本發(fā)明涉及抗體藥物領(lǐng)域，具體地，涉及一種特異性靶向人sort1的抗體及其抗體偶聯(lián)物。

背景技術(shù)：

1、sortilin(sort1)，也稱為神經(jīng)降壓素受體-3(ntr3)，是一種多配體受體，是參與各種生物過(guò)程的液泡蛋白分選10(vps10)家族的成員。sort1由位于1號(hào)染色體短臂(1p13-3)上的sort1基因編碼。在結(jié)構(gòu)上，sort1是一種i型跨膜糖蛋白受體，具有細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、單個(gè)跨膜螺旋和短細(xì)胞質(zhì)尾。

2、sort1首先以前體形式合成。然后，該前體形式在晚期高爾基體區(qū)室內(nèi)，被切割以成熟的sort1和44個(gè)氨基酸的前體肽。當(dāng)存在于質(zhì)膜上時(shí)，sort1被基質(zhì)金屬蛋白酶脫落，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的可溶性釋放。在細(xì)胞中，90％的sort1位于細(xì)胞內(nèi)，只有10％在細(xì)胞表面。在細(xì)胞內(nèi)，sort1參與將其他蛋白質(zhì)分選到質(zhì)膜和/或溶酶體。在細(xì)胞表面時(shí)，sort1可以發(fā)揮受體或輔助受體的作用，并介導(dǎo)配體的內(nèi)吞和降解。

3、sort1在運(yùn)輸和分選各種配體中扮演不同的角色，其配體包括神經(jīng)降壓素、前顆粒蛋白和載脂蛋白。sort1與許多病理性疾病有關(guān)，包括阿爾茨海默病，心血管疾病和動(dòng)脈粥樣硬化以及2型糖尿病。另一方面，sort1在許多類型的人類癌癥中觀察到上調(diào)，例如乳腺癌、卵巢癌、胰腺、黑色素瘤和垂體腺瘤，尤其是乳腺癌。這表明sort1是潛在的靶向腫瘤的治療靶點(diǎn)。theratechnologies公司開(kāi)發(fā)了一款靶向sort1的多肽藥物偶聯(lián)物-th1902，在三陰性乳腺癌異種移植模型展現(xiàn)出顯著的腫瘤抑制活性，該藥物正處于臨床研究中。

4、隨著抗體藥物偶聯(lián)物(adc)技術(shù)的不斷發(fā)展，adc藥物已是惡性腫瘤一線及多線治療中不可或缺的藥物。目前，靶向her2、trop2、nectin4、tf1、frα等靶點(diǎn)的adc已相繼獲批上市，并在晚期實(shí)體瘤和血液瘤的臨床應(yīng)用中展現(xiàn)出強(qiáng)大的治療效果。但是不同腫瘤往往表達(dá)不同的抗原或者表達(dá)水平不同，例如her2僅在20-30％左右的乳腺癌中高表達(dá)，大部分乳腺癌表達(dá)較低的her2或不表達(dá)her2。此外，單一adc藥物治療往往會(huì)產(chǎn)生耐藥性，從而影響藥物的持續(xù)療效。因此開(kāi)發(fā)新靶點(diǎn)adc具有確實(shí)的臨床意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種特異性靶向sort1的抗體及其抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，以及所述抗體及其adc在治療sort1陽(yáng)性腫瘤，尤其是sort1陽(yáng)性及her2低表達(dá)或不表達(dá)的乳腺癌中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明的第一方面，提供了一種特異性靶向人sort1的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體的重鏈可變區(qū)包含如下所述的3個(gè)重鏈cdr：

3、hcdr1，其氨基酸序列如seq?id?no:1所示；

4、hcdr2，其氨基酸序列如seq?id?no:2所示；

5、hcdr3，其氨基酸序列如seq?id?no:3所示；

6、以及，所述抗體的輕鏈可變區(qū)包含如下所述的3個(gè)輕鏈cdr：

7、lcdr1，其氨基酸序列如seq?id?no:4所示；

8、lcdr2，其氨基酸序列如seq?id?no:5所示；

9、lcdr3，其氨基酸序列如seq?id?no:6所示。

10、在另一優(yōu)選例中，所述抗體包括單克隆抗體、單鏈抗體(scfv)、雙鏈抗體。

11、在另一優(yōu)選例中，所述抗體為動(dòng)物源抗體(例如鼠源抗體)、嵌合抗體(例如人-鼠嵌合抗體)或人源化抗體。

12、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈可變區(qū)包含與如seq?id?no:7所示的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

13、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的輕鏈可變區(qū)包含與如seq?id?no:8所示的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

