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一種黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒檢測引物組及檢測方法

文檔序號:41946276發(fā)布日期:2025-05-16 14:03閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種用于黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測引物基因組,其特征在于:所述檢測引物基因組為clsv-pri-f/r引物對和cblv-pri-f3904/r4573引物對:

2.權利要求1所述用于黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測引物基因組,其特征在于所述clsv-pri-f/r引物對和cblv-pri-f3904/r4573的摩爾濃度比為4:(4~6)。

3.權利要求1所述用于黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測引物基因組,其特征在于所述clsv-pri-f/r引物對和cblv-pri-f3904/r4573的摩爾濃度比為5:(4~6)。

4.權利要求1所述用于黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測引物基因組,其特征在于所述clsv-pri-f/r引物對和cblv-pri-f3904/r4573的摩爾濃度比為6:(4~6)。

5.一種用于檢測黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的檢測試劑盒,其特征在于,含有權利要求1~4任一所述的雙重rt-pcr檢測引物基因組。

6.一種黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測方法,其特征在于:首先提取待測樣本的總rna,通過反轉錄成cdna,然后以反轉錄的cdna為模板,以權利要求1所述的檢測引物基因組作為引物進行雙重rt-pcr擴增,凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物,并對電泳結果進行判斷,確定待測樣本是否攜帶黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒。

7.權利要求6所述的黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測方法,其特征在于:包括以下步驟:

8.?權利要求7所述的黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測方法,其特征在于,步驟s3所述雙重rt-pcr的反應程序為:94℃預變性5min;94℃變性30sec,56℃~58℃退火30sec,72℃延伸?45sec?,?30個~35個循環(huán);72℃延伸10min。

9.權利要求7~8所述的黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測方法,其中所述的待測樣本,包括并不限于黃瓜等瓜類作物種子,黃瓜等瓜類作物葉片和瓜條等植株所有部位,蚜蟲、粉虱和薊馬等傳毒介體和土壤及病殘體等獲取的待測樣本。

10.權利要求6所述黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒的雙重rt-pcr檢測方法用于快速、有效地檢測待測樣本是否攜帶黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒方面的應用。


技術總結
本發(fā)明公開了一種黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒檢測引物組和方法。屬于分子生物學技術領域。本發(fā)明設計了兩對特異性引物,建立了一種可用于檢測黃瓜葉斑病毒(Cucumber?leaf?spot?virus,CLSV)和黃瓜保加利亞潛隱病毒(Cucumber?bulgariaense?latent?virus,CBLV)的雙重RT?PCR檢測方法。所述檢測引物組為CLSV?Pri?F/R引物對和CBLV?Pri?F3904/R4573引物對。所述黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒檢測方法為提取待測樣本的總RNA,反轉錄成cDNA,然后以反轉錄的cDNA為模板,以CLSV?Pri?F/R引物對和CBLV?Pri?F3904/R4573引物對進行雙重RT?PCR擴增,凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物,并對電泳結果進行判斷,確定待測樣本是否攜帶黃瓜葉斑病毒和黃瓜保加利亞潛隱病毒。本發(fā)明結果判定簡單,操作便捷,具有快速、特異、靈敏度高的特點,具廣泛應用前景。

技術研發(fā)人員:王勇,高葦,楊利娟,王澤月
受保護的技術使用者:天津市農(nóng)業(yè)科學院
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/5/15
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