專(zhuān)利名稱(chēng)：：微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及畜牧行業(yè)，尤其涉及一種微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：仔豬腹瀉是養(yǎng)豬生產(chǎn)中的一種典型的多因素疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)，仔豬腹瀉的發(fā)病率為35%，其間接損失又表現(xiàn)在治愈仔豬生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，飼料轉(zhuǎn)化率低，嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。自2006年5月以來(lái)，在全國(guó)各地先后爆發(fā)流行豬高熱病，引起大批豬只發(fā)病死亡，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。直至目前，高熱病仍在全國(guó)22個(gè)省份的豬群中發(fā)生流行，危害豬只的健康生長(zhǎng)，威脅著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展?？股卦陴B(yǎng)殖中的使用所帶來(lái)的不良后果大家都己充分認(rèn)識(shí)。許多專(zhuān)家都認(rèn)為在全國(guó)很多地區(qū)廣泛流行的"豬高熱病"的一個(gè)重要原因是豬的免疫力低下，抗病力低，而長(zhǎng)期地、大劑量地使用抗生素是導(dǎo)致豬免疫力低下的一個(gè)重要原因。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，利用該方法得到的藥物和添加劑能有效抗菌，治療仔豬的細(xì)菌性疾病、促生長(zhǎng)、可應(yīng)用、提高豬免疫力，而且無(wú)殘留、無(wú)污染。為了實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下本發(fā)明微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證濃度在300ppm。本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案如下本發(fā)明微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證仔豬每天采食溶菌酶l-2g。本發(fā)明的再一個(gè)技術(shù)方案如下-本發(fā)明微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，保證濃度在300ppm,同時(shí)添加氟本尼考，溶菌酶配比氟本尼考的比例為2:11:1。本發(fā)明的有益效果如下-本發(fā)明有效治療豬的細(xì)菌性疾病及高熱病，緩解癥狀，顯著提高豬的免疫力，減緩應(yīng)激反應(yīng)，改善維護(hù)胃腸道菌群平衡。療效好、安全性高，成本低廉，無(wú)耐藥性、無(wú)藥物殘留、無(wú)毒副作用、是綠色環(huán)保的活性物質(zhì)。具體實(shí)施方式溶菌酶是能溶解細(xì)菌細(xì)胞壁的一種酶，是一類(lèi)物質(zhì)的的總稱(chēng)。作為非特異性免疫的重要成員，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面發(fā)揮重要的作用，其在動(dòng)物的免疫細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中含量比較高。溶菌酶對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、好氣性孢子形成的菌、枯草桿菌、耐輻射微球菌均具有良好的分解作用，對(duì)大腸桿菌、普通變球菌和副血性弧菌等革蘭氏陰性菌也具有溶解作用?；诖?，本發(fā)明將溶菌酶添加到用于預(yù)防豬疾病的藥物和添加劑中，來(lái)預(yù)防豬的細(xì)菌性疾病。本專(zhuān)利所用的溶菌酶的要求為通過(guò)藥敏試驗(yàn)，在lOOppm時(shí)應(yīng)有明顯的抑菌圈，即抑菌圈的直徑〉10mm。藥敏試驗(yàn)方法如下做不同細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)可選擇不同的培養(yǎng)基，如做大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)可選擇普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂或麥糠凱培養(yǎng)基。做沙門(mén)氏菌可選擇血清培養(yǎng)基。一、一般LB培養(yǎng)基的配制1、液體培養(yǎng)基的配制蛋白胨lg、NaCllg、酵母提取物0.5g(建議選用國(guó)外公司產(chǎn)品)溶于100ml水中。2、固體培養(yǎng)基的配制在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上每100ml中添加瓊脂1.7g或瓊脂粉2g。二、滅菌整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所用的培養(yǎng)基、平板、槍頭、棉簽、生理鹽水以及緩沖溶液均需要滅菌。