14、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:7所示的氨基酸序列，和/或所述抗體的輕鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:8所示的氨基酸序列。

15、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:9-11中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列；和/或所述抗體的輕鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:12-14任一項(xiàng)所示的氨基酸序列。

16、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的輕鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:14所示的氨基酸序列，和所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:9-11中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列。

17、在另一優(yōu)選例中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自下組的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)：

18、

19、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和所述抗體的輕鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:14所示的氨基酸序列。

20、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:10所示的氨基酸序列，和所述抗體的輕鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:14所示的氨基酸序列。

21、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:11所示的氨基酸序列，和所述抗體的輕鏈可變區(qū)具有如seq?id?no:12所示的氨基酸序列。

22、在另一優(yōu)選例中，所述抗體還包含重鏈恒定區(qū)，所述的重鏈恒定區(qū)為人源或鼠源的；優(yōu)選地，為人源的。

23、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈恒定區(qū)為igg1型。

24、在另一優(yōu)選例中，所述抗體還包含輕鏈恒定區(qū)，所述的輕鏈恒定區(qū)為人源或鼠源的；優(yōu)選地，為人源的。

25、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的的輕鏈恒定區(qū)為κ鏈。

26、在另一優(yōu)選例中，所述抗體包含選自下組的重鏈和輕鏈：

27、

28、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈具有如seq?id?no:15-17中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列；和/或所述抗體的輕鏈具有如seq?id?no:18-20任一項(xiàng)所示的氨基酸序列。

29、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈具有如seq?id?no:15所示的氨基酸序列；和所述抗體的輕鏈具有如seq?id?no:20所示的氨基酸序列。

30、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈具有如seq?id?no:16所示的氨基酸序列；和所述抗體的輕鏈具有如seq?id?no:20所示的氨基酸序列。

31、在另一優(yōu)選例中，所述抗體的重鏈具有如seq?id?no:17所示的氨基酸序列；和所述抗體的輕鏈具有如seq?id?no:18所示的氨基酸序列。

32、本發(fā)明的第二方面，提供了一種重組蛋白，所述的重組蛋白具有：

33、(i)如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的序列；以及

34、(ii)任選的協(xié)助表達(dá)和/或純化的標(biāo)簽序列。

35、在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)簽序列選自下組：6×his標(biāo)簽、flag標(biāo)簽、ha標(biāo)簽。

36、本發(fā)明的第三方面，提供了一種多特異性抗體，所述多特異性抗體包含靶向人sort1的抗原結(jié)合域，所述靶向人sort1的抗原結(jié)合域包含如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。

37、在另一優(yōu)選例中，所述多特異性抗體還包含靶向其它抗原的抗原結(jié)合域，所述抗原選自下組：her2、trop2、nectin4、tf1、frα、her3、b7h3、b7h4或其組合。

38、在另一優(yōu)選例中，所述多特異性抗體包括雙特異性抗體、三特異性抗體。

39、本發(fā)明的第四方面，提供了一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，或如本發(fā)明第二方面所述的重組蛋白，或如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體。

40、在另一優(yōu)選例中，所述多核苷酸包括dna或rna。

41、本發(fā)明的第五方面，提供了一種表達(dá)載體，其包含如本發(fā)明第四方面所述的多核苷酸。

42、在另一優(yōu)選例中，所述表達(dá)載體包括真核表達(dá)載體、原核表達(dá)載體、病毒載體。

43、在另一優(yōu)選例中，所述表達(dá)載體選自dna、rna、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、其他基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)、或其組合。

44、在另一優(yōu)選例中，所述病毒載體包括慢病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒(aav)、逆轉(zhuǎn)錄病毒、或其組合。

45、本發(fā)明的第六方面，提供了一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞含有如本發(fā)明第五方面所述的載體，或基因組中整合有如本發(fā)明第四方面所述的多核苷酸。

46、在另一優(yōu)選例中，所述的宿主細(xì)胞包括原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。

47、在另一優(yōu)選例中，所述的宿主細(xì)胞選自下組：大腸桿菌、酵母細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

48、本發(fā)明的第七方面，提供了一種免疫偶聯(lián)物，所述免疫偶聯(lián)物包含：

49、(z1)如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，如本發(fā)明第二方面所述的重組蛋白，或如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體；和

50、(z2)選自下組的偶聯(lián)部分：可檢測(cè)標(biāo)記物、藥物、毒素、細(xì)胞因子、放射性核素、酶、金納米顆粒/納米棒、納米磁粒、病毒外殼蛋白或vlp、或其組合。

