本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法檢測20種防曬劑的方法，屬于質(zhì)量檢測領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、隨著防曬概念不斷普及，防曬化妝品得到人們的廣泛使用，包括防曬霜、防曬乳、防曬噴霧、隔離霜、唇膏以及粉餅等，用量通常在0.1％～10％之間。我國《化妝品安全技術(shù)規(guī)范2015版》第三章第二節(jié)中收載了27種準(zhǔn)用防曬劑，包括25種化學(xué)防曬劑和2種物理防曬劑，并對其最大使用濃度有不同要求。

2、目前，防曬劑的檢測方法主要采用了2019年國家藥品監(jiān)督管理局頒布的第40號公告(以下簡稱《第40號公告》)關(guān)于化妝品中3-亞芐基樟腦等22種防曬劑的檢測方法。該方法中液相色譜流動相條件使用了一定比例的四氫呋喃和高氯酸。其中流動相四氫呋喃易揮發(fā)，毒性較強(qiáng)，對于液相儀器中塑料件有腐蝕作用，會縮短儀器使用壽命。

3、cn201810685610.8，發(fā)明名稱：一種同時測定化妝品中19種防曬劑的方法，涉及一種同時測定化妝品中19種防曬劑的方法。該方法包含：單標(biāo)母液配制；混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；供試品溶液的配制和液相色譜測定。系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及供試品溶液的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線型范圍內(nèi)，根據(jù)峰保留時間定性，根據(jù)峰面積定量。該方法在c18色譜柱上對甲氧基肉桂酸異戊酯、乙基已基三嗪酮、雙-乙基已基苯酚甲氧苯基三嗪、二乙基已基丁酰胺基三嗪酮、二苯酮-3、二苯酮-5、二苯酮-2、paba乙基己酯、亞芐基樟腦磺酸、二乙氨羥苯甲?；郊姿嵋氧?、對氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸、4-甲基芐亞基樟腦、丁基甲氧基二苯甲?；淄?、奧克立林、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水楊酸乙基已酯、胡莫柳酯和亞甲基雙-苯并三唑基四甲基丁基酚合計19中防曬劑進(jìn)行分離。

4、張科明，超高效液相色譜－二極管陣列檢測法同時測定化妝品中22種防曬劑，色譜，2021年4月，建立了一種超高效液相色譜－二極管陣列檢測法同時測定不同種類化妝品中22種防曬劑的方法，色譜條件為：色譜柱：

5、agilent?poroshell?120ec-c18?column(100mm×4.6mm，2.7μm)；流動相：a為50mmol/l乙酸銨水溶液(含0.05％(v/v)甲酸)，b為乙腈，c為異丙醇。

6、梯度洗脫程序：

7、0～5min，80％a～50％a，10％b～25％b，10％c～25％c；

8、5～8min，50％a～30％a，25％b～42％b，25％c～28％c；

9、8～22min，30％a～25％a，42％b～45％b，28％c～30％c；

10、22～26min，25％a～0％a，45％b～50％b，30％c～50％c；

11、26～33min，0％a，50％b，50％c；

12、33～35min，0％a～80％a，50％b～10％b，50％c～10％c；

13、35～38min，80％a，10％b，10％c。

14、流速：0.5ml/min；進(jìn)樣量：5μl；檢測波長：311nm；柱溫：25℃。

15、許醉笑，反相高效液相色譜法同時測定化妝品中15種防曬劑，廣東化工，2017年第2期，公開了防曬化妝品中苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮-4、對氨基苯甲酸、二苯酮-3、p-甲氧基肉桂酸異戊酯、4-甲基芐亞基樟腦、paba乙基己酯、丁基甲氧基二苯酰基甲烷、奧克立林、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水楊酸乙基己酯、胡莫柳酯、乙基己基三嗪酮、亞甲基雙-苯并三唑基四甲基丁基酚、雙-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪15種防曬劑同時測定的反相高效液相色譜法。

16、唐娜等，高效液相色譜法同時測定化妝品中15種防曬劑，日用化學(xué)工業(yè)，2016年7月，摘要：優(yōu)化和改進(jìn)了《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)規(guī)定的測定化妝品中15種防曬劑的高效液相色譜法。樣品經(jīng)v(甲醇)∶v(四氫呋喃)∶v(水)∶v(0.067％高氯酸)＝250∶450∶300∶0.2的混合溶液提取后，使用kromasil?c18色譜柱分離，以甲醇、四氫呋喃和0.067％高氯酸的混合溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，流速1ml/min，檢測波長311nm。

17、韓曉萍，高效液相色譜法同時測定化妝品中的19種防曬劑，中國衛(wèi)生檢驗雜志2018年5月第28卷第9期，采用高效液相色譜法建立同時測定不同種類化妝品中19種防曬劑含量的方法。方法樣品使用甲醇－四氫呋喃(4∶1)混合溶液提取，經(jīng)phenomenex?luna?c18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)進(jìn)行分離，流動相a為20％異丙醇的甲醇溶液(含0.1％甲酸)，b為0.05％甲酸水溶液，流速為1.2ml/min，梯度洗脫，以300nm和350nm波長作為定量波長，同時進(jìn)行檢測。文章中選用的流動相條件在17-35min階段a：100％，b0％；下一針0-5min階段a75％，b25％。在前后兩針進(jìn)樣過程中沒有平衡好流動相，容易導(dǎo)致前后進(jìn)樣出峰時間偏差。

