技術(shù)特征：

1.一種外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜蓿抗旱性中的應用，其特征在于，所述外源no介導的mir166-5p用于提高紫花苜蓿的抗旱性能。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽?，其特征在于，所述mir166-5p的核苷酸序列如seq?id?no：1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽?，其特征在于，所述mir166-5p的表達載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化方法包括以下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽?，其特征在于，s1中所述利用sttm技術(shù)構(gòu)建抑制表達載體包括以下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜蓿抗旱性中的應用，其特征在于，s11中所述引物分別為sttm-mir166e-5p-pf和sttm-mir166e-5p-pr，所述sttm-mir166e-5p-pf和sttm-mir166e-5p-pr的核苷酸序列分別如seq?id?no:3和seq?id?no:4所示，所述目的片段擴增得到sttm-mir166e-5p。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽茫涮卣髟谟?，s12中所述mir166e-5p與sttm沉默載體的重組連接包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽?，其特征在于，s2中所述利用人工mirna技術(shù)構(gòu)建過表達載體包括以下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述外源no介導的mir166-5p在提高紫花苜蓿抗旱性中的應用，其特征在于，s21中所述引物設(shè)計及目的片段擴增包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種外源NO介導的miR166?5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽?。本發(fā)明提供一種外源NO介導的miR166?5p在提高紫花苜?？购敌灾械膽?，紫花苜蓿經(jīng)過外源NO介導制備得到miR166?5p沉默株系，沉默株系在外源NO介導下耐旱性能良好，干旱后失水率降低、抗氧化酶活性增加、氧化產(chǎn)物增量降低、葉綠體色素含量降幅減少以及脯氨酸含量變化較小，同時沉默株系在NO介導下響應干旱的各靶基因表達水平升高，在NO介導下NO合酶基因響應干旱的水平升高。

技術(shù)研發(fā)人員：朱曉林,魏博闖,張明君,劉海訓,王義真,阮倩,王賢,魏小紅
受保護的技術(shù)使用者：甘肅農(nóng)業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15