本方法涉及分離純化，尤其是涉及桑黃吡喃酮化合物interfungin?a的分離純化方法及作為抗癌藥物的用途。

背景技術：

1、桑黃是一類寄生于桑、楊、櫟、忍冬、杏、丁香等樹干上的珍稀食藥用真菌，傳統(tǒng)中醫(yī)中記載桑黃具有利五臟、軟堅、排毒、止血、活血、和胃止瀉等功效，主治淋病、崩漏帶下、癥瘕積聚、癖飲、脾虛泄瀉，現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)桑黃富含多糖、吡喃酮類、萜類、黃酮類等生物活性成分，其在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、降糖脂、抑菌、抗病毒、保肝等方面皆具有顯著功效，吡喃酮類化合物是桑黃中特有的一類化合物，許多吡喃酮類化合物被發(fā)現(xiàn)具有突出的抗腫瘤、抗炎、抗氧化活性，目前桑黃中已被鑒定報道的吡喃酮類化合物有38種，主要為具有苯乙烯基吡喃酮骨架和苯并吡喃酮骨架的多酚類色素，苯乙烯基吡喃酮骨架一般由多個苯乙烯基吡喃酮或者苯乙烯基吡喃酮與hispolon或hispidin縮合而成，不同基團和不同縮合程度均可能導致該類化合物的物理性質(zhì)和生理活性差異，從而導致其分離純化方法和醫(yī)學用途不同。

2、目前許多新奇的苯乙烯基吡喃酮骨架在桑黃中被鑒定發(fā)現(xiàn)，但由于野生桑黃的稀缺性，它們的提取分離純化工藝和藥理活性研究相對滯后，近年來由于桑黃人工栽培技術實現(xiàn)突破，桑黃的產(chǎn)量大大提升，這為桑黃中特有化合物的提取分離純化研究和藥理活性研究提供了條件，化合物interfungin?a是桑黃中的一種吡喃酮類化合物，其分離純化工藝和藥理活性罕有報道，因此分離純化該化合物對桑黃物質(zhì)基礎研究和藥理活性研究具有重要意義，本專利技術建立桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a分離純化工藝并發(fā)現(xiàn)該化合物可作為抗癌藥物的潛在用途，該技術將為interfungin?a作為抗癌原料藥的研究帶來啟發(fā)，加速推動桑黃產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決現(xiàn)有技術中的問題，本發(fā)明提出一種桑黃吡喃酮化合物interfungin?a、桑黃吡喃酮化合物interfungin?a的分離純化方法及化合物作為抗癌藥物的用途，該技術分離純化簡便，用于抗癌產(chǎn)品的開發(fā)，能夠推動桑黃的藥用價值提升。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a的分離純化方法，依次包括如下步驟：

3、1）將桑黃子實體切片，于45～55℃烘箱中烘干至恒重，經(jīng)粉碎機粉碎，得到桑黃子實體粉末；

4、2）采用超聲波輔助乙醇提取法從桑黃子實體粉末中提取出酚類物質(zhì)；

5、3）使用乙酸乙酯對酚類物質(zhì)進行萃取，取上層萃取液濃縮；

6、4）通過硅膠h層析柱洗脫分離，得到interfungin?a粗品；

7、5）再次通過硅膠h柱層析對interfungin?a粗品進行純化，得純度>?90％吡喃酮類組分interfungin?a。

8、作為優(yōu)選，步驟2）中具體方法為：

9、2.1）將烘干的桑黃子實體粉末按料液質(zhì)量體積比為1:10g/ml～1:100g/ml，加入體積濃度60～95%的乙醇溶液，超聲波處理1～5小時，獲得乙醇提取液和殘渣；

10、2.2）殘渣重復上述步驟2.1）1～5次，再次獲得提取液和殘渣；

11、2.3）合并步驟2.1）和步驟2.2）得到的提取液，在55℃下旋蒸濃縮至原體積的1/4～1/10，得含酚類物質(zhì)的乙醇濃縮液。

12、作為優(yōu)選，步驟3）中用乙酸乙酯萃取的具體方法為：

13、3.1）向含有酚類物質(zhì)的溶液中加入2～5倍體積的乙酸乙酯溶液，震搖分液漏斗，靜置10～40分鐘，收集上層乙酸乙酯萃取液；

14、3.2）重復上述步驟3.1）2～5次，再次獲得乙酸乙酯萃取液，直至乙酸乙酯層溶液明顯變淺；

15、3.3）合并步驟3.1）和步驟3.2）得到的萃取液，在55℃下旋蒸濃縮，得桑黃酚類物質(zhì)粉末。

16、作為優(yōu)選，步驟4）中通過硅膠h柱層析洗脫的具體方法為：用純甲醇溶液溶解桑黃酚類物質(zhì)粉末于2～10倍質(zhì)量的200～300目硅膠h混勻烘干，作為上柱粉末，通過硅膠h填裝柱洗脫分離，洗脫條件為二氯甲烷與甲醇作為有機流動相，以1～3ml/min流速，依次用含0.1%甲酸的二氯甲烷和甲醇以100:1，50:1:，20:1，10:1的體積比梯度洗脫，載樣量1～10%，二氯甲烷與甲醇體積比提高到10：1時用自動部分收集器收集薄層層析色譜結(jié)果中interfungin?a對應組分的洗脫液，旋蒸濃縮烘干，得到interfungin?a粗品；薄層層析色譜檢測采用的展開劑為乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=10:1:1:1。

