為葉片和葉柄兩部分，經(jīng)流水沖洗3-5次，用添加洗衣粉的自來水沖洗2次，在75%酒精中滅菌10s，之后將葉片和葉柄經(jīng)I %次氯酸鈉分別消毒3min和5min，然后用無菌水沖洗3_5次， 置于無菌濾紙上吸干。所述的在生根培養(yǎng)基上生根是指，將新植株在1/2MS培養(yǎng)基或MS基本培養(yǎng)基上生根，該1/2MS培養(yǎng)基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養(yǎng)基含量的一半，余量為蒸餾水。下面結合實施例對本發(fā)明的技術方案作具體詳細說明，下列實施例以本發(fā)明技術方案為前提，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。實施例I具體方案是取明日葉帶柄的葉片，將其分成葉片和葉柄兩部分，該葉柄沒有芽點，在流水中沖洗3-5次，然后在添加了洗衣粉的自來水中沖洗2次，用75%的酒精消毒IOs,葉片和葉柄經(jīng)I %次氯酸鈉分別滅菌3min和5min后,用無菌水洗3_5次,之后置于無菌濾紙上吸干。將葉片切成O. 5cm*0. 5cm大小，葉柄切成O. 5cm大小后,轉到添加了 O. 5mg/L的玉米素和O. 5mg/L的NAA、ph值為5. 6的MS基本培養(yǎng)基，即添加激素的MS培養(yǎng)基上誘導愈傷組織的產(chǎn)生，培養(yǎng)溫度25°C，光照時間12h，20-25天從愈傷組織分化出體細胞胚，經(jīng) 萌發(fā)長出再生的新植株。將O. 2cm以上的再生新植株轉移到生根培養(yǎng)基上生根。該生根培養(yǎng)基是指1/2MS培養(yǎng)基，該1/2MS培養(yǎng)基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養(yǎng)基含量的一半，余量為蒸餾水。最后待新植株長出壯根后，馴化移栽到花盆中。實施例2具體方案是取明日葉帶柄的葉片，將其分成葉片和葉柄兩部分，該葉柄沒有芽點，在流水中沖洗3-5次，然后在添加了洗衣粉的自來水中沖洗2次，用75%的酒精消毒IOs,葉片和葉柄經(jīng)I %次氯酸鈉分別滅菌3min和5min后,用無菌水洗3_5次,之后置于無菌濾紙上吸干。將葉片切成O. 5cm*0. 5cm大小，葉柄切成O. 5cm大小后,轉到添加了 3mg/L的玉米素和O. 7mg/L的NAA、ph值為5. 8的MS基本培養(yǎng)基，即添加激素的MS培養(yǎng)基上誘導愈傷組織的產(chǎn)生，培養(yǎng)溫度25°C，光照時間12h，20-25天從愈傷組織分化出體細胞胚，經(jīng)萌發(fā)長出再生的新植株。將O. 2cm以上的再生新植株轉移到生根培養(yǎng)基上生根。該生根培養(yǎng)基是指1/2MS培養(yǎng)基，該1/2MS培養(yǎng)基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養(yǎng)基含量的一半，余量為蒸餾水。最后待新植株長出壯根后，馴化移栽到花盆中。實施例3具體方案是取明日葉帶柄的葉片，將其分成葉片和葉柄兩部分，該葉柄沒有芽點，在流水中沖洗3-5次，然后在添加了洗衣粉的自來水中沖洗2次，用75%的酒精消毒IOs,葉片和葉柄經(jīng)I %次氯酸鈉分別滅菌3min和5min后,用無菌水洗3_5次,之后置于無菌濾紙上吸干。將葉片切成O. 5cm*0. 5cm大小，葉柄切成O. 5cm大小后,轉到添加了 5mg/L的玉米素和lmg/L的NAA、ph值為6. O的MS基本培養(yǎng)基，即添加激素的MS培養(yǎng)基上誘導愈傷組織的產(chǎn)生，培養(yǎng)溫度25°C，光照時間12h，20-25天從愈傷組織分化出體細胞胚，經(jīng)萌發(fā)長出再生的新植株。將O. 2cm以上的再生新植株轉移到生根培養(yǎng)基上生根。該生根培養(yǎng)基是指MS基本培養(yǎng)基。最后待新植株長出壯根后，馴化移栽到花盆中。本發(fā)明首次建立了明日葉通過體細胞胚發(fā)生途徑再生植株的無性繁殖方法，通過添加不同的激素對明日葉的葉片及葉柄進行愈傷組織誘導，產(chǎn)生體細胞胚，胚萌發(fā)后得到大量的再生植株，從而實現(xiàn)了明日葉的高效快速繁殖。本發(fā)明克服了明日葉常規(guī)組織培養(yǎng)愈傷組織不易分化，以及由叢生芽得到再生植株生根難、成苗率低的問題，大大縮短了通過組織培養(yǎng)得到再生植株的時間，因而具有非常可觀的潛在市場價值。
權利要求
1.一種明日葉快速繁殖方法，其特征是，在添加激素的MS培養(yǎng)基上，誘導明日葉的葉片和葉柄產(chǎn)生愈傷組織，并且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經(jīng)萌發(fā)長出新植株，最后將該新植株在生根培養(yǎng)基上生根。
2.根據(jù)權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的添加激素的MS培養(yǎng)基的組分為0. 5-5mg/L的玉米素、O. 5-lmg/L的NAA以及MS基本培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權利要求2所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的添加激素的MS培養(yǎng)基的Ph值為5. 6-6.0。
4.根據(jù)權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的葉柄沒有芽點。
5.根據(jù)權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的葉片和葉柄經(jīng)過滅菌。
6.根據(jù)權利要求5所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的葉片和葉柄的滅菌方法為，將切下的明日葉的帶柄葉片分為葉片和葉柄兩部分，經(jīng)流水沖洗3-5次，用添加洗衣粉的自來水沖洗2次，在75%酒精中滅菌10s，之后將葉片和葉柄經(jīng)1%次氯酸鈉分別消毒3min和5min,然后用無菌水沖洗3_5次,置于無菌濾紙上吸干。
7.根據(jù)權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的新植株是指，經(jīng)體細胞胚萌發(fā)的再生植株長到O. 2cm以上。
8.根據(jù)權利要求I所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的在生根培養(yǎng)基上生根是指，將新植株在1/2MS培養(yǎng)基或MS基本培養(yǎng)基上生根。
9.根據(jù)權利要求8所述的明日葉快速繁殖方法，其特征是，所述的1/2MS培養(yǎng)基是指MS大量、MS微量、MS有機和鐵鹽均為MS基本培養(yǎng)基含量的一半，余量為蒸餾水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種明日葉快速繁殖方法，其在添加激素的MS培養(yǎng)基上，誘導明日葉的葉片和葉柄產(chǎn)生愈傷組織，并且進一步形成體細胞胚，該體細胞胚經(jīng)萌發(fā)長出新植株，最后將該新植株在生根培養(yǎng)基上生根，所述添加激素的MS培養(yǎng)基的組分為0.5-5mg/L的玉米素、0.5-1mg/L的NAA以及MS基本培養(yǎng)基。本發(fā)明克服了現(xiàn)有明日葉組織培養(yǎng)繁殖方法的缺陷，實現(xiàn)了明日葉的快速繁殖，具有培養(yǎng)周期短，再生植株生根容易、成苗率高的優(yōu)點，可用于明日葉的高效繁殖。
文檔編號A01H4/00GK102657084SQ20121013938
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月7日 優(yōu)先權日2012年5月7日
發(fā)明者曹越平, 薄路花, 金加清 申請人:上海交通大學