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生產(chǎn)復(fù)雜HMO的混合方法與流程

文檔序號:41954392發(fā)布日期:2025-05-16 14:19閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種從供體寡糖和受體寡糖或受體二糖生產(chǎn)寡糖的方法,所述方法包括以下步驟:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中供給至所述培養(yǎng)基的所述第二種寡糖或二糖在單獨的工藝中產(chǎn)生或者由步驟a)中的所述遺傳修飾細(xì)胞產(chǎn)生。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述第二種寡糖或二糖由與步驟a)中的所述遺傳修飾細(xì)胞存在于同一培養(yǎng)基中的第二種遺傳修飾細(xì)胞供給至培養(yǎng)基,并且所述第二種遺傳修飾細(xì)胞能夠產(chǎn)生所述第二種寡糖或二糖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3所述的方法,其中所述遺傳修飾細(xì)胞將由所述細(xì)胞產(chǎn)生的所述第一種和/或第二種寡糖或二糖輸出至所述培養(yǎng)基中。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法,其中將所述轉(zhuǎn)糖苷酶在所述培養(yǎng)期間添加至所述培養(yǎng)基或者由所述遺傳修飾細(xì)胞中的重組核酸表達(dá)。

6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述轉(zhuǎn)糖苷酶選自α-1,2-轉(zhuǎn)巖藻糖苷酶、α-1,3-轉(zhuǎn)巖藻糖苷酶、α-1,3/4-轉(zhuǎn)巖藻糖苷酶、α-2,3-轉(zhuǎn)唾液酸酶、α-2,6-轉(zhuǎn)唾液酸酶、β-n-乙酰葡糖胺糖苷酶、反式-乳-n-二糖苷酶和反式-β-半乳糖苷酶。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述供體寡糖選自三至五個單糖單元的巖藻糖基化寡糖、三至五個單糖單元的唾液酸化寡糖和三至四個單糖單元的中性核心寡糖。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中步驟a)中的所述培養(yǎng)在足夠的用于產(chǎn)生所述第一種寡糖的初始底物的存在下開始。

9.根據(jù)權(quán)利要求5至8中任一項所述的方法,其中在所述遺傳修飾細(xì)胞已經(jīng)將至少50%的用于產(chǎn)生所述第一種寡糖的所述初始底物轉(zhuǎn)化為所述第一種寡糖的時間點,將所述轉(zhuǎn)糖苷酶添加至培養(yǎng)物中。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9中任一項所述的方法,其中用于產(chǎn)生所述第一種寡糖的所述初始底物是乳糖、n-乙酰乳糖胺、乳-n-二糖或2’fl。

11.根據(jù)權(quán)利要求8至10中任一項所述的方法,其中將所述第二種寡糖或二糖添加至所述培養(yǎng)基中,并且所述第二種寡糖和用于產(chǎn)生所述第一種寡糖而添加的所述初始底物的摩爾量為至少2:1,例如至少3:1。

12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述副產(chǎn)物輸入蛋白是乳糖輸入蛋白,例如包含或由seq?id?no:3組成的lacy,或其功能變體。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述第三種寡糖是至少四個單糖單元的復(fù)雜寡糖,其選自dfl、fsl、lewis?b、lewis?y、唾液酸-lewis?a、唾液酸-lewis?x、lnfp-i、lnfp-ii、lnfp-iii、lnfp-iv、lnfp-v、lnfp-vi、lst-a、lst-b、lst-c、dslnt、lndfh-i、lndfh-ii、lndfh-iii、flst-a、flst-b、flst-c、plnh、plnnh、lnh、lnnh、flnh-i、flnh-ii、flnh-iii、fplnh-i、fplnnh?ii、df-lnf-i、df-lnf-ii、df-lnf-iii、df-對-lnh、df-對lnnh、flnnha、flnnhb、dflnnh、tf-lnh、slnh、fslnh、slnnh-i、fslnnh-i、slnnh-ii和ds-flnh-ii。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述遺傳修飾細(xì)胞產(chǎn)生選自2’fl、3fl、dfl、lnfp-i、3’sl、6’sl、3’slacnac、3’slnb、fsl、lst-a、lnt-ii、lnt和lnnt的供體寡糖。

15.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的方法,其中所述遺傳修飾細(xì)胞產(chǎn)生選自2’fl、3fl、2’flacnac、2’flnb、lewis?a、lewis?x、lnt-ii、lnt、lnnt、對-lnnh、lnfp-i、lnfp-ii、lnfp-iii、lnfp-iv、lnfp-v、lnfp-vi、3’sl、6’sl、lst-a和lst-c的受體寡糖。

16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述第一種、第二種和第三種寡糖是hmo。

17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述至少一種重組糖基轉(zhuǎn)移酶選自α-1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶、α-1,3-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶、α-1,3/4-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶、α-2,3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶、α-2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶、β-1,3-n-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶、β-1,6-n-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶、β-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和β-1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶。

18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述產(chǎn)生核苷酸活化糖的通路是從頭gdp-巖藻糖通路(gmd、wcag、manb、manc和mana)和/或唾液酸糖核苷酸通路(neub、neuc和neua)。

19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述第二種二糖或寡糖選自lacnac、lnb、2’fl、3fl、2’flacnac、2’flnb、lewis?a、lewis?x、3’sl、lnt、lnnt、lnfp-i、lnfp-ii、lnfp-iii、lnfp-v、lnfp-vi、lsta、lstc、lnh、f-lnh-ii、f-lnh-iii、df-lnh-i、df-lnh-ii、df-lnh-iii、s-lnh、ds-lnh、fs-lnh、lnnh、對-lnh和對-lnnh。

20.一種hmo組合物,其基本上由以下組成:

21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的組合物,其中所述組合物基本上由以下組成:

22.根據(jù)權(quán)利要求20至21所述的組合物在生產(chǎn)營養(yǎng)組合物中的用途。


技術(shù)總結(jié)
本公開涉及一種生產(chǎn)寡糖的方法,其中該方法將發(fā)酵工藝與發(fā)酵培養(yǎng)基中的酶促反應(yīng)組合,從而能夠在持續(xù)發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基中形成寡糖。該方法特別適用于生成復(fù)雜寡糖。

技術(shù)研發(fā)人員:G·S·莫拉,T·約翰松,N·班克
受保護(hù)的技術(shù)使用者:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/15
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