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基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)方法及其試劑盒與流程

文檔序號(hào):11145839閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)方法,其特征是將6-羧基熒光素標(biāo)記單鏈DNA與目標(biāo)鏈DNA加入到Tris-HCl緩沖液中,雜交反應(yīng)后加入磺化石墨烯,室溫反應(yīng),測(cè)定520 nm處的熒光強(qiáng)度,激發(fā)波長(zhǎng)為494 nm;所使用的磺化石墨烯由以下方法制備而得:將氧化石墨烯固體分散于去離子水中,超聲處理3小時(shí)得到4 mg/mL氧化石墨烯的分散體系;往氧化石墨烯的分散體系加入5 wt %碳酸鈉溶液,以使得氧化石墨烯的分散體系的pH值為9~10,再加入30 mL濃度為0.16 g/mL 硼氫化鈉溶液,在80 ℃下攪拌1小時(shí),8000轉(zhuǎn)/分鐘離心水洗,得到中性的部分還原氧化石墨烯;將部分還原氧化石墨烯分散于去離子水中,得到部分還原氧化石墨烯懸浮液,然后加入對(duì)氨基苯磺酸重氮鹽,混勻后在冰浴條件下攪拌2小時(shí),離心雙蒸水洗滌沉淀至其pH為7,得到呈中性的耦合物;將上述所得的耦合物分散于150 mL去離子水中,加入10 mL濃度為1.6 g/mL水合肼,100 ℃下攪拌24小時(shí)進(jìn)行還原反應(yīng),然后滴加5 wt %碳酸鈉溶液沉淀磺化石墨烯,將上述制得的磺化石墨烯用雙蒸水進(jìn)行徹底洗滌,然后將磺化石墨烯進(jìn)行真空干燥,得到磺化石墨烯固體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)方法,其特征是磺化石墨烯對(duì)6-羧基熒光素標(biāo)記單鏈DNA的熒光猝滅率為98.0%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)方法,其特征是將40μL 500 nmol/L 6-羧基熒光素標(biāo)記單鏈DNA與40μL目標(biāo)鏈DNA加入到405μL 濃度為10 mmol/L的pH為8.0且含50 mmol/L NaCl 和1 mmol/L EDTA的Tris-HCl緩沖液中,37 ℃條件下雜交30分鐘,加入15μL 50μg/mL 磺化石墨烯,室溫反應(yīng)30秒,測(cè)定520 nm處的熒光強(qiáng)度,激發(fā)波長(zhǎng)為494 nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)方法,其特征是目標(biāo)鏈DNA檢測(cè)線性范圍為0.2~40 nmol/L,檢測(cè)限為12.36 pmol/L。

5.一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)試劑盒,其特征是包括a液和b液;a液為磺化石墨烯溶液,b液為含探針鏈FAM-ssDNA的Tris-HCl緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)試劑盒,其特征是a液為濃度為50μg/mL的磺化石墨烯水溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)試劑盒,其特征是b液為含44.94 nmol/L探針鏈FAM-ssDNA的10 mmol/L的Tris-HCl緩沖液,所述的Tris-HCl緩沖液其pH為8.0,且含50 mmol/L NaCl和1 mmol/L EDTA。

8.權(quán)利要求5-7任一所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)試劑盒的使用方法為:40μL目標(biāo)鏈DNA加入到445μL b液中,混合后在37 ℃條件下雜交反應(yīng)30分鐘,在混合溶液中加入15μL a液,混合后室溫反應(yīng)30秒,測(cè)定520 nm處的熒光強(qiáng)度F,激發(fā)波長(zhǎng)為494 nm。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)試劑盒的使用方法,其特征是目標(biāo)鏈DNA檢測(cè)線性范圍為0.2~40 nmol/L,檢測(cè)限為12.36 pmol/L。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的一種基于磺化石墨烯的DNA熒光檢測(cè)試劑盒的使用方法,其特征是區(qū)分單堿基錯(cuò)配DNA和目標(biāo)鏈DNA。

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