本公開涉及抗體領(lǐng)域，更具體而言涉及一種pvrig的抗體。

背景技術(shù)：

1、腫瘤免疫治療是當(dāng)今腫瘤學(xué)領(lǐng)域的主要支柱之一，尤其是治療不可切除、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的癌癥。免疫檢查點抑制劑(icis)的成功，以及其與化療、免疫治療和靶向藥物相結(jié)合，改變了癌癥治療的模式。然而，pd-1的治療仍然只有10-30％的患者表現(xiàn)出長期、持久的反應(yīng)，大多數(shù)人群缺乏響應(yīng)，還有獲得性耐藥以及免疫相關(guān)不良事件(irae)也是巨大的障礙?？朔d-1治療局限性的機(jī)制之一是開發(fā)與腫瘤微環(huán)境相關(guān)的其他icis，它們與抗-pd-1/pd-l1聯(lián)合使用可能有助于克服以往治療的局限性。有研究顯示，在對靶向pd-1免疫療法耐藥的患者中，癌細(xì)胞中較高的pvrl2(cd112)水平是疾病治療潛在的關(guān)鍵生物標(biāo)志物，在包括乳腺癌和卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤類型中存在過度表達(dá)。pvrl2目前被鑒定為pvrig唯一的功能性配體，可以以很高的親和力與pvrig結(jié)合。

2、pvrig也稱為cd112r，在2016年被確定為一種新的抑制性受體，在自然殺傷細(xì)胞(nk細(xì)胞)和t淋巴細(xì)胞中表達(dá)。pvrig與其配體pvrl2結(jié)合，介導(dǎo)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致t?cell細(xì)胞毒性降低，此外，還可抑制tcr介導(dǎo)的nfat激活，進(jìn)一步抑制t細(xì)胞激活，同時也與dnam-1競爭pvrl2配體而阻斷其傳遞的刺激信號，從而實現(xiàn)對t細(xì)胞功能的雙重負(fù)調(diào)控，來發(fā)揮免疫抑制的效果。

3、臨床前研究顯示小鼠和人類實體腫瘤中，阻斷pvrig均可抑制腫瘤生長，聯(lián)合pd-1/tigit治療顯著提高了治療效果；抗pvrig抗體通過dnam-1-pvrl2信號通路增強(qiáng)nk細(xì)胞活化，其抗腫瘤活性依賴于nk細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞。根據(jù)已有的臨床數(shù)據(jù)來看，其單藥以及聯(lián)合抗pd-1抗體治療晚期實體腫瘤均顯示出了不錯的治療效果，尤其是曾接受過免疫檢查點抑制劑治療的患者中，仍有72％的最佳緩解率(≥sd)。安全性方面，單藥或與opdivo聯(lián)用均未觀察到dlt，與pd-1單抗聯(lián)合使用無毒性增加，沒有受試者因任何研究藥物的毒性而停止研究治療?；诂F(xiàn)有的臨床數(shù)據(jù)證明該靶點的成藥性已經(jīng)得到了初步論證，并表現(xiàn)出可觀的療效。

4、pvrig作為一種nk細(xì)胞和t細(xì)胞的新型免疫檢查點抑制劑，靶點機(jī)理明確，抗體一方面可解除nk細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞的免疫抑制，另一方面，還可介導(dǎo)nk細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞的活化信號，增強(qiáng)腫瘤殺傷。目前全球尚無藥物上市，針對腫瘤適應(yīng)癥的在研最快的藥物com701剛進(jìn)入臨床ⅱ期，臨床前體內(nèi)藥效研究結(jié)果顯著，臨床數(shù)據(jù)顯示安全性良好，與pd-1單抗聯(lián)用療效積極。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對上述諸問題，本公開提供了抗體、其制備方法、組合物等。本公開提供的益處廣泛地適用于抗體治療和診斷領(lǐng)域，并且能夠與各種靶標(biāo)反應(yīng)的抗體聯(lián)合使用。

2、本發(fā)明公開了一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合pvrig，且包含重鏈可變區(qū)(vh)和輕鏈可變區(qū)(vl)，

3、所述重鏈可變區(qū)包含：

4、(i)hcdr1，其中包含與seq?id?no：35-39之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或seq?id?no：35-39組成；

