本發(fā)明涉及基因工程，具體涉及過表達(dá)bna-mir403在改良油菜性狀中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、作為我國分布最廣的油料作物，甘藍(lán)型油菜(brassica?napus?l.)在人們的生產(chǎn)生活中發(fā)揮著重要作用。然而我國的菜籽油自給率不足40％，食用油安全面臨著對(duì)進(jìn)口油菜籽依賴程度較高所帶來的潛在風(fēng)險(xiǎn)，因此提高油菜的產(chǎn)量對(duì)穩(wěn)固我國的糧油安全具有重要意義。

2、甘藍(lán)型油菜的角果皮在種子發(fā)育和成熟階段發(fā)揮著重要作用，而角果長度可以通過影響每角果粒數(shù)和種子重量等性狀影響最終產(chǎn)量。前人對(duì)油菜角果的很多研究通常是基于成熟期的最終角果長度，然而調(diào)控角果發(fā)育的基因可能具有時(shí)空表達(dá)特異性，在不同時(shí)期對(duì)于調(diào)控角果的發(fā)育可能會(huì)產(chǎn)生不同的作用。成熟期的表型難以準(zhǔn)確反映前期角果皮和種子的狀態(tài)，也不利于研究調(diào)控角果伸長速率的基因和網(wǎng)絡(luò)。生長緩慢的角果即使成熟期的長度很長，但由于無法在前期迅速完成形態(tài)建成并充分進(jìn)行光合作用，不利于內(nèi)部種子的發(fā)育，也不一定能產(chǎn)生較高的種子產(chǎn)量。microrna(mirna)是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的非編碼單鏈rna，長度約為22nt，由mirna基因轉(zhuǎn)錄并剪切后產(chǎn)生，在動(dòng)植物中均發(fā)揮重要的調(diào)控作用，會(huì)影響許多蛋白質(zhì)編碼基因的表達(dá)。

3、目前有關(guān)mirna的報(bào)道主要集中在擬南芥、毛果楊和水稻等模式植物上，在甘藍(lán)型油菜中的研究很少，因此研究mirna對(duì)甘藍(lán)型油菜生長發(fā)育過程中的調(diào)控機(jī)理，尤其是針對(duì)油菜角果生長速率的研究對(duì)油菜的遺傳改良育種有非常重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明提供了一種過表達(dá)bna-mir403在改良油菜性狀中的應(yīng)用。

2、為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

3、提供一種過表達(dá)bna-mir403在改良油菜性狀中的應(yīng)用，過表達(dá)bna-mir403的油菜的性狀為：提高角果伸長速率，快速完成角果形態(tài)建成并為種子發(fā)育提供充分支持以提高產(chǎn)量。

4、進(jìn)一步的，油菜為甘藍(lán)型油菜。

5、本發(fā)明還提供了一種提高甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量的方法，在甘藍(lán)型油菜中過表達(dá)bna-mir403基因。

6、進(jìn)一步的，方法具體為：選擇bna-mir403的前體序列，將u堿基替換為t堿基，再將前體序列兩端各延伸200bp設(shè)計(jì)克隆引物oe403-f/r，并在上游引物5’端添加cacc四個(gè)堿基；采用高收獲指數(shù)材料yc24的dna為模板進(jìn)行擴(kuò)增，構(gòu)建得到過表達(dá)載體，使用過表達(dá)載體對(duì)農(nóng)桿菌gv3101獲得轉(zhuǎn)基因工程菌株，使用轉(zhuǎn)基因工程菌株對(duì)甘藍(lán)型油菜進(jìn)行轉(zhuǎn)化得到改良甘藍(lán)型油菜。

7、進(jìn)一步的，擴(kuò)增時(shí)，pcr擴(kuò)增體系為：

8、 試劑 用量 template(cdna) 2μl 上游引物(10μm) 1μl 下游引物(10μm) 1μl 5×transstart?fastpfu?buffer 10μl 2.5mm?dntps 4μl transstart?fastpfu?dna?polymerase 1μl <![cdata[ddh₂o]]> 31μl total 50μl

9、且pcr擴(kuò)增程序?yàn)椋?/p>

10、

11、本發(fā)明的有益效果為：

12、本發(fā)明提供了過表達(dá)bna-mir403用于提高角果伸長速率，快速完成角果形態(tài)建成并為種子發(fā)育提供充分支持以提高產(chǎn)量。bna-mir403超量表達(dá)或者調(diào)控bna-mir403超量表達(dá)的物質(zhì)或方法均可用于實(shí)現(xiàn)油菜產(chǎn)量的改良。

13、本發(fā)明提供了超量表達(dá)bna-mir403在角果伸長速率性狀的用途，為油菜產(chǎn)量的改良提供了新的思路和方法。

14、本發(fā)明提供了一種提高甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量的方法，即通過在甘藍(lán)型油菜中超量表達(dá)bna-mir403，提高甘藍(lán)型油菜角果伸長速率，進(jìn)而提升甘藍(lán)型油菜的產(chǎn)量，為甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量的改良提供了新的思路和方法。

技術(shù)特征：

1.過表達(dá)bna-mir403在改良油菜性狀中的應(yīng)用，其特征在于，所述過表達(dá)bna-mir403的油菜的性狀為：提高角果伸長速率，快速完成角果形態(tài)建成并為種子發(fā)育提供充分支持以提高產(chǎn)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述油菜為甘藍(lán)型油菜。

3.一種提高甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量的方法，其特征在于，在甘藍(lán)型油菜中過表達(dá)bna-mir403基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法具體為：選擇bna-mir403的前體序列，將u堿基替換為t堿基，再將前體序列兩端各延伸200bp設(shè)計(jì)克隆引物oe403-f/r，并在上游引物5’端添加cacc四個(gè)堿基；采用高收獲指數(shù)材料yc24的dna為模板進(jìn)行擴(kuò)增，構(gòu)建得到過表達(dá)載體，使用過表達(dá)載體對(duì)農(nóng)桿菌gv3101獲得轉(zhuǎn)基因工程菌株，使用轉(zhuǎn)基因工程菌株對(duì)甘藍(lán)型油菜進(jìn)行轉(zhuǎn)化得到改良甘藍(lán)型油菜。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述擴(kuò)增時(shí)，pcr擴(kuò)增體系為：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了過表達(dá)Bna?miR403在改良油菜性狀中的應(yīng)用，涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，過表達(dá)Bna?miR403的油菜的性狀為：提高角果伸長速率，快速完成角果形態(tài)建成并為種子發(fā)育提供充分支持以提高產(chǎn)量。本發(fā)明提供了過表達(dá)Bna?miR403用于促進(jìn)甘藍(lán)型油菜的角果伸長速率；超量表達(dá)Bna?miR403可提高甘藍(lán)型油菜的角果伸長速率。因此，Bna?miR403超量表達(dá)或者調(diào)控Bna?miR403超量表達(dá)的物質(zhì)或方法均可用于實(shí)現(xiàn)油菜產(chǎn)量的改良。

技術(shù)研發(fā)人員：張立源,楊博,康林,李加納,盧坤,曲存民
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15