人tm7sf4基因的用途及其相關(guān)藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及人TM7SF4基因的用途及其相關(guān)藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 核糖核酸干擾（RNA interference, RNAi)現(xiàn)象是指當(dāng)與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)某 段序列同源的雙鏈RNA (dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞后，該mRNA發(fā)生特異性降解，而導(dǎo)致該基因 表達(dá)的沉默。研究表明，長度為21-23nt的雙鏈RNA能夠在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平特異性 的引起 RNAi (Tuschl T, Zamore PD,Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at2Ito23nucleotide intervals. Cell2000;101:25-33.)。腫瘤是威脅人類健康的主要疾病。腫瘤患者雖經(jīng)化療、放療和綜 合治療，但五年生存率仍很低，如能對腫瘤發(fā)病和進(jìn)展有關(guān)的基因進(jìn)行干預(yù)，將能為腫瘤的 治療開辟新途徑。近年來，RNAi已成為腫瘤的基因治療的有效策略。利用RNAi技術(shù)可以 抑制原癌基因、突變的抑癌基因、細(xì)胞周期相關(guān)基因、抗凋亡相關(guān)基因等的表達(dá)來抑制腫瘤 的發(fā)生和發(fā)展（Uprichard, Susan L. The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters2005;579:5996-6007. )〇
[0003] Tm7sf4基因編碼7次跨膜蛋白，主要分布在樹突狀細(xì)胞中，編碼的蛋白主要 參與樹突狀細(xì)胞參與的免疫反應(yīng)中，在破骨細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞分化中發(fā)揮重要的作 用。Tm7sf4基因與破骨細(xì)胞的發(fā)生和破骨細(xì)胞的融合有一定的調(diào)節(jié)作用，體外實(shí)驗(yàn)證 明a-tocopherol可以刺激破骨細(xì)胞的融合，并且不依賴于抗氧化劑的活力，通過誘導(dǎo) 樹突狀細(xì)胞特異性的跨膜蛋白，這種蛋白對破骨細(xì)胞的融合發(fā)揮重要的作用，它是通過 激活MAPK14和microphthalmia相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子和直接招募Tm7sf4啟動子來發(fā)揮作 用，事實(shí)上，在Ttpa-/-老鼠上骨髓的反?，F(xiàn)象都可以通過轉(zhuǎn)入Tm7sf4基因得以逆轉(zhuǎn)。 (K, Iwasaki M, Ochi H, Fukuda T, Ma C et al. (2012)Vitamin E decreases bone mass by stimulating osteoclast fusion. Nat Medl8:589-594)另外 Tm7sf4 基因在牙周膜組 織中與牙泡組織相比有明顯上調(diào)的趨勢（Lee H_S，Lee J，Kim S-〇，Song J_S，Lee J_H，et al. (2013)Comparative Gene-Expression Analysis of the Dental Follicle and PeriodontalLigament in Humans. PLoS 0NE8(12):)，有報(bào)道在甲狀腺乳頭狀癌中 TM7SF4 為高表達(dá) ° (Hyun Sook Kim1Do Hyung Kim1Ji Yeon Kim, Nam Ho Jeoung, In Kyu Lee, Jin Gu Bong, and Eui Dal JungMicroarray Analysis of Papillary Thyroid Cancers in KoreanKorean J Intern Med. 2010; 25 (4) :399-407)還有報(bào)到用化的方法分析發(fā)現(xiàn) TM7SF4 基因與肝臟的疾病有一定的關(guān)系。（Hyo Young Kil, Seoae Ch2, Jeongmi Yu, Samsun Sung&Heebal KimAnalysis of copy number variation in8,842Korean individuals reveals39genes associated with hepatic biomarkers AST and ALT).然而，目前關(guān)于 TM7SF4基因在腫瘤發(fā)生過程中的作用尚無任何報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于公開與人TM7SF4(transmembrane7superfamily member4)基因 相關(guān)的治療方法及藥物，以RNA干擾（RNAi)為手段研究TM7SF4基因在腫瘤細(xì)胞的存活和 凋亡過程中的作用。
[0005] 本發(fā)明第一方面，以RNA干擾為手段，研究了 TM7SF4基因在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的 作用，公開了一種抑制或降低腫瘤細(xì)胞生長、增殖、分化和/或存活的方法，該方法包括：向 腫瘤細(xì)胞施用一種能夠特異性抑制TM7SF4基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性抑制eIF5B蛋 白的表達(dá)或活性的分子，以此來抑制腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、分化和/或存活。
[0006] 所述腫瘤細(xì)胞選自其生長與TM7SF4蛋白的表達(dá)或活性相關(guān)的腫瘤細(xì)胞。較優(yōu)的， 所述腫瘤細(xì)胞選自乳腺癌之任一。
[0007] 所述抑制或降低腫瘤細(xì)胞生長、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用 量為足夠降低TM7SF4基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠降低TM7SF4蛋白的表達(dá)或活性的劑量。 進(jìn)一步的，所述TM7SF4基因的表達(dá)至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。