5、(ii)hcdr2，其中包含與seq?id?no：40-45之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq?id?no：40-45組成；和

6、(iii)hcdr3，其中包含與seq?id?no：48-53之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq?id?no：48-53組成；

7、所述輕鏈可變區(qū)包含：

8、(i)lcdr1，其中包含與seq?id?no：56-62之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq?id?no：56-62組成；

9、(ii)lcdr2，其中包含與seq?id?no：63-67之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq?id?no：63-67組成；和

10、(iii)lcdr3，其中包含與seq?id?no：68-73之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列或由seq?id?no：68-73組成。

11、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中包含：

12、(i)seq?id?no：35所示的hcdr1，seq?id?no：40所示的hcdr2，和seq?id?no：48所示的hcdr3，seq?id?no：56所示的lcdr1，seq?id?no：63所示的lcdr2，和seq?id?no：68所示的lcdr3；或

13、(ii)seq?id?no：35所示的hcdr1，seq?id?no：41所示的hcdr2，和seq?id?no：48所示的hcdr3，seq?id?no：57所示的lcdr1，seq?id?no：63所示的lcdr2，和seq?id?no：68所示的lcdr3；或

14、(iii)seq?id?no：36所示的hcdr1，seq?id?no：42所示的hcdr2，和seq?id?no：49所示的hcdr3，seq?id?no：58所示的lcdr1，seq?id?no：64所示的lcdr2，和seq?id?no：69所示的lcdr3；或

15、(iv)seq?id?no：37所示的hcdr1，seq?id?no：43所示的hcdr2，和seq?id?no：50所示的hcdr3，seq?id?no：59所示的lcdr1，seq?id?no：65所示的lcdr2，和seq?id?no：70所示的lcdr3；或

16、(v)seq?id?no：37所示的hcdr1，seq?id?no：43所示的hcdr2，和seq?id?no：51所示的hcdr3，seq?id?no：60所示的lcdr1，seq?id?no：65所示的lcdr2，和seq?id?no：71所示的lcdr3；或

17、(vi)seq?id?no：38所示的hcdr1，seq?id?no：44所示的hcdr2，和seq?id?no：52所示的hcdr3，seq?id?no：61所示的lcdr1，seq?id?no：66所示的lcdr2，和seq?id?no：72所示的lcdr3；或

18、(vii)seq?id?no：39所示的hcdr1，seq?id?no：45所示的hcdr2，和seq?id?no：53所示的hcdr3，seq?id?no：62所示的lcdr1，seq?id?no：67所示的lcdr2，和seq?id?no：73所示的lcdr3。

19、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含與seqid?no：17-23之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq?id?no：17-23之一組成。

20、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含與seqid?no：28-34之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq?id?no：28-34之一組成。

21、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中還包含重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)，該重鏈恒定區(qū)包含與seq?id?no：15具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，或由seq?id?no：15組成；該輕鏈恒定區(qū)包含與seq?id?no：16具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的序列，或由seq?id?no：16組成。

22、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中包含：

23、輕鏈，其中包含與seq?id?no：2、4、6、8、10、12、14之一具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq?id?no：2、4、6、8、10、12、14之一組成；

24、重鏈，其中包含與seq?id?no：1、3、5、7、9、11、13之一具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq?id?no：1、3、5、7、9、11、13之一組成。

25、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中包含：

26、(i)seq?id?no：2所示的輕鏈，和seq?id?no：1所示的重鏈；或

27、(ii)seq?id?no：4所示的輕鏈，和seq?id?no：3所示的重鏈；或

28、(iii)seq?id?no：6所示的輕鏈，和seq?id?no：5所示的重鏈；或

29、(iv)seq?id?no：8所示的輕鏈，和seq?id?no：7所示的重鏈；或

30、(v)seq?id?no：10所示的輕鏈，和seq?id?no：9所示的重鏈；或(vi)seq?id?no：12所示的輕鏈，和seq?id?no：11所示的重鏈；或(vii)seq?id?no：14所示的輕鏈，和seq?idno：13所示的重鏈。

31、8.本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，對其進(jìn)行熱點移除改造，以避免天冬氨酸異構(gòu)化對抗體結(jié)構(gòu)和功能的影響；其中，優(yōu)選的，

