人ckip1基因的用途及其相關(guān)藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及人CKIPl基因的用途及其相關(guān)藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 核糖核酸干擾（RNA interference, RNAi)現(xiàn)象是指當(dāng)與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)某 段序列同源的雙鏈RNA (dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞后，該mRNA發(fā)生特異性降解，而導(dǎo)致該基因 表達(dá)的沉默。研究表明，長(zhǎng)度為21-23nt的雙鏈RNA能夠在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平特異性 的引起 RNAi (Tuschl T, Zamore PD,Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at2Ito23nucleotide intervals. Cell2000;101:25-33.)。腫瘤是威脅人類健康的主要疾病。腫瘤患者雖經(jīng)化療、放療和綜 合治療，但五年生存率仍很低，如能對(duì)腫瘤發(fā)病和進(jìn)展有關(guān)的基因進(jìn)行干預(yù)，將能為腫瘤的 治療開辟新途徑。近年來，RNAi已成為腫瘤的基因治療的有效策略。利用RNAi技術(shù)可以 抑制原癌基因、突變的抑癌基因、細(xì)胞周期相關(guān)基因、抗凋亡相關(guān)基因等的表達(dá)來抑制腫瘤 的發(fā)生和發(fā)展（Uprichard，Susan LThe therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters2005;579:5996-6007. )〇
[0003] CKIPl 又名 PLEKH01，PLEKH01 在介導(dǎo)包括 CK2a，CPa，AP-l/c-Jun，Akt，ATM， IFP35/Nmi和Smurfl等蛋白的相互作用中發(fā)揮重要功能。通過增強(qiáng)Smurfl的泛素連接 酶活性，PLEKH01可以抑制成骨細(xì)胞的分化和骨的形成，是治療骨骼疾病，如骨質(zhì)疏松癥的 潛在革巴標(biāo)。[Denis G. Boscj Kevin C. Graham, Ronald B. Saulnierj Cunjie Zhang, David Prober,R. Daniel Gietzj David W. Litchfield. Identification, characterization of CKIP-Ij a novel pleckstrin homology domain-containing protein that interacts with protein kinase CK2. J Biol Chem2000; 275:14295 - 14306. Zhang L，Xing G，Tie Y，Tang Y，Tian C，Li L Role for the pleckstrin homology domain-containing protein CKIP-1 in AP-lregulation, apoptosis. EMBO J2005;24:766 - 778. Alexias Safi, Marie Vandrommej Sabine Caussanelj Laure Valdaccij Dominique Baas,Marc Vidal,Gilbert Brun，Laurent Schaeffer, EvelyneGoillotl.Role for the pleckstrin homology domain-containing protein CKIP-lin phosphatidylinositoI3-kinase-regulated muscle differentiation. Mol Cell Biol2004;24:1245 - 1255.]
[0004] PLEKH01可以與Akt結(jié)合并抑制Akt的激酶活性，而Akt的激活與多種癌癥的發(fā) 生發(fā)展密切相關(guān)[Hennessy BT，Smith DL，Ram PT, Lu Y，Mills GB. Exploiting the PI3K/ AKT pathway for cancer drugdiscovery.Nat Rev Drug Discov2005;4:988_ 1004·]。在 體外實(shí)驗(yàn)中，PLEKH01可以抑制纖維肉瘤的生長(zhǎng)。PLEKH01過表達(dá)的移植瘤在體內(nèi)的生長(zhǎng)也 受到了抑制。這暗示PLEKH01可能是潛在的抑癌基因 。[Emi Tokuda，Naoya Fujita，Tomoko Oh-hara，Shigeo Sato,Atsuo Kurataj Ryohei Katayamaj Toshiki Itoh，Tadaomi Takenawaj Kohei Miyazonoj Takashi Tsuruo. Casein kinase2_interacting protein-1, a novel Akt pleckstrin homology domain-interacting protein,down-regulates PI3K/ Akt signaling, suppresses tumor growth in vivo. Cancer Res2007;67:9666 - 9676]〇 結(jié)直腸癌中進(jìn)行的研究進(jìn)一步印證了這個(gè)結(jié)論。PLEKH01在超過60%的結(jié)直腸癌患者 的組織中低表達(dá)，這是關(guān)于PLEKH01與臨床癌癥患者的首次報(bào)道。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均表 明CKIP過表達(dá)可以抑制細(xì)胞的增殖。PLEKH01通過抑制Akt通路，下調(diào)胞內(nèi)Smurfl的 蛋白量促進(jìn)增殖。[J Nie, L Liu, G Xing, M Zhang, RWei, M Guo, XLi, P Xie, L Li, F He, W Han, L Zhang. CKIP-Iacts as a colonic tumor suppressor by repressing oncogenic Smurflsynthesis and promoting Smurfl autodegradation. Oncogene advance online p ublication2S印tember2013; doi : 10. 1038/onc. 2013. 340]。對(duì) PLEKH01 與癌癥的相關(guān)性研 究才剛剛開始，并且，目前關(guān)于PLEKH01在肝癌、胃癌、乳腺癌、乳腺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤增殖和 惡性進(jìn)展中的功能尚無報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于公開與人CKIPl (pleckstrin homology domain containing, family 0 memberl，PLEKH01)基因相關(guān)的治療方法及藥物，以RNA干擾（RNAi) 為手段研究CKIPl基因在腫瘤細(xì)胞的存活和凋亡過程中的作用。