[0008] 所述分子可選自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、 多肽、蛋白或干擾慢病毒。
[0009] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA (esiRNA)或者短發(fā)夾RNA (shRNA)。
[0010] 所述雙鏈RNA、核酶、esiRNA或者ShRNA含有TM7SF4基因的啟動子序列或TM7SF4 基因的彳目息序列。
[0011] 進(jìn)一步的，所述雙鏈RNA為小干擾RNA( SiRNA)。所述小干擾RNA包含第一鏈和第二 鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補(bǔ)共同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與TM7SF4 基因中15-27個(gè)連續(xù)的核苷酸序列基本相同。所述小分子干擾RNA能特異性結(jié)合靶序列所 編碼的mRNA片段，并特異性沉默人TM7SF4基因的表達(dá)。
[0012] 進(jìn)一步的，所述小干擾RNA的第一鏈序列與TM7SF4基因中的靶序列基本相同。較 優(yōu)的，所述TM7SF4基因中的靶序列含有SEQ ID NO: 1-9中之任一序列。
[0013] 所述TM7SF4基因中的靶序列即為所述小分子干擾RNA特異性沉默TM7SF4基因表 達(dá)時(shí)，與所述的小分子干擾RNA互補(bǔ)結(jié)合的mRNA片段所對應(yīng)的TM7SF4基因中的片段。
[0014] 較佳的，所述TM7SF4基因來源于人。
[0015] 本發(fā)明第一方面還公開了一種分離的人TM7SF4基因在制備或篩選腫瘤治療藥 物，或者在制備腫瘤診斷藥物中的用途。
[0016] 進(jìn)一步的，所述腫瘤選自乳腺癌。
[0017] 所述將分離的TM7SF4基因用于制備或篩選腫瘤治療藥物包括兩方面的內(nèi)容：其 一，將TM7SF4基因作為藥物或制劑針對腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備腫瘤治療藥物或 制劑；其二，將TM7SF4基因作為藥物或制劑針對腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選腫瘤治療 藥物或制劑。
[0018] 所述將TM7SF4基因作為藥物或制劑針對腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備腫瘤治 療藥物或制劑具體是指：將TM7SF4基因作為RNA干擾作用的靶標(biāo)，來研制針對腫瘤細(xì)胞的 藥物或制劑，從而能降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)TM7SF4基因的表達(dá)水平。
[0019] 所述將TM7SF4基因作為藥物或制劑針對腫瘤細(xì)胞的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選腫瘤治 療藥物或制劑具體是指：TM7SF4基因作為作用對象，對藥物或制劑進(jìn)行篩選，以找到可以 抑制或促進(jìn)人TM7SF4基因表達(dá)的藥物作為腫瘤治療備選藥物。如本發(fā)明所述的TM7SF4基 因小分子干擾RNA (siRNA)即是以人TM7SF4基因?yàn)樽饔脤ο蠛Y選獲得的，可用作具有抑制 腫瘤細(xì)胞增殖作用的藥物。除此之外，諸如抗體藥物，小分子藥物等也可將TM7SF4基因及 其蛋白作為作用對象。
[0020] 所述將TM7SF4基因用于制備腫瘤診斷藥物，是指將TM7SF4基因表達(dá)產(chǎn)物作為一 項(xiàng)腫瘤診斷指標(biāo)應(yīng)用于腫瘤診斷藥物的制備。
[0021] 所述腫瘤治療藥物為能夠特異性抑制TM7SF4基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或能夠特異性 抑制TM7SF4蛋白的表達(dá)或活性的分子，從而降低腫瘤細(xì)胞中TM7SF4基因的表達(dá)水平，達(dá)到 抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、生長、分化和/或存活的目的。
[0022] 所述通過分離的TM7SF4基因制備或篩選獲得的腫瘤治療藥物或者腫瘤診斷藥物 包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂類、小分子化學(xué)藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢病 毒。
[0023] 所述核酸包括但不限于：反義寡核苷酸、雙鏈RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶 ΠΙ制備的小干擾RNA (esiRNA)或者短發(fā)夾RNA (shRNA)。
[0024] 所述腫瘤治療藥物的施用量為足夠降低人TM7SF4基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠 降低人TM7SF4蛋白的表達(dá)或活性的劑量。以使人TM7SF4基因的表達(dá)至少被降低50%、80%、 90%、95% 或 99%。
[0025] 采用前述腫瘤治療藥物治療腫瘤的方法，主要是通過降低人TM7SF4基因的表達(dá) 水平抑制腫瘤細(xì)胞的增殖來達(dá)到治療的目的。具體的，治療時(shí)，將能有效降低人TM7SF4基 因表達(dá)水平的物質(zhì)給藥于患者。
[0026] 本發(fā)明第二方面公開了一種降低腫瘤細(xì)胞中TM7SF4基因表達(dá)的分離的核酸分 子，所述核酸分子包含 ：
[0027] a)雙鏈RNA，所述雙鏈RNA中含有能夠在嚴(yán)緊條件下與TM7SF4基因雜交的核苷酸 序列；或者
[0028] b) shRNA，所述shRNA中含有能夠在嚴(yán)緊條件下與TM7SF4基因雜交的核苷酸序列。
[0029] 進(jìn)一步的，所述雙鏈RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補(bǔ)共 同形成RNA二聚體，并且所述第一鏈的序列與TM7SF4基因中15-27個(gè)連續(xù)的核苷酸序列基 本相同。較佳的，所述第一鏈的序列與TM7SF4基因中19-23個(gè)連續(xù)的核苷酸序列基本相同； 更佳的，所述第一鏈的序列與TM7SF4基因中19個(gè)連續(xù)的核苷酸序列基本相同。
[0030] 更進(jìn)一步的，所述雙鏈RNA包含第一鏈和第二鏈，所述第一鏈和所述第二鏈互補(bǔ) 共同形成