本發(fā)明涉及農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種含桃金娘乳液的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：目前植物病原真菌的防治以有機(jī)合成的化學(xué)藥劑為主，大量使用化學(xué)農(nóng)藥對(duì)生態(tài)環(huán)境造成一定的影響，因此從植物中篩選新的抑菌活性物質(zhì)是當(dāng)今開發(fā)無(wú)公害殺菌劑的中藥研究方向之一。在桃金娘果實(shí)中具有豐富的間苯三酚等酚類、黃酮類及蒽醌類等對(duì)植物病原菌有較好抑制作用的成分。然而酚類物質(zhì)在空氣中容易被氧化，在空氣中暴露會(huì)導(dǎo)致其被氧化而導(dǎo)致結(jié)構(gòu)發(fā)生異構(gòu)化而導(dǎo)致變質(zhì)。這類化合物在桃金娘植物細(xì)胞中的穩(wěn)定性給我們提示，利用水包油的表面活性劑乳液對(duì)酚類物質(zhì)進(jìn)行提取，從而避免酚類物質(zhì)與空氣接觸。這種提取方式，可以大大提高酚類物質(zhì)的有效利用率。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供了一種含桃金娘乳液的制備方法，實(shí)現(xiàn)了充分提取的提取物有效的抑制病原真菌及美白防曬的效果。本發(fā)明采用的技術(shù)手段如下：一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將桃金娘果和葡桃果洗凈，烘干粉碎；s2、用甲醇溶液進(jìn)行提取，蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過(guò)濾，得第一濾渣和濾液；s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得液體液相；s4、將十二烷基硫酸鈉或硬脂酸中的至少一種配制成水溶液；s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.1～0.3:1的比例稱取，加熱至60～70℃，得混合液；s6、按質(zhì)量比為0.5～1.5:1～2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速攪拌，得乳化液；s7、將乳化液保溫15～20min，降溫調(diào)節(jié)ph值至4.5～6.5，得成品。優(yōu)選地，所述步驟s1中桃金娘果和葡桃果的質(zhì)量比為3:1～5:1。優(yōu)選地，所述步驟s2中，用體積分?jǐn)?shù)為60～80％的甲醇溶液在水浴搖床45℃～60℃下振蕩提取1～2h。優(yōu)選地，所述步驟s3中液體液相的質(zhì)量濃度為0.1～10％。優(yōu)選地，所述步驟s4中十二烷基硫酸鈉或硬脂酸的質(zhì)量濃度為0.1～15％。優(yōu)選地，所述步驟s6中按質(zhì)量比為0.5～0.8:1～1.2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中。優(yōu)選地，所述步驟s6中在高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌。優(yōu)選地，所述步驟s7中降溫至30～40℃時(shí)調(diào)節(jié)ph值。本發(fā)明還提供了一種含桃金娘乳液在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。采用本發(fā)明所提供的一種含桃金娘乳液的制備方法，其制備過(guò)程中易于操作。通過(guò)甲醇和氯仿的結(jié)合使用對(duì)桃金娘果和葡桃果進(jìn)行提取，且通過(guò)反復(fù)溶解提取，充分提取出酚類、黃酮類及蒽醌類多種活性化合物成分；加入十二烷基硫酸鈉至提取物中，得到液體液相，預(yù)乳化提取物，使提取物不易氧化；十二烷基硫酸鈉或硬脂酸或結(jié)合配置成穩(wěn)定性較好的混合液，使得混合液對(duì)初步乳化的提取物進(jìn)行進(jìn)一步乳化的作用，制備的成品充分對(duì)酚類化合物、酮類等具有保護(hù)作用，使其不被空氣氧化，在用于植物病原真菌的防治和美白防曬化妝品中，具有很好療效的作用，具有穩(wěn)定性。該方法簡(jiǎn)化了中間步驟，使制備過(guò)程更加高效和環(huán)保，成本也相應(yīng)降低。具體實(shí)施方式以下對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將300g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分?jǐn)?shù)為60％的甲醇溶液在水浴搖床45℃下振蕩提取1h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過(guò)濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為0.1％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為0.1％的十二烷基硫酸鈉配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.1:1的比例稱取，加熱至60℃，得混合液。s6、按質(zhì)量比為0.5:1的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫15min，降溫至30℃時(shí)調(diào)節(jié)ph值至4.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。