本發(fā)明屬于醫(yī)用材料，具體涉及一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、腸瘺是一種消化道疾病中常見的嚴(yán)重并發(fā)癥，癥狀為腸道與腹腔或其他器官產(chǎn)生異常通道，造成腸內(nèi)容物泄露，從而引發(fā)嚴(yán)重的腹腔及血液感染，嚴(yán)重的情況下其死亡率高達(dá)40％～70％。小口徑的腸瘺(直徑小于5mm)較為容易封堵和自愈，而大口徑的腸瘺(直徑大于5mm)則會(huì)導(dǎo)致大量的腸內(nèi)容物外漏，帶來更嚴(yán)重的臨床癥狀和并發(fā)癥，也是腸瘺封堵治療的難點(diǎn)。

2、近年來，可黏附補(bǔ)片被認(rèn)為是一種極有潛力的腸瘺封堵方法，采用可有效黏附于人體組織表面的材料制成補(bǔ)片，從而用于腸瘺封堵，同時(shí)促進(jìn)腸瘺附近組織的再生，最終實(shí)現(xiàn)腸瘺的愈合。盡管現(xiàn)有的可黏附補(bǔ)片種類多樣，包括合成材料(如聚氨酯、聚乙烯醇等)或天然多糖(殼聚糖、巖藻糖等)制成等，但實(shí)際應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)，這些可黏附補(bǔ)片雖然能夠?qū)π】趶侥c瘺具有不錯(cuò)的修復(fù)作用，但卻難以修復(fù)大口徑的腸瘺。這是因?yàn)樾】趶侥c瘺在臨床治療時(shí)，很容易將其先通過手動(dòng)閉合，再通過可黏附補(bǔ)片將閉合口粘牢，進(jìn)而促進(jìn)組織再生，實(shí)現(xiàn)腸瘺愈合；而大口徑腸瘺由于大量的腸內(nèi)容物外漏，導(dǎo)致周圍組織會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的炎性反應(yīng)，沒有將其閉合后再進(jìn)行封堵的可能。換言之，相較于用于修復(fù)小口徑腸瘺的可黏附補(bǔ)片，修復(fù)大口徑腸瘺的可黏附補(bǔ)片面臨的環(huán)境更惡劣，因而對(duì)其黏附效果、促進(jìn)組織修復(fù)的作用等提出了更高的要求。

3、現(xiàn)有技術(shù)缺乏適用于大口徑腸瘺修復(fù)的可黏附補(bǔ)片，如何開發(fā)一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的可黏附補(bǔ)片，是本領(lǐng)域亟需解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片及其制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)缺乏修復(fù)大口徑腸瘺的生物材料問題。

2、為解決上述問題，本發(fā)明首先提供一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，包括：

3、步驟s1，制備再生層，所述再生層包括：脫細(xì)胞組織層、人工組織片層或水凝膠層中的至少一種；

4、步驟s2，制備ppd膠粉末，包括：

5、步驟s2.1，將左旋多巴溶液與聚乙烯亞胺溶液混合，攪拌反應(yīng)后，得到pd溶液；

6、步驟s2.2，將所述pd溶液與聚丙烯酸溶液混合均勻，反應(yīng)后得到膠狀沉淀物，所述膠狀沉淀物經(jīng)凍干、研磨后，得到所述ppd膠粉末，備用；

7、步驟s3，將所述ppd膠粉末涂抹于所述再生層的一側(cè)表面，形成黏附層，獲得適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片。

8、優(yōu)選地，步驟s2.1中，所述左旋多巴溶液的濃度為0.1m～1.6m，所述聚乙烯亞胺溶液的濃度為20％w/v，所述左旋多巴溶液與聚乙烯亞胺溶液按體積比1：1混合；

9、步驟s2.2中，所述聚丙烯酸溶液的濃度為10％w/v，所述聚丙烯酸溶液與pd溶液按體積比1：1混合。

10、優(yōu)選地，步驟s2.1中，所述攪拌反應(yīng)的時(shí)間為10s～2min。

11、優(yōu)選地，步驟s2.2中，將含有所述膠狀沉淀物的收集管放入液氮中冷凍15min后，打開管口封上一層吸水紙，繼續(xù)冷凍干燥24h～48h除去水分，得到固體；磨碎所述固體，使用100～200目網(wǎng)篩過篩后，得到所述ppd膠粉末，并真空或氮?dú)獗４鎮(zhèn)溆谩?/p>