51、在另一優(yōu)選例中，所述偶聯(lián)物選自：熒光或發(fā)光標(biāo)記物、放射性標(biāo)記物、mri(磁共振成像)或ct(電子計(jì)算機(jī)x射線斷層掃描技術(shù))造影劑、或能夠產(chǎn)生可檢測(cè)產(chǎn)物的酶、放射性核素、生物毒素、細(xì)胞因子(如il-2等)、抗體、抗體fc片段、抗體scfv片段、金納米顆粒/納米棒、病毒顆粒、脂質(zhì)體、納米磁粒、前藥激活酶(例如，dt-心肌黃酶(dtd)或聯(lián)苯基水解酶-樣蛋白質(zhì)(bphl))、化療劑(例如，順鉑)或任何形式的納米顆粒等。

52、本發(fā)明的第八方面，提供了一種抗體藥物偶聯(lián)物(adc)，所述抗體藥物偶聯(lián)物包含如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，或如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體作為抗體部分。

53、在另一優(yōu)選例中，所述抗體-藥物偶聯(lián)物具有如下所示的結(jié)構(gòu)：

54、

55、其中，ab為抗體，其包含如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，或如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體；

56、l為連接子(linker)；

57、d為藥物；

58、n為1至10的整數(shù)或小數(shù)。

59、在另一優(yōu)選例中，所述藥物選自細(xì)胞毒性化合物、免疫調(diào)節(jié)劑、酶和激素抑制劑。

60、在另一優(yōu)選例中，所述藥物選自：deruxtecan(dxd)、單甲基澳瑞他汀e(mmae)、單甲基澳瑞他汀f(mmaf)、依喜替康(exatecan)、sn-38、艾瑞布林(eribulin)、或其組合；

61、優(yōu)選地，所述藥物選自deruxtecan(dxd)或單甲基澳瑞他汀e(mmae)。

62、在另一優(yōu)選例中，所述藥物定點(diǎn)和/或隨機(jī)地連接于所述的抗體。

63、在另一優(yōu)選例中，所述藥物連接于所述抗體的巰基。

64、在另一優(yōu)選例中，所述連接子選自：val-cit或gly-gly-phe-gly。

65、在另一優(yōu)選例中，所述n為2-8的整數(shù)或小數(shù)，優(yōu)選地為3-8的整數(shù)或小數(shù)。

66、在另一優(yōu)選例中，所述藥物為dxd，所述連接子為gly-gly-phe-gly，所述n為8。

67、在另一優(yōu)選例中，所述藥物為mmae，所述連接子為val-cit，所述n為4。

68、本發(fā)明的第九方面，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含：(a)如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第三方面所述的多特異抗體、如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物、或如本發(fā)明第八方面所述的抗體藥物偶聯(lián)物、或其組合；(b)藥學(xué)上可接受的載體。

69、在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中含有治療有效量的如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體、如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物或如本發(fā)明第八方面所述的抗體藥物偶聯(lián)物。

70、在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物中還包含治療腫瘤的其他藥物，例如化療藥物、抗生素等。

71、在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物為注射劑型。

72、在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物用于治療和/或預(yù)防sort1陽(yáng)性腫瘤(或sort1高表達(dá)的腫瘤)。

73、在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物用于治療和/或預(yù)防sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的腫瘤。

74、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤包括：乳腺癌、卵巢癌、胰腺、黑色素瘤和垂體腺瘤。

75、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的乳腺癌。

76、本發(fā)明的第十方面，提供了如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第二方面所述的重組蛋白、如本發(fā)明第三方面所述的多特異抗體、如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物、如本發(fā)明第八方面所述的抗體藥物偶聯(lián)物、或如本技術(shù)第九方面所述的藥物組合物的用途，用于：(1)制備檢測(cè)sort1蛋白的試劑、檢測(cè)板或試劑盒；或(2)制備治療和/或預(yù)防腫瘤的藥物。

77、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性腫瘤(或sort1高表達(dá)的腫瘤)。

78、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的腫瘤。

79、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤包括：乳腺癌、卵巢癌、胰腺、黑色素瘤和垂體腺瘤。

80、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的乳腺癌。

81、本發(fā)明的第十一方面，提供了一種檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑包含如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第二方面所述的重組蛋白、如本發(fā)明第三方面所述的多特異抗體、或如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物。

82、在另一優(yōu)選例中，所述檢測(cè)試劑用于檢測(cè)樣品中的sort1蛋白，或檢測(cè)受試對(duì)象體內(nèi)的sort1蛋白表達(dá)。