[0006] 本發(fā)明第一方面，以RNA干擾為手段，研究了 CKIPl基因在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的作 用，公開了一種抑制或降低腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和/或存活的方法，該方法包括：向腫 瘤細(xì)胞施用一種能夠特異性抑制CKIPl基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性抑制eIF5B蛋白 的表達(dá)或活性的分子，以此來抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化和/或存活。
[0007] 所述腫瘤細(xì)胞選自其生長(zhǎng)與CKIPl蛋白的表達(dá)或活性相關(guān)的腫瘤細(xì)胞。較優(yōu)的， 所述腫瘤細(xì)胞選自肺癌、膠質(zhì)瘤、肝癌之任一。
[0008] 所述抑制或降低腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用 量為足夠降低CKIPl基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠降低CKIPl蛋白的表達(dá)或活性的劑量。進(jìn) 一步的，所述CKIPl基因的表達(dá)至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。
[0009] 所述分子可選自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、 多肽、蛋白或干擾慢病毒。
[0010] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA (esiRNA)或者短發(fā)夾RNA (shRNA)。
[0011] 所述雙鏈RNA、核酶、esiRNA或者ShRNA含有CKIPl基因的啟動(dòng)子序列或CKIPl基 因的信息序列。
[0012] 進(jìn)一步的，所述雙鏈RNA為小干擾RNA(SiRNA)。所述小干擾RNA包含第一鏈和第 二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補(bǔ)共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與CKIPl 基因中15-27個(gè)連續(xù)的核苷酸序列基本相同。所述小分子干擾RNA能特異性結(jié)合靶序列所 編碼的mRNA片段，并特異性沉默人CKIPl基因的表達(dá)。
[0013] 進(jìn)一步的，所述小干擾RNA的第一鏈序列與CKIPl基因中的靶序列基本相同。較 優(yōu)的，所述CKIPl基因中的靶序列含有SEQ ID NO: 1-17中之任一序列。
[0014] 所述CKIPl基因中的靶序列即為所述小分子干擾RNA特異性沉默CKIPl基因表達(dá) 時(shí)，與所述的小分子干擾RNA互補(bǔ)結(jié)合的mRNA片段所對(duì)應(yīng)的CKIPl基因中的片段。
[0015] 較佳的，所述CKIPl基因來源于人。
[0016] 本發(fā)明第一方面還公開了一種分離的人CKIPl基因在制備或篩選腫瘤治療藥物， 或者在制備腫瘤診斷藥物中的用途。
[0017] 進(jìn)一步的，所述腫瘤選自肺癌、膠質(zhì)瘤或肝癌之任一。
[0018] 所述將分離的CKIPl基因用于制備或篩選腫瘤治療藥物包括兩方面的內(nèi)容：其 一，將CKIPl基因作為藥物或制劑針對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備腫瘤治療藥物或制 齊Ij ;其二，將CKIPl基因作為藥物或制劑針對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選腫瘤治療藥 物或制劑。
[0019] 所述將CKIPl基因作為藥物或制劑針對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備腫瘤治 療藥物或制劑具體是指：將CKIPl基因作為RNA干擾作用的靶標(biāo)，來研制針對(duì)腫瘤細(xì)胞的藥 物或制劑，從而能降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)CKIPl基因的表達(dá)水平。
[0020] 所述將CKIPl基因作為藥物或制劑針對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選腫瘤治 療藥物或制劑具體是指：CKIPl基因作為作用對(duì)象，對(duì)藥物或制劑進(jìn)行篩選，以找到可以抑 制或促進(jìn)人CKIPl基因表達(dá)的藥物作為腫瘤治療備選藥物。如本發(fā)明所述的CKIPl基因小 分子干擾RNA (SiRNA)即是以人CKIPl基因?yàn)樽饔脤?duì)象篩選獲得的，可用作具有抑制腫瘤 細(xì)胞增殖作用的藥物。除此之外，諸如抗體藥物，小分子藥物等也可將CKIPl基因及其蛋白 作為作用對(duì)象。
[0021] 所述將CKIPl基因用于制備腫瘤診斷藥物，是指將CKIPl基因表達(dá)產(chǎn)物作為一項(xiàng) 腫瘤診斷指標(biāo)應(yīng)用于腫瘤診斷藥物的制備。
[0022] 所述腫瘤治療藥物為能夠特異性抑制CKIPl基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性抑 制CKIPl蛋白的表達(dá)或活性的分子，從而降低腫瘤細(xì)胞中CKIPl基因的表達(dá)水平，達(dá)到抑制 腫瘤細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)、分化和/或存活的目的。
[0023] 所述通過分離的CKIPl基因制備或篩選獲得的腫瘤治療藥物或者腫瘤診斷藥物 包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢病 毒。
[0024] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA (esiRNA)或者短發(fā)夾RNA (shRNA)。
[0025] 所述腫瘤治療藥物的施用量為足夠降低人CKIPl基因