12、優(yōu)選地，所述步驟s3具體包括：

13、步驟s3.1，再生層預(yù)處理：將所述再生層浸泡在pbs中，在4℃下存儲(chǔ)24小時(shí)；

14、步驟s3.2，取出預(yù)處理后的再生層，吸干其表面水分后，將所述ppd粉末涂抹在再生層的一側(cè)表面，在37℃下放置5min～15min，得到所述生物補(bǔ)片。

15、優(yōu)選地，所述再生層表面涂抹的ppd膠粉末的用量為20mg/cm2～100mg/cm2。

16、優(yōu)選地，所述再生層包括脫細(xì)胞組織層，所述脫細(xì)胞組織層包括脫細(xì)胞真皮層或脫細(xì)胞小腸黏膜下層。

17、優(yōu)選地，所述脫細(xì)胞組織層為脫細(xì)胞小腸黏膜下層，其制備方法包含以下步驟：

18、(1)滅活腸道酶：人或動(dòng)物的結(jié)腸組織中分離出粘膜下層，并切成3cm×3cm的小塊，用70％v/v乙醇沖洗2h；

19、(2)去除血液和雜質(zhì)：將步驟(1)處理得到的組織片置于含有1％v/v青霉素/鏈霉素的去離子水中，攪拌0.5h；

20、(3)脫細(xì)胞：將步驟(2)處理得到的組織片置于含有1％w/v?sds的25×10-3m?edta溶液中繼續(xù)處理6h，之后再置于含有1％v/v?triton?x-100的25×10-3m?edta溶液中處理24h；

21、(4)去除殘留的表面活性劑和脂質(zhì)：依次用去離子水和異丙醇沖洗步驟(3)處理后的組織片12h；

22、(5)消除dna殘留：將步驟(4)處理得到的組織片置于含有10u/ml核酸酶的2.5×10-3m氯化鎂溶液中處理2h～6h；；

23、(6)消毒：繼續(xù)置于0.1％v/v過氧乙酸或4％v/v乙醇中消毒2h，并用去離子水和pbs沖洗，獲得所述脫細(xì)胞小腸黏膜下層。

24、本發(fā)明另一方面還提供了一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片，所述生物補(bǔ)片根據(jù)前述的制備方法制成。

25、優(yōu)選地，大口徑腸瘺的直徑大于5mm。

26、相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果至少包括：

27、1、本發(fā)明生物補(bǔ)片由再生層和黏附層組成，其中，所述黏附層由本發(fā)明創(chuàng)新制成的ppd膠粉末制成，該ppd膠粉末具有極強(qiáng)的吸水性，因而在濕潤(rùn)的腸組織表面能夠快速實(shí)現(xiàn)黏附，且操作簡(jiǎn)單，無需特殊的物理化學(xué)刺激就可實(shí)現(xiàn)其黏附作用；更關(guān)鍵的，所述黏附層黏附強(qiáng)度高，抗溶脹能力強(qiáng)，可以維持較長(zhǎng)時(shí)間的黏附作用，達(dá)到有效封堵大口徑腸瘺的作用；進(jìn)一步地，在具有有效黏附和封堵作用的前提下，通過具有合適機(jī)械力學(xué)強(qiáng)度和良好生物相容性的再生層支持腸壁細(xì)胞的黏附增殖和組織再生，促進(jìn)腸瘺愈合，達(dá)到有效修復(fù)大口徑腸瘺的目的。兩者(本發(fā)明的再生層和黏附層)共同發(fā)揮作用，相輔相成，對(duì)最終大口徑腸瘺的成功修復(fù)都提供了必不可少的技術(shù)功效。