83、在另一優(yōu)選例中，所述檢測(cè)試劑為診斷試劑。

84、本發(fā)明的第十二方面，提供了一種檢測(cè)板，所述檢測(cè)板包括基片和測(cè)試條，所述的測(cè)試條含有如本發(fā)明第十一方面所述的檢測(cè)試劑。

85、本發(fā)明的第十三方面，提供了一種試劑盒，所述試劑盒包含如本發(fā)明第十一方面所述的檢測(cè)試劑，或如本發(fā)明第十二方面所述的檢測(cè)板。

86、在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒中包括：

87、(c1)第一容器，所述第一容器中含有如本發(fā)明所述的抗體；任選地，所述試劑盒中還包括：

88、(c2)第二容器，所述第二容器中含有靶向本發(fā)明抗體的抗體(也稱為二抗)。

89、本發(fā)明的第十四方面，提供了一種藥盒，所述藥盒包含如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第三方面所述的多特異抗體、如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物、如本發(fā)明第八方面所述的抗體藥物偶聯(lián)物、或如本技術(shù)第九方面所述的藥物組合物；以及標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)。

90、在另一優(yōu)選例中，所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)記載，所述藥盒用于治療腫瘤。

91、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性腫瘤(或sort1高表達(dá)的腫瘤)。

92、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的腫瘤。

93、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤包括：乳腺癌、卵巢癌、胰腺、黑色素瘤和垂體腺瘤。

94、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的乳腺癌。

95、本發(fā)明的第十五方面，提供了一種制備如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，或如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體的方法，包括步驟：

96、(s1)在合適的條件下，培養(yǎng)如本發(fā)明第六方面所述的宿主細(xì)胞，從而獲得含所述抗體或其抗原結(jié)合片段、或所述多特異性抗體的培養(yǎng)物；和

97、(s2)對(duì)步驟(s1)中得到的培養(yǎng)物進(jìn)行純化和/或分離，獲得所述抗體或其抗原結(jié)合片段、或所述多特異性抗體。

98、在另一優(yōu)選例中，所述純化可以通過(guò)蛋白a親和柱純化分離獲得目標(biāo)抗體。

99、在另一優(yōu)選例中，所述經(jīng)過(guò)純化分離后的目標(biāo)抗體純度大于95％，大于96％、大于97％、大于98％、大于99％，優(yōu)選為100％。

100、本發(fā)明的第十六方面，提供了一種制備如本發(fā)明第八方面所述的抗體藥物偶聯(lián)物的方法，包括步驟：

101、(s1)提供抗體，將抗體與還原試劑反應(yīng)，得到經(jīng)還原后的抗體；

102、(s2)將步驟(s1)中的還原后的抗體與連接子-藥物偶聯(lián)，從而獲得所述抗體藥物偶聯(lián)物。

103、在另一優(yōu)選例中，所述步驟(s1)中所述抗體經(jīng)還原試劑還原，從而使抗體鏈間二硫鍵被還原，產(chǎn)生巰基基團(tuán)。

104、在另一優(yōu)選例中，所述還原試劑為三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽(tcep)、beta-巰基乙醇、beta-巰基乙胺鹽酸鹽、或二硫蘇糖醇(dtt)。

105、本發(fā)明的第十七方面，提供了一種檢測(cè)樣品中sort1蛋白的方法，所述方法包括步驟：

106、(s1)將待測(cè)樣品與如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第二方面的重組蛋白、如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體、或如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物接觸；

107、(s2)檢測(cè)是否形成抗原-抗體復(fù)合物，其中形成復(fù)合物就表示樣品中存在sort1蛋白。

108、在另一優(yōu)選例中，所述方法為體外方法。

109、在另一優(yōu)選例中，所述方法為非診斷性和非治療性的。

110、本發(fā)明提供了一種治療和/或預(yù)防腫瘤的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用如本發(fā)明第一方面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、如本發(fā)明第三方面所述的多特異性抗體、如本發(fā)明第七方面所述的免疫偶聯(lián)物、如本發(fā)明第八方面所述的抗體藥物偶聯(lián)物、或如本發(fā)明第九方面所述的藥物組合物。

111、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性腫瘤(或sort1高表達(dá)的腫瘤)。

112、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的腫瘤。

113、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤包括：乳腺癌、卵巢癌、胰腺、黑色素瘤和垂體腺瘤。

114、在另一優(yōu)選例中，所述腫瘤為sort1陽(yáng)性但her2低表達(dá)或不表達(dá)的乳腺癌。

115、在另一優(yōu)選例中，所述有需要的受試者患有或疑似患有上述腫瘤。

116、在另一優(yōu)選例中，所述有需要的受試者包括人類或非人類哺乳動(dòng)物。

117、應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。