18、《化妝品安全技術(shù)規(guī)范2015版》2019年新增了22種防曬劑的檢測方法，雖然新方法對22種防曬劑的提取操作便捷高效，但流動相中四氫呋喃含量較高，對液相色譜peek管路腐蝕較大；三個體系流動相的條件對儀器設(shè)備的模塊化管理程度要求較高。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種高效液相色譜法檢測20種防曬劑的方法。

2、本發(fā)明提供了一種高效液相色譜法檢測20種防曬劑的方法，它是采用高效液相色譜-二極管陣列檢測法檢測20種防曬劑，

3、色譜條件為：

4、色譜柱：sepachrom?robusta?c18，50mm×4.6，5μm；流動相：a為乙醇：甲醇(v:v＝1:3)混合溶液，b為0.1％(v/v)甲酸水溶液；柱溫：35℃；流速：1.0ml/min；檢測波長：丁基甲氧基二苯甲?；淄闉?60nm；其余防曬劑為311nm；進(jìn)樣量：10μl。

5、梯度洗脫程序如表所示：

6、

7、其中，所述的20種防曬劑為：3-亞芐基樟腦、4-甲基芐亞基樟腦、二苯酮-3、二苯酮-4、亞芐基樟腦磺酸、丁基甲氧基二苯甲?；淄椤⒄聊X苯扎銨甲基硫酸鹽、二乙氨羥苯甲?；郊姿峒乎?、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮、甲酚曲唑三硅氧烷、二甲基paba乙基己酯、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水楊酸乙基己酯、乙基己基三嗪酮、胡莫柳酯、對甲氧基肉桂酸異戊酯、亞甲基雙-苯并三唑基四甲基丁基酚、奧克立林、苯基苯并咪唑磺酸、對苯二亞甲基二樟腦磺酸。

8、具體地，它包括如下步驟：

9、a、待檢樣品前處理：

10、取化妝品樣品，加入含0.1％氨水的四氫呋喃溶液溶解分散，加入含0.1％氨水的甲醇水溶液混合，5000r/min離心5min～10min，取清液，過濾，待用；

11、b、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：

12、混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：精確稱取10mg苯基苯并咪唑磺酸標(biāo)準(zhǔn)品至10ml棕色容量瓶，用氨水甲醇溶液定容。精確稱取10mg其余19種防曬劑標(biāo)準(zhǔn)品至10ml棕色容量瓶，用含0.1％氨水的四氫呋喃溶液定容；

13、c、按權(quán)利要求1所述的色譜條件檢測。

14、其中，a步驟所述的待檢樣品包括水基類、膏霜乳液類、蠟基類化妝品；其中，水基類、膏霜乳液類樣品采用渦旋或超聲分散；蠟基類樣品采用60℃水浴，振蕩加熱1min～2min溶解分散。

15、本發(fā)明與cn201810685610.8公開的方法相比,除二苯酮-2，雙-乙基已基苯酚甲氧苯基三嗪之外，其余17種組分均能有分離，并能夠?qū)Α兜?0號公告》中要求的3-亞芐基樟腦，樟腦苯扎銨甲基硫酸鹽，甲酚曲唑三硅氧烷進(jìn)行有效分離。

16、本發(fā)明與張科明文章(張科明，超高效液相色譜－二極管陣列檢測法同時測定化妝品中22種防曬劑，色譜，2021年4月)公開的方法相比，有19種相同組分能夠分離；并能夠?qū)Σ⒛軌驅(qū)Α兜?0號公告》中要求的二乙氨羥苯甲酰基苯甲酸己酯進(jìn)行分離。此外，文章中檢測流動相采用了三元泵，需要精密控制c泵的流量才能做到較好的分離效果，對儀器設(shè)備要求較高。

17、本發(fā)明與許醉笑的文章(許醉笑，反相高效液相色譜法同時測定化妝品中15種防曬劑，廣東化工，2017年第2期)公開的內(nèi)容方法相比，除雙-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪，對氨基苯甲酸，僅有13種成分相同。文章中流動相條件和《第40號公告》中差別不大，均用到了40％左右的四氫呋喃，雖然分離效果較好，但對儀器腐蝕性較大。

18、本發(fā)明與唐娜(唐娜等，高效液相色譜法同時測定化妝品中15種防曬劑，日用化學(xué)工業(yè)，2016年7月)公開的方法相比，僅有14種成分相同。而且，文章中流動相條件同樣和《第40號公告》中差別不大，均用到了40％左右的四氫呋喃，雖然分離效果較好，但對儀器腐蝕性較大。

19、本發(fā)明與韓曉萍(韓曉萍，高效液相色譜法同時測定化妝品中的19種防曬劑，中國衛(wèi)生檢驗雜志2018年5月第28卷第9期)中方法相比，除雙-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪，二苯酮-2以外，有17種成分相同。由于檢測成分復(fù)雜，不同的成分的極性、分子大小、酸堿性、溶解性、含有的官能團(tuán)等都會影響最終的檢測結(jié)果，在檢測對象不同的情況下，成功將待檢成分分離是高效液相檢測中的難點。

20、本發(fā)明采用常規(guī)甲醇、乙醇并加入甲酸調(diào)節(jié)ph值并作為流動相，并優(yōu)化梯度洗脫條件，做到3-亞芐基樟腦等20種防曬劑組分的分離。本發(fā)明選取水基類、膏霜乳液類、蠟基類等不同類型基質(zhì)進(jìn)行分析，對分析過程中采用的流動相種類進(jìn)行優(yōu)化，做到基線穩(wěn)定，溶劑安全環(huán)保。在色譜柱上，采用常規(guī)5.0μm粒徑的c18色譜柱，實現(xiàn)了20種組分的分離。本方法簡便快捷，儀器耗材要求較低，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，綠色環(huán)保。