1.一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于具體包括如下步驟:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述利用red同源重組敲除基因的方法包括如下步驟:
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述缺陷菌株ssgg來(lái)源于ssg,ptsg缺失;缺陷菌株ssggfk來(lái)源于ssgg,含有pstv-fk質(zhì)粒;缺陷菌株ssggpk來(lái)源于ssgg,含有pstv-pk質(zhì)粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述質(zhì)粒pstv-fk和pstv-pk的構(gòu)建方法包括如下步驟:
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述引物galp-p1的dna序列為5’-tgcactgcagcggtcaaacaaggcaatg-3’b?(psti);所述引物galp-p2的dna序列為5’-acatgcatgcatagcggcagaggatagagc-3’b?;所述引物glf-p1的dna序列為5’-tgcactgcagccgatactcggcgattgtaag-3’b?(psti);所述引物glf-p2的dna序列為5’-acatgcatgcaaggattcagccaaagcaagt-3’b?(sphi)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)為:葡萄糖?5.0?g/l、酵母粉?5.0?g/l、蛋白胨?2.0?g/l、檸檬酸?1.5?g/l、kcl2.0?g/l、mgso4?7h2o?1.5?g/l、(nh4)2so4?2.0?g/l、氯化膽堿?1.0?ml/l、vb1?20.0?mg/l、vh5.0?mg/l。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基為::葡萄糖?5.0?g/l、酵母粉?5.0?g/l、蛋白胨?2.0?g/l、檸檬酸?1.5?g/l、kcl2.0?g/l、mgso4?7h2o?1.5?g/l、(nh4)2so4?2.0?g/l、氯化膽堿?1.0?ml/l、vb1?20.0?mg/l、vh5.0?mg/l、三甲基甘氨酸2.0?g/l。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于發(fā)酵過(guò)程中所述ph水平控制策略為為:0~10?h控制在7.0,10~20?h控制在6.5;其特征在于發(fā)酵過(guò)程中所述溶氧水平控制在0~10?h控制在60%,10~20?h控制在30%;所述補(bǔ)料方式為:根據(jù)溶氧電極檢測(cè)的溶氧信號(hào)補(bǔ)加葡萄糖溶液,當(dāng)溶氧值突然升高時(shí),通過(guò)脈沖補(bǔ