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一種產(chǎn)兩性霉素B的重組結(jié)節(jié)鏈霉菌、構(gòu)建方法及其應(yīng)用

文檔序號(hào):41953375發(fā)布日期:2025-05-16 14:17閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種產(chǎn)兩性霉素b的重組結(jié)節(jié)鏈霉菌,其特征在于:所述重組結(jié)節(jié)鏈霉菌包括外源紅霉素強(qiáng)啟動(dòng)子ermep*與纖維蛋白同源蛋白基因ftsz。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述產(chǎn)兩性霉素b的重組結(jié)節(jié)鏈霉菌,其特征在于:所述外源紅霉素強(qiáng)啟動(dòng)子ermep*的核苷酸序列如seq?id?no.1所示;所述纖維蛋白同源蛋白基因ftsz的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

3.一種如權(quán)利要求1或2所述重組結(jié)節(jié)鏈霉菌的構(gòu)建方法,其特征在于,包括:

4.一種重組表達(dá)質(zhì)粒,其特征在于:在基礎(chǔ)質(zhì)粒上包括外源紅霉素強(qiáng)啟動(dòng)子ermep*與纖維蛋白同源蛋白基因ftsz。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組表達(dá)質(zhì)粒,其特征在于:所述基礎(chǔ)質(zhì)粒為pjtu1278質(zhì)粒。

6.一種權(quán)利要求4或5所述重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方法,其特征在于:將所述外源紅霉素強(qiáng)啟動(dòng)子ermep*與纖維蛋白同源蛋白基因ftsz通過(guò)酶切方式連接到基礎(chǔ)質(zhì)粒上,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒。

7.權(quán)利要求4或5所述重組質(zhì)粒在發(fā)酵制備兩性霉素b中的應(yīng)用和/或在制備產(chǎn)兩性霉素b的重組結(jié)節(jié)鏈霉菌中的應(yīng)用。

8.一種兩性霉素b的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括:將權(quán)利要求1或2所述的重組結(jié)節(jié)鏈霉菌經(jīng)種子培養(yǎng)后獲得的種子液以體積濃度2~10%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,在26~31℃、400~500r/min條件下培養(yǎng)96~168h,發(fā)酵結(jié)束后,發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)分離純化獲得兩性霉素b。

9.如權(quán)利要求8所述的制備方法,其特征在于,所述種子培養(yǎng)過(guò)程如下:將所述重組結(jié)節(jié)鏈霉菌接種在gym平板上,25~28℃生長(zhǎng)3~7天,收集灰色的孢子制成孢子懸液;將孢子懸液接種至種子培養(yǎng)基25~28℃培養(yǎng)24~48h,獲得種子液;所述gym平板終濃度組成:葡萄糖1~5g/l,酵母粉1~5g/l,麥芽提取物5~29g/l,碳酸鈣1~3g/l,瓊脂15~20g/l,溶劑為水,ph?7.0~7.5,115℃滅菌30min;所述種子液培養(yǎng)基終濃度組成為:蛋白胨10~20g/l,nacl?5~10g/l,葡萄糖10~15g/l,酵母粉5~10g/l,caco3?0.5~1g/l,溶劑為水,ph?7.0~7.2,115℃滅菌30min。

10.如權(quán)利要求8所述的制備方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成如下:葡萄糖60~80g/l,牛肉膏5~10g/l,大豆蛋白粉5~10g/l,棉子粉8~30g/l,caco3?5~10g/l,kh2po40.1~0.4g/l,溶劑為水,ph?7.0,115℃滅菌30min。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種產(chǎn)兩性霉素B的重組結(jié)節(jié)鏈霉菌、構(gòu)建方法及其應(yīng)用,所述重組結(jié)節(jié)鏈霉菌包括紅霉素強(qiáng)啟動(dòng)子ermEp*與纖維蛋白同源蛋白基因Ftsz。本發(fā)明的有益效果為:通過(guò)基因工程、代謝工程的技術(shù)手段對(duì)出發(fā)菌株進(jìn)行改造,通過(guò)過(guò)表達(dá)結(jié)節(jié)鏈霉菌細(xì)胞形態(tài)相關(guān)基因Ftsz,構(gòu)建出產(chǎn)兩性霉素B的基因工程菌,該工程菌在發(fā)酵過(guò)程中菌絲形態(tài)發(fā)生突變,具有更為單一分散菌絲,突變菌株菌絲分散生長(zhǎng),抑制了鏈霉菌發(fā)酵過(guò)程中凝結(jié)成團(tuán),便于工業(yè)化生產(chǎn)中降低發(fā)酵液粘稠度,基因工程菌株在108h?AmB產(chǎn)量達(dá)到最大值9.31g/L較對(duì)照菌株提高了9.1%,發(fā)酵周期縮短了12h,提升菌株的質(zhì)量和生產(chǎn)能力。

技術(shù)研發(fā)人員:柳志強(qiáng),馬玉俊,張博,鄭裕國(guó)
受保護(hù)的技術(shù)使用者:浙江工業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/15
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