本發(fā)明涉及人參根腐病尖孢鐮刀菌檢測(cè)，特別是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌的特異性引物及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、人參根腐病是一種嚴(yán)重影響人參產(chǎn)量和品質(zhì)的病害，其主要病原菌之一是尖孢鐮刀菌（ fusarium?oxysporum）。

2、尖孢鐮刀菌是一種兼性寄生真菌，具有很強(qiáng)的生存能力，可以在土壤中存活十年以上。它屬于半知菌亞門(mén)鐮孢菌屬，菌絲纖細(xì)、無(wú)色且有隔。其大型分生孢子無(wú)色、鐮刀形、稍彎曲，具3-5個(gè)分隔；小型分生孢子無(wú)色、單胞，橢圓至卵圓形。

3、尖孢鐮刀菌主要侵染人參的根部和根莖部，導(dǎo)致參根腐爛，呈黑褐色濕腐狀，后期變?yōu)樵阈酄?，僅存中空的根皮。受害參苗地上部初期無(wú)明顯癥狀，中后期葉片褪綠變黃、萎蔫死亡。該菌引起的根腐病在高溫高濕條件下發(fā)病嚴(yán)重，尤其在7-8月份的高溫多雨季節(jié)，發(fā)病更為嚴(yán)重。

4、人參根腐病尖孢鐮刀菌（ fusarium?oxysporum）的檢測(cè)對(duì)于病害的早期診斷和有效防治至關(guān)重要。但目前檢測(cè)人參根腐病尖孢鐮刀菌的方法主要依據(jù)梯度稀釋分離法，存在周期長(zhǎng)、可重復(fù)性差等局限性，有待進(jìn)一步建立和完善?；诖耍崆皩?duì)種植人參土壤中的根腐病菌進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測(cè)，評(píng)估其潛在的病害風(fēng)險(xiǎn)，建立人參尖孢鐮刀菌穩(wěn)定、快速和準(zhǔn)確地檢測(cè)體系，并開(kāi)展宜參土壤和宜參種子檢測(cè)，對(duì)于生產(chǎn)上采取精準(zhǔn)、有效的防治措施具有非常重要的指導(dǎo)意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種用于實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌的特異性引物及應(yīng)用。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是按照以下技術(shù)方案實(shí)施的：

3、本發(fā)明提供的第一個(gè)技術(shù)方案是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌的特異性引物，包括pcr特異引物和qpcr特異引物；

4、其中，所述pcr特異引物包括：

5、12269-f：gacagagttaggacgaccttggacc;

6、12269-r：cccttggctcagtcttcccacggtc；

7、所述qpcr特異引物包括：

8、上游引物p-f2：tgacgggtttggtgattc；

9、下游引物p-r2：ccaggcatactgtcatagg。

10、本發(fā)明提供的第二個(gè)技術(shù)方案是一種特異性引物在實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌中的應(yīng)用。

11、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明利用設(shè)計(jì)的特異性引物能夠?qū)ν寥乐幸鹑藚⒏〉募怄哏牭毒M(jìn)行快速定量檢測(cè)，依據(jù)實(shí)時(shí)定量pcr檢測(cè)結(jié)果建立標(biāo)準(zhǔn)方程，明確土壤帶菌量與根腐病發(fā)生的關(guān)系；不僅為人參根腐病的早期預(yù)防、診斷、監(jiān)測(cè)提供安全可靠的技術(shù)支持，還可以保障人參生產(chǎn)安全、減少經(jīng)濟(jì)損失，推動(dòng)人參產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量可持續(xù)發(fā)展。

技術(shù)特征：

1.一種用于實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌的特異性引物，其特征在于，包括pcr特異引物和qpcr特異引物；

2.一種如權(quán)利要求1所述的特異性引物在實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于人參根腐病尖孢鐮刀菌檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種用于實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)土壤中人參根腐病尖孢鐮刀菌的特異性引物及應(yīng)用，包括PCR特異引物和qPCR特異引物；其中，PCR特異引物包括：12269?F：GACAGAGTTAGGACGACCTTGGACC;12269?R：CCCTTGGCTCAGTCTTCCCACGGTC；qPCR特異引物包括：上游引物P?F2：TGACGGGTTTGGTGATTC；下游引物P?R2：CCAGGCATACTGTCATAGG。本發(fā)明利用設(shè)計(jì)的特異性引物能夠?qū)ν寥乐幸鹑藚⒏〉募怄哏牭毒M(jìn)行快速定量檢測(cè)，依據(jù)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果建立標(biāo)準(zhǔn)方程，明確土壤帶菌量與根腐病發(fā)生的關(guān)系；不僅為人參根腐病的早期預(yù)防、診斷、監(jiān)測(cè)提供安全可靠的技術(shù)支持，還可以保障人參生產(chǎn)安全、減少經(jīng)濟(jì)損失，推動(dòng)人參產(chǎn)業(yè)的高質(zhì)量可持續(xù)發(fā)展。

技術(shù)研發(fā)人員：盧寶慧,王春琳,高潔,王騫祎,馮時(shí),楊麗娜,王雪,曾誠(chéng)誠(chéng),劉麗萍,盧霈瑤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15