三、操作過(guò)程1、將指示菌(大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等等)從培養(yǎng)液(基)中接種于平板活化培養(yǎng)，待菌落長(zhǎng)出后在平板上挑選典型菌落接種于試管中的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6小時(shí)后比濁。2、用涂菌棒(或者滅菌棉簽)將待檢細(xì)菌混懸液涂抹于平皿培養(yǎng)基表面，要求涂布均勻致密。3、以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管(也可用玻璃管、瓷管)，放置在培養(yǎng)基上打孔，將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合(以防藥液滲漏，影響結(jié)果)。4、將配制好的待測(cè)樣品液80微升加入樣孔中，樣品加完后放入30-37'C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-18小時(shí)后觀察結(jié)果。注意試驗(yàn)的過(guò)程在無(wú)菌的條件下操作。四、溶菌酶樣品液的配制1、粉狀樣品的配制取溶菌酶樣品用滅菌好的生理鹽水逐級(jí)稀釋到濃度梯度為300ppm，200ppm，lOOppm,50ppm然后分別取80微升稀釋好的溶液置于樣品孔中。(注在溫度較低的情況下，可能會(huì)出現(xiàn)稍微的不溶的情況，可加熱至35-4(TC即可溶解)2、注意事項(xiàng)1)配置好的樣品液不要放在冷凍的條件下保存，也不能放在無(wú)菌操作臺(tái)上被紫外線(xiàn)照射；2)樣品液在配制稀釋過(guò)程中注意要逐級(jí)稀釋。為了確定溶菌酶在藥物及添加劑中的加入量，我們進(jìn)行了如下藥敏實(shí)驗(yàn)選擇500ppm,300ppm，200卯m，100ppm，50ppm四個(gè)濃度進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)方法同上，以埃希氏大腸桿菌為試驗(yàn)菌種，通過(guò)檢測(cè)檢測(cè)抑菌圈的大小檢驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果，具體如表l。表l抑菌試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從表l可以看出，超過(guò)300ppm,抑菌效果增加不明顯。仔豬腹瀉是一種細(xì)菌性疾病，通過(guò)給腹瀉的仔豬喂食溶菌酶可以去除其體內(nèi)感染的細(xì)菌從而起到一定的治療作用，同時(shí)也能預(yù)防因新攝入的細(xì)菌而再次發(fā)病，預(yù)防腹瀉的選擇體況相同的仔豬進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，當(dāng)仔豬出現(xiàn)腹瀉情況后，為仔豬灌服溶菌酶制劑日平均0.5g、lg、2g、3g、4g、5g，其治療效果如表2。表2仔豬腹瀉的治療試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從上表可以看出，在日平均灌服l-2g溶菌酶制劑可以有效的治療仔豬的細(xì)菌性的腹瀉，繼續(xù)增加用量對(duì)治愈率增加的影響不明顯。在豬場(chǎng)高熱病的發(fā)病初期，通過(guò)喂食含有溶菌酶的飼料可以是預(yù)防高熱病的進(jìn)一步惡化，并同時(shí)添加氟本尼考，可以將發(fā)熱病控制在初期，具體配比參見(jiàn)抑菌試驗(yàn)結(jié)果，溶菌酶的含量選在300ppm，同時(shí)按3:1，2:1，1:1,1:2，1:3的比例配入氟本尼考，混合后，最終的治療效果如表3。表3高熱病初期的治療結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從上表可以看出，在2:1—1:1的范圍之內(nèi)對(duì)疾病的控制已經(jīng)達(dá)到理想的控制效果，在3:1的條件下疾病控制率增加不明顯，所以最終選擇2:1—1:1的范圍。權(quán)利要求1、微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證濃度在300ppm。2、微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證仔豬每天采食溶菌酶l-2g。3、微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，保證濃度在300ppm，同時(shí)添加氟本尼考，溶菌酶配比氟本尼考的比例為2:11:1。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，通過(guò)控制溶菌酶在藥物或者添加劑中的加入量在300ppm時(shí)，可以很好的預(yù)防仔豬腹瀉，通過(guò)加入溶菌酶保證每天攝入1-2g，使仔豬在腹瀉初期能夠使病情得到控制，防止進(jìn)一步的惡化，在添加溶菌酶的基礎(chǔ)上同時(shí)添加氟本尼考可以預(yù)防并控制高熱病。本發(fā)明有效治療豬的細(xì)菌性疾病及高熱病，緩解癥狀，顯著提高豬的免疫力，減緩應(yīng)激反應(yīng)，改善維護(hù)胃腸道菌群平衡。療效好、安全性高，成本低廉，無(wú)耐藥性、無(wú)藥物殘留、無(wú)毒副作用、是綠色環(huán)保的活性物質(zhì)。文檔編號(hào)A61K38/48GK101612393SQ20091014777公開(kāi)日2009年12月30日申請(qǐng)日期2009年6月19日優(yōu)先權(quán)日2009年6月19日發(fā)明者潘宏濤申請(qǐng)人:杭州康源飼料科技有限公司