32、重鏈可變區(qū)包括如seq?id?no：46或47所示的hcdr2，和\或，

33、seq?id?no：54或55所示的hcdr3。

34、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含與seqid?no：24-27之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由seq?id?no：24-27之一組成。

35、本發(fā)明的一些實施方式中，所述的抗體或片段，其中所述抗體為全抗體、單克隆抗體、嵌合抗體或人源化抗體或其改進(jìn)的抗體例如改進(jìn)的嵌合抗體；

36、其中所述片段為fab片段、fab’片段、f(ab')2片段、fv片段、或單鏈fv片段(scfv)。

37、另一方面，本發(fā)明還提供了一種分離的核酸分子，其中包含編碼所述的抗體或片段的核酸序列。

38、另一方面，本發(fā)明還提供了一種載體，其中包含所述的核酸分子。

39、另一方面，本發(fā)明還提供了一種宿主細(xì)胞，其中包含所述的核酸分子或者所述的載體。

40、另一方面，本發(fā)明還提供了一種綴合物，其中包含與至少一個可檢測的標(biāo)記物偶聯(lián)的所述的抗體或片段。

41、另一方面，本發(fā)明還提供了一種包含抗體的抗體藥物綴合物，其中包括一個或多個藥物部分，所述藥物部分直接或經(jīng)由接頭共價連接至所述的抗體或片段。

42、另一方面，本發(fā)明還提供了一種多特異性分子，其中包含所述的抗體或抗原結(jié)合片段；優(yōu)選地，所述多特異性分子特異性結(jié)合pvrig，并且額外地特異性結(jié)合一個或多個其他靶標(biāo)；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述多特異性分子還包含至少一種具有針對第二靶標(biāo)的第二結(jié)合特異性的分子。

43、另一方面，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物或試劑盒，其中包含所述的抗體或片段、或所述的核酸分子、或所述的載體、或所述的宿主細(xì)胞、或所述的綴合物、或所述的抗體藥物綴合物、或所述的多特異性分子，以及藥學(xué)上可接受的載體。

44、另一方面，本發(fā)明還提供了所述的抗體或片段、或所述的核酸分子、或所述的載體、或所述的宿主細(xì)胞、或所述的綴合物、或所述的抗體藥物綴合物、或所述的多特異性分子、或所述的藥物組合物或試劑盒在制備用于診斷、檢測或監(jiān)測與pvrig表達(dá)相關(guān)疾病的試劑盒中的用途。

45、另一方面，本發(fā)明還提供了所述的抗體或片段、或的核酸分子、或所述的載體、或所述的宿主細(xì)胞、或所述的綴合物、或所述的抗體藥物綴合物、或所述的多特異性分子、或所述的藥物組合物或試劑盒在制備用于治療與pvrig表達(dá)相關(guān)疾病或確定其預(yù)后的藥物中的用途。

46、另一方面，上述與pvrig表達(dá)相關(guān)疾病是癌癥，所述癌癥選自下組：鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、腦垂體癌、食道癌、星形細(xì)胞瘤、軟組織肉瘤、非小細(xì)胞肺癌(包括鱗狀細(xì)胞非小細(xì)胞肺癌)、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、食管癌、胃腸癌、胰腺癌、神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、宮頸癌、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、腦癌、子宮內(nèi)膜癌、睪丸癌、膽道癌、膽囊癌、胃癌、黑色素瘤或各種類型的頭頸癌(包括頭頸部鱗狀細(xì)胞癌)、血液系統(tǒng)癌癥或者任何特征在于不受控細(xì)胞生長的其它疾病或病癥。

47、本發(fā)明提供的pvrig抗體，對人pvrig蛋白和食蟹猴pvrig蛋白具有高結(jié)合的親和力；并且在報告基因水平和cd8t細(xì)胞激活方面均具有的強(qiáng)效活性。與已知的srf813和com701相比，本發(fā)明抗體綜合表現(xiàn)出更優(yōu)的體外活性，部分抗體聯(lián)用pd-1抗體具有明顯的抗腫瘤效果，使其成為用于治療和診斷用途的優(yōu)秀候選藥物分子。