17、作為優(yōu)選，所述步驟5）中通過硅膠h層析柱制備純化的具體方法為：用純甲醇溶液溶解interfungin?a粗品于2～10倍質(zhì)量的200～300目硅膠h混勻烘干，作為上柱粉末，重復步驟4）中操作，按照薄層層析色譜結(jié)果，對interfungin?a對應組分的洗脫液進行收集，旋蒸烘干，獲得純度>?90％吡喃酮類組分?interfungin?a；薄層層析色譜檢測采用的展開劑為乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=10:1:1:1。

18、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提出了一種桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungina，為采用前述方法分離純化獲得純度>?90％的吡喃酮類組分interfungin?a；結(jié)構(gòu)式為：

19、?。

20、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明還提出了一種桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungina的用途，將前述的桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungin?a作為抗癌藥物的用途。

21、本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明制備的桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungin?a，純度高，對人肝癌細胞hepg2和hep3b的增殖均表現(xiàn)出抑制作用，可用于抗癌產(chǎn)品的開發(fā)，對推動桑黃的藥用價值提升具有積極意義。

22、本發(fā)明的特征及優(yōu)點將通過實施例結(jié)合附圖進行詳細說明。

技術特征：

1.桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a的分離純化方法，其特征在于：依次包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a的分離純化方法，其特征在于：步驟2）中具體方法為：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a的分離純化方法，其特征在于：步驟3）中用乙酸乙酯萃取的具體方法為：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a的分離純化方法，其特征在于：步驟4）中通過硅膠h層析柱洗脫的具體方法為：用純甲醇溶液溶解桑黃酚類物質(zhì)粉末于2～10倍質(zhì)量的硅膠h混勻烘干，作為上柱粉末，通過硅膠h填裝柱洗脫分離，洗脫條件為二氯甲烷與甲醇作為有機流動相，以1～3ml/min流速，依次用含0.1%甲酸的二氯甲烷和甲醇以100:1，50:1:，20:1，10:1的體積比梯度洗脫，載樣量1～10%，二氯甲烷與甲醇體積比提高到10：1時用自動部分收集器收集薄層層析色譜結(jié)果中interfungin?a對應組分的洗脫液，旋蒸濃縮烘干，得到interfungin?a粗品；薄層層析色譜檢測采用的展開劑為乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=10:1:1:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的桑黃吡喃酮類化合物interfungin?a的分離純化方法，其特征在于：所述步驟5）中通過硅膠h層析柱制備純化的具體方法為：用純甲醇溶液溶解interfungin?a粗品于2～10倍質(zhì)量的硅膠h混勻烘干，作為上柱粉末，重復步驟4）中操作，按照薄層層析色譜結(jié)果，對interfungin?a對應組分的洗脫液進行收集，旋蒸烘干，獲得純度>?90％吡喃酮類組分?interfungin?a；薄層層析色譜檢測采用的展開劑為乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水=10:1:1:1。

6.一種桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungin?a，其特征在于：結(jié)構(gòu)式為：

7.一種桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungin?a的用途，其特征在于：將權(quán)利要求6中的桑黃抗癌活性吡喃酮類組分interfungin?a作為抗癌藥物的用途。

技術總結(jié)
本發(fā)明公開一種桑黃吡喃酮化合物Interfungin?A、該化合物的分離純化方法及作為抗癌藥物的用途，將桑黃粉末用超聲波輔助乙醇提取，經(jīng)乙酸乙酯萃取后，用硅膠柱層析進行吸附，依次用含0.1%甲酸的二氯甲烷和甲醇以100:1，50:1，20:1，10:1的體積比梯度洗脫，收集二氯甲烷：甲醇為10:1洗脫液中薄層層析色譜結(jié)果對應的Interfungin?A洗脫液，旋蒸濃縮得Interfungin?A粗品，再次通過硅膠柱進行層析純化，收集對應的洗脫液，經(jīng)旋蒸濃縮烘干得純度>90％吡喃酮類組分Interfungin?A，本發(fā)明吡喃酮類組分Interfungin?A及其分離純化方法，純度高，重復性好，溶劑回收率高，易于操作，適用于大規(guī)模生產(chǎn)，產(chǎn)物Interfungin?A對人肝癌細胞HepG2、Hep3B的生長有抑制作用，可用于抗癌產(chǎn)品的開發(fā)。

技術研發(fā)人員：董馨恬,李有貴,孫雨晴,霍進喜,鐘石,王文瓊,李晨悅
受保護的技術使用者：浙江省農(nóng)業(yè)科學院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15