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一種高效表達(dá)豬鏈球菌廣譜抗原GDH的方法與流程

文檔序號(hào):41944979發(fā)布日期:2025-05-16 14:02閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于具體包括如下步驟:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述利用red同源重組敲除基因的方法包括如下步驟:

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述缺陷菌株ssgg來(lái)源于ssg,ptsg缺失;缺陷菌株ssggfk來(lái)源于ssgg,含有pstv-fk質(zhì)粒;缺陷菌株ssggpk來(lái)源于ssgg,含有pstv-pk質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述質(zhì)粒pstv-fk和pstv-pk的構(gòu)建方法包括如下步驟:

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述引物galp-p1的dna序列為5’-tgcactgcagcggtcaaacaaggcaatg-3’b?(psti);所述引物galp-p2的dna序列為5’-acatgcatgcatagcggcagaggatagagc-3’b?;所述引物glf-p1的dna序列為5’-tgcactgcagccgatactcggcgattgtaag-3’b?(psti);所述引物glf-p2的dna序列為5’-acatgcatgcaaggattcagccaaagcaagt-3’b?(sphi)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)為:葡萄糖?5.0?g/l、酵母粉?5.0?g/l、蛋白胨?2.0?g/l、檸檬酸?1.5?g/l、kcl2.0?g/l、mgso4?7h2o?1.5?g/l、(nh4)2so4?2.0?g/l、氯化膽堿?1.0?ml/l、vb1?20.0?mg/l、vh5.0?mg/l。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基為::葡萄糖?5.0?g/l、酵母粉?5.0?g/l、蛋白胨?2.0?g/l、檸檬酸?1.5?g/l、kcl2.0?g/l、mgso4?7h2o?1.5?g/l、(nh4)2so4?2.0?g/l、氯化膽堿?1.0?ml/l、vb1?20.0?mg/l、vh5.0?mg/l、三甲基甘氨酸2.0?g/l。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于發(fā)酵過(guò)程中所述ph水平控制策略為為:0~10?h控制在7.0,10~20?h控制在6.5;其特征在于發(fā)酵過(guò)程中所述溶氧水平控制在0~10?h控制在60%,10~20?h控制在30%;所述補(bǔ)料方式為:根據(jù)溶氧電極檢測(cè)的溶氧信號(hào)補(bǔ)加葡萄糖溶液,當(dāng)溶氧值突然升高時(shí),通過(guò)脈沖補(bǔ)料補(bǔ)加葡萄糖溶液10次,如此反復(fù)補(bǔ)加。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述iptg的濃度為0.5?mmol/l。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述?gdh蛋白的純化包括如下步驟:


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種高效表達(dá)豬鏈球菌廣譜抗原GDH的方法,屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明結(jié)合代謝工程原理與蛋白高效表達(dá)理論,通過(guò)宿主菌理性改造、培養(yǎng)基組分篩選、以及發(fā)酵過(guò)程調(diào)控,實(shí)現(xiàn)了具有免疫原性GDH蛋白的高效表達(dá);在500?L發(fā)酵罐上,應(yīng)用pH值及溶氧分階段控制策略,結(jié)合溶氧反饋控制補(bǔ)料策略,乙酸積累量降低至2.48?g/L,細(xì)胞濃度為48.47(OD<subgt;600</subgt;),GDH蛋白表達(dá)水平為4.13?g/L,實(shí)現(xiàn)了GDH蛋白高效表達(dá)的工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明高效表達(dá)GDH蛋白以可溶性表達(dá)為主,且具有良好的免疫原性,以采用蜂膠作為佐劑,免疫保護(hù)率達(dá)到70%,可作為豬鏈球菌亞單位疫苗的有效抗原成分。

技術(shù)研發(fā)人員:程立坤,夏小靜,宋征,趙修報(bào),張慧輝,林初文,李書(shū)光,李晶晶,付強(qiáng),王春迪,畢研麗
受保護(hù)的技術(shù)使用者:山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/15
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