28、2、本發(fā)明生物補(bǔ)片的雙層結(jié)構(gòu)無需提前制備或加工，其僅需將ppd粉末涂抹在再生層表面即可完成生物補(bǔ)片的制備，操作簡(jiǎn)便，無需其他復(fù)雜或特殊設(shè)備的加工，因而可在術(shù)中根據(jù)患者病況，現(xiàn)場(chǎng)制作本發(fā)明的生物補(bǔ)片，可根據(jù)出血程度、瘺口大小等，改變ppd粉末的用量和涂抹面積等，從而調(diào)節(jié)生物補(bǔ)片黏附層的面積和黏附效果，使用便捷性和靈活性高。

29、3、區(qū)別于現(xiàn)有補(bǔ)片的制備和黏附作用高度依賴化學(xué)交聯(lián)，本發(fā)明的生物補(bǔ)片中采用脫細(xì)胞組織層等作為再生層，同時(shí)，黏附層的黏附原理為吸水，因而本發(fā)明生物補(bǔ)片移植體內(nèi)后一段時(shí)間后，可被宿主完全降解，且降解產(chǎn)物不會(huì)誘發(fā)細(xì)胞炎癥與免疫排斥等反應(yīng)，從而保證大口徑腸瘺的順利治療，使用安全性高，適于臨床應(yīng)用和推廣。

技術(shù)特征：

1.一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，包括：

2.如權(quán)利要求1所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，步驟s2.1中，所述左旋多巴溶液的濃度為0.1m～1.6m，所述聚乙烯亞胺溶液的濃度為20％w/v，所述左旋多巴溶液與聚乙烯亞胺溶液按體積比1：1混合；

3.如權(quán)利要求1所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，步驟s2.1中，所述攪拌反應(yīng)的時(shí)間為10s～2min。

4.如權(quán)利要求1所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，步驟s2.2中，將含有所述膠狀沉淀物的收集管放入液氮中冷凍15min后，打開管口封上一層吸水紙，繼續(xù)冷凍干燥24h～48h除去水分，得到固體；磨碎所述固體，使用100～200目網(wǎng)篩過篩后，得到所述ppd膠粉末，真空或氮?dú)獗４鎮(zhèn)溆谩?/p>

5.如權(quán)利要求1所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，所述步驟s3具體包括：

6.如權(quán)利要求1或5所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，所述再生層表面涂抹的ppd膠粉末的用量為20mg/cm2～100mg/cm2。

7.如權(quán)利要求1所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，所述再生層包括脫細(xì)胞組織層，所述脫細(xì)胞組織層包括脫細(xì)胞真皮層或脫細(xì)胞小腸黏膜下層。

8.如權(quán)利要求7所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片的制備方法，其特征在于，所述脫細(xì)胞組織層為脫細(xì)胞小腸黏膜下層，其制備方法包含以下步驟：

9.一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片，其特征在于，根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的制備方法制成。

10.如權(quán)利要求9所述的適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片，其特征在于，其特征在于，大口徑腸瘺的直徑大于5mm。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片及其制備方法。包括：步驟S1，制備再生層；步驟S2，制備PPD膠粉末，包括：步驟S2.1，將左旋多巴溶液與聚乙烯亞胺溶液混合，攪拌反應(yīng)后，得到PD溶液；步驟S2.2，將PD溶液與聚丙烯酸溶液混合均勻，反應(yīng)后得到膠狀沉淀物，膠狀沉淀物經(jīng)凍干、研磨后，得到所述PPD膠粉末，備用；步驟S3，將PPD膠粉末涂抹于再生層的一側(cè)表面，形成黏附層，獲得適用于大口徑腸瘺修復(fù)的生物補(bǔ)片。本發(fā)明制備的黏附層能夠在腸組織表面實(shí)現(xiàn)高強(qiáng)度且長(zhǎng)時(shí)間的黏附，從而對(duì)大口徑腸瘺實(shí)現(xiàn)有效封堵；在此基礎(chǔ)上，通過具有優(yōu)良機(jī)械力學(xué)強(qiáng)度和生物相容性的再生層支撐成纖維細(xì)胞的黏附、遷移和增殖，形成成纖維細(xì)胞層將腸瘺封住，最終實(shí)現(xiàn)大口徑腸瘺的修復(fù)。

技術(shù)研發(fā)人員：李幼生,羅捷思,何琪,吳林強(qiáng),鄭好,王鵬飛,王文越
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15