實(shí)施例2一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將500g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分?jǐn)?shù)為80％的甲醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過(guò)濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為10％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為15％的硬脂酸配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.3:1的比例稱取，加熱至70℃，得混合液；s6、按質(zhì)量比為1.5:2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫20min，降溫至40℃時(shí)調(diào)節(jié)ph值至6.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。實(shí)施例3一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將400g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分?jǐn)?shù)為70％的甲醇溶液在水浴搖床50℃下振蕩提取1.5h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過(guò)濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為5％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度均為5％的十二烷基硫酸鈉和硬脂酸配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.2:1的比例稱取，加熱至65℃，得混合液。s6、按質(zhì)量比為0.8:1.2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫17min，降溫至35℃時(shí)調(diào)節(jié)ph值至5.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。實(shí)施例4一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將300g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分?jǐn)?shù)為80％的甲醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過(guò)濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為8％的十二烷基硫酸鈉和硬脂酸配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.2:1的比例稱取，加熱至70℃，得混合液。s6、按質(zhì)量比為0.8:1的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫20min，降溫至30℃時(shí)調(diào)節(jié)ph值至5.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。為了驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果，本發(fā)明做了以下實(shí)驗(yàn)：對(duì)比例1該對(duì)比例與實(shí)施例4的區(qū)別在于：s2、用體積分?jǐn)?shù)為80％的甲醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h，過(guò)濾，得濾渣和濾液。s3、將步驟s2的濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。對(duì)比例2該對(duì)比例與實(shí)施例4的區(qū)別在于：s2、用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h，過(guò)濾，得濾渣和濾液。s3、將步驟s2的濾渣用乙醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。對(duì)比例3該對(duì)比例與實(shí)施例4的區(qū)別在于：s2、用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h過(guò)濾，得濾渣和濾液。s3、將步驟s2的濾渣用乙醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進(jìn)行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為8％的聚甘油脂肪酸酯配制成水溶液。對(duì)比例4該對(duì)比例與實(shí)施例4的區(qū)別在于：s6、按質(zhì)量比為2:3的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。1材料與方法1.1供試菌種主要為甘藍(lán)黑斑、煙草黑脛、辣椒炭疽、水稻胡麻葉、金桔沙皮、甘蔗鳳梨、玉米大斑、茶輪斑以及貢柑鏈格等病原真菌。1.2抑制活性測(cè)試將培養(yǎng)好的致病菌用培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋，稀釋度為1:500-1:1000，將稀釋后的含菌培養(yǎng)液分別定量加至96孔板的各個(gè)孔中，將實(shí)施例4的乳液配制成1mg/ml，分別取定量加至各個(gè)孔中。加完后置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃恒溫培養(yǎng)48h，而后用酶標(biāo)儀在630nm下測(cè)各孔吸光度，計(jì)算生長(zhǎng)抑制率。