技術(shù)特征：

1.一種靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的工程化外泌體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的工程化外泌體的制備方法，其特征在于，步驟1中cd47oe-bend.3穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的構(gòu)建過程包括：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的工程化外泌體的制備方法，其特征在于，步驟3中dmpe-peg2k-crltrkrglk的制備過程如下：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的工程化外泌體的制備方法，其特征在于，利用外泌體wnt2@exocd47和dmpe-peg2k-crltrkrglk輕輕混合，在40℃的pbs緩沖液中孵育1小時(shí)后，通過離心兩次去除游離的dmpe-peg2k-crltrkrglk。通過納米流式細(xì)胞術(shù)分析rltr的外泌體膜修飾效率，并通過透射電子顯微鏡觀察rltr的膜修飾是否改變了外泌體的形態(tài)。

5.一種靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的工程化外泌體，其特征在于，利用權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的制備方法制備得到。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的工程化外泌體在制備急性藥物肝損傷的藥物中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的急性藥物肝損傷為對(duì)乙酰氨基酚或二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的急性肝損傷。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的工程化外泌體在制備靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的藥物系統(tǒng)中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種靶向肝臟血竇內(nèi)皮細(xì)胞的工程化外泌體、制備方法及應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，以解決目前缺少靶向LSEC藥物遞送系統(tǒng)研究的問題。其制備方法包括：步驟1：利用過表達(dá)CD47的慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建CD47<supgt;OE</supgt;?bEnd.3穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，分離其來源的外泌體Exo<supgt;CD47</supgt;；步驟2：通過Wnt2慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建CD47<supgt;OE</supgt;|Wnt2<supgt;OE</supgt;?bEnd.3穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，分離其來源的外泌體Wnt2@Exo<supgt;CD47</supgt;；步驟3：利用DMPE?PEG2K?CRLTRKRGLK對(duì)步驟2獲得的外泌體Wnt2@Exo<supgt;CD47</supgt;膜表面進(jìn)行修飾，得到RLTR?Wnt2@Exo<supgt;CD47</supgt;。RLTR?Wnt2@Exo<supgt;CD47</supgt;為“eat?me/don't?eat?me”雙靶向系統(tǒng)，能夠有效促進(jìn)外泌體靶向LSEC，同時(shí)顯著抑制MPS的吞噬，靶向LSEC遞送Wnt2mRNA，促進(jìn)LSEC向血竇微環(huán)境釋放Wnt2，激活Wnt/β?catenin信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖。

技術(shù)研發(fā)人員：王琳,杜偉,全惠驛,何飛,段娟麗,劉瑩瑩,陳晨,楊振,柏強(qiáng)善,房志強(qiáng)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15