本發(fā)明屬于微生物生物制品，具體涉及一株齊整小核菌、菌劑、分子標記及發(fā)酵方法。

背景技術(shù)：

1、硬葡聚糖是由某些真菌分泌產(chǎn)生的一種胞外多糖，是一種非離子的水溶性β-葡聚糖。硬葡聚糖由β-1,3-吡喃葡萄糖和β-1,6-吡喃葡萄糖殘基連接而成。在水溶液中，硬葡聚糖呈三螺旋構(gòu)象的分子模型，其中，相同螺旋鏈上攜帶的側(cè)基在水分子的介導下連結(jié)在一起，形成螺旋結(jié)構(gòu)。

2、目前，工業(yè)上生產(chǎn)硬葡聚糖最主要的菌株是齊整小核菌，已經(jīng)報道的齊整小核菌菌株生產(chǎn)硬葡聚糖的產(chǎn)量低。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一株齊整小核菌、菌劑、分子標記及發(fā)酵方法，本發(fā)明提供的齊整小核菌tp-a制備得到的硬葡聚糖的產(chǎn)量高。

2、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一株齊整小核菌(sclerotium?rolfsii)tp-a，保藏編號為cgmccno.41666。

4、本發(fā)明提供了一種菌劑，含有上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a。

5、本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a或上述技術(shù)方案所述菌劑在制備硬葡聚糖和/或提高硬葡聚糖的產(chǎn)量中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明提供了一種硬葡聚糖的發(fā)酵方法，將上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到硬葡聚糖；所述發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖。

7、優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)的初始轉(zhuǎn)速為250rpm，以每10h增長50rpm上升至400rpm，維持至發(fā)酵結(jié)束；所述發(fā)酵培養(yǎng)的通氣量為1～1.5vvm。

8、優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：葡萄糖60～80g/l，2.0～4.0g/l?nano3，1.0～3.0g/l酵母粉，0.5～1.0g/l?mgso4，0.5～1.0g/l?kcl，0.5～1.0g/l檸檬酸和0.5～1.5g/lk2hpo4。

9、本發(fā)明提供了一種用于檢測或鑒定上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a的分子標記，所述分子標記的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

10、本發(fā)明提供了檢測上述技術(shù)方案所述分子標記的試劑在制備上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a檢測或鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11、本發(fā)明提供了擴增上述技術(shù)方案所述分子標記的引物對，包括tp-a-1和tp-a-2，所述tp-a-1的核苷酸序列如seq?id?no.3所示，所述tp-a-2的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。

12、本發(fā)明提供了一種用于檢測或鑒定上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a的試劑盒，含有上述技術(shù)方案所述引物對。

13、本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供一株齊整小核菌(sclerotium?rolfsii)tp-a，保藏編號為cgmcc?no.41666。本發(fā)明提供的齊整小核菌tp-a在適宜條件下能利用葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)硬葡聚糖，且硬葡聚糖的產(chǎn)量高。實施例結(jié)果表明：齊整小核菌tp-a制備硬葡聚糖的產(chǎn)量可達34.1g/l。

14、本發(fā)明還提供了一種硬葡聚糖的發(fā)酵方法，制備得到的硬葡聚糖的產(chǎn)量高。

15、本發(fā)明還提供了一種用于檢測或鑒定上述技術(shù)方案所述齊整小核菌tp-a的分子標記，當菌株的基因測序結(jié)果與分子標記序列完全一致時，說明該菌株為齊整小核菌tp-a。

技術(shù)特征：

1.一株齊整小核菌(sclerotium?rolfsii)tp-a，保藏編號為cgmcc?no.41666。

2.一種菌劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述齊整小核菌tp-a。

3.權(quán)利要求1所述齊整小核菌tp-a或權(quán)利要求2所述菌劑在制備硬葡聚糖和/或提高硬葡聚糖的產(chǎn)量中的應(yīng)用。

4.一種硬葡聚糖的發(fā)酵方法，其特征在于，將權(quán)利要求1所述齊整小核菌tp-a接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到硬葡聚糖；所述發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)的初始轉(zhuǎn)速為250rpm，以每10h增長50rpm上升至400rpm，維持至發(fā)酵結(jié)束；所述發(fā)酵培養(yǎng)的通氣量為1～1.5vvm。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述發(fā)酵方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：葡萄糖60～80g/l，2.0～4.0g/l?nano3，1.0～3.0g/l酵母粉，0.5～1.0g/l?mgso4，0.5～1.0g/lkcl，0.5～1.0g/l檸檬酸和0.5～1.5g/lk2hpo4。

7.一種用于檢測或鑒定權(quán)利要求1所述齊整小核菌tp-a的分子標記，其特征在于，所述分子標記的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

8.檢測權(quán)利要求7所述分子標記的試劑在制備權(quán)利要求1所述齊整小核菌tp-a檢測或鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

9.擴增權(quán)利要求7所述分子標記的引物對，其特征在于，包括tp-a-1和tp-a-2，所述tp-a-1的核苷酸序列如seq?id?no.3所示，所述tp-a-2的核苷酸序列如seq?id?no.4所示。

10.一種用于檢測或鑒定權(quán)利要求1所述齊整小核菌tp-a的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求9所述引物對。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于微生物生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株齊整小核菌、菌劑、分子標記及發(fā)酵方法。本發(fā)明提供一株齊整小核菌(Sclerotium?rolfsii)TP?A，保藏編號為CGMCC?No.41666，齊整小核菌TP?A的分子標記如SEQ?ID?NO.2所示。本發(fā)明提供的齊整小核菌TP?A在適宜條件下能利用葡萄糖發(fā)酵生產(chǎn)硬葡聚糖，且硬葡聚糖的產(chǎn)量高。實施例結(jié)果表明：齊整小核菌TP?A制備硬葡聚糖的產(chǎn)量可達34.1g/L。本發(fā)明還提供了一種硬葡聚糖的發(fā)酵方法，制備得到的硬葡聚糖產(chǎn)量高。

技術(shù)研發(fā)人員：馬挺,吳萌萌,李玨,李國強,王治煒
受保護的技術(shù)使用者：南開大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15