2結(jié)果與分析2.1含桃金娘乳液抑菌活性見表1：含桃金娘果和葡桃果的提取物制備的乳液對(duì)孢子萌發(fā)抑制率和菌絲生長(zhǎng)抑制率大都在80％以上，表明該乳液對(duì)病原菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)均表現(xiàn)較好的抑制效果。2.2病原真菌(甘藍(lán)黑斑)抑制活性測(cè)試：計(jì)算實(shí)施例1～4和對(duì)比例1～4的病原真菌的生長(zhǎng)抑制率，見表2：組別孢子萌發(fā)抑制率/％菌絲生長(zhǎng)抑制率/％實(shí)施例183.685.4實(shí)施例285.489.7實(shí)施例386.390.8實(shí)施例489.392.4對(duì)比例170.272.3對(duì)比例271.675.3對(duì)比例365.468.7對(duì)比例472.373.5由上表可知，本發(fā)明乳液具有很好的抑制真菌的效果，通過(guò)本發(fā)明的制備步驟，使得桃金娘果和葡桃果的多種提取物充分提取出來(lái)，不同溶劑制備的提取物中，含量也會(huì)不同，主要是因?yàn)橥ㄟ^(guò)其操作步驟、溶劑的極性與其活性物質(zhì)相匹配，通過(guò)預(yù)乳化和乳化的作用，使多種提取物不易被氧化，使得制備得的乳液具有抑制真菌的效果。本發(fā)明還做了以下實(shí)驗(yàn)：一、依據(jù)實(shí)施例4的制備方法，采用不同極性溶劑提取物對(duì)真菌的生長(zhǎng)抑制情況如下表3所示：植物病原真菌甲醇乙醇氯仿乙醚乙酸乙酯甲醇+氯仿甘藍(lán)黑斑80.175.470.460.262.385.9煙草黑脛76.778.173.172.170.386.7辣椒炭疽76.572.473.668.070.586.4水稻胡麻葉82.176.475.171.368.590.1金桔沙皮80.778.270.272.470.688.3甘蔗鳳梨82.176.373.868.673.592.8玉米大斑80.570.571.570.962.990.8茶輪斑73.770.674.165.365.893.4貢柑鏈格74.975.176.562.772.894.2由上表可知，在甲醇和氯仿溶解劑制備的乳液對(duì)植物病原真菌具有較好的抑制作用，抑制率達(dá)85％以上，而其它溶劑提取物制備的乳液抑制效果差，表明抑制菌絲生長(zhǎng)的活性物質(zhì)可能只集中溶解在甲醇和氯仿極性成分中。二、乳液的抗紫外線性能根據(jù)能量的大小，紫外線分為3個(gè)區(qū)域，為uv-a區(qū)域，波長(zhǎng)為320～400nm，日光能量最低，一般只會(huì)使皮膚曬黑；二是能量較高的uvb區(qū)域，波長(zhǎng)290～320nm，它會(huì)曬黑曬傷皮膚；三是波長(zhǎng)為200～290nm的uvc區(qū)域，日光能量最高，所以對(duì)皮膚的殺傷力也很大。設(shè)置空白例1：將未涂抹桃金娘乳液的實(shí)驗(yàn)組為空白實(shí)驗(yàn)1。將實(shí)施例1～4、對(duì)比例3涂抹在載玻片上，掃描基線后，掃描樣品在uva、uvb、uvc內(nèi)的紫外吸收平均值。檢測(cè)結(jié)果見表4：通過(guò)表4的結(jié)果顯示，實(shí)施例1～4制得的乳液對(duì)紫外線吸收效果好，具備較好的防曬功效，對(duì)比例3只采用單一的乙醇進(jìn)行提取，且沒(méi)有對(duì)提取物進(jìn)行預(yù)乳化和乳化的作用，通過(guò)比較本發(fā)明較實(shí)施例3對(duì)紫外線的吸收效果較好。三、乳液對(duì)酪氨酸酶抑制活性測(cè)定酪氨酸酶是一種氧化還原酶，酪氨酸酶氧化可以促進(jìn)l-酪氨酸生成黑色素，在酪氨酸形成黑色素的過(guò)程中，酪氨酸酶能促使l-酪氨酸生產(chǎn)l-多巴并進(jìn)一步作用使l-多巴形成巴醌，多巴醌最終生成黑色素。抑制率的計(jì)算公式：[1-(t2-t1)/(c2-c1)]*100％c1是緩沖溶液和酪氨酸酶提取液的吸光度值，c2表示生成的黑色素的吸光度值，以c1為參比測(cè)c2的吸光度值即為c2-c1，表示在扣除酪氨酸酶提取液的吸光度后生成的黑色素的吸光度值。t1是加入樣品、酪氨酸酶提取液和緩沖溶液的吸光度值，t2是經(jīng)過(guò)樣品抑制后生成的黑色素的吸光度值，同樣的以t1為參比測(cè)t2的吸光度值得到t2-t1，表示在扣除樣品和酪氨酸酶提取液吸光度的影響下，經(jīng)過(guò)樣品的抑制后的黑色素的吸光度值。實(shí)施例1至實(shí)施例4以及對(duì)比例1至對(duì)比例4獲得的樣品溶液在酪氨酸酶抑制活性測(cè)定中的抑制率結(jié)果如表5所示：實(shí)施例1至實(shí)施例4獲得的含桃金娘和葡桃提取物的乳液對(duì)酪氨酸酶抑制能力強(qiáng)，可以用于皮膚美白。綜上所述，采用本發(fā)明所提供的本發(fā)明公開了一種含桃金娘乳液的制備方法，其制備過(guò)程中易于操作。通過(guò)甲醇和氯仿的結(jié)合使用對(duì)桃金娘果和葡桃果進(jìn)行提取，且通過(guò)反復(fù)溶解提取，充分提取出酚類、黃酮類及蒽醌類多種活性化合物成分；加入十二烷基硫酸鈉至提取物中，得到液體液相，預(yù)乳化提取物，使提取物不易氧化；十二烷基硫酸鈉或硬脂酸或結(jié)合配置成穩(wěn)定性較好的混合液，使得混合液對(duì)初步乳化的提取物進(jìn)行進(jìn)一步乳化的作用，制備的成品充分對(duì)酚類化合物、酮類等具有保護(hù)作用，使其不被空氣氧化，在用于植物病原真菌的防治和美白防曬化妝品中，具有很好療效的作用，具有穩(wěn)定性。該方法簡(jiǎn)化了中間步驟，使制備過(guò)程更加高效和環(huán)保，成本也相應(yīng)降低。避免了其它化學(xué)物質(zhì)農(nóng)藥的使用對(duì)環(huán)境造成的污染，農(nóng)作物對(duì)其生物利用率高，效果顯著；原料來(lái)源廣泛，環(huán)保易降解。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明保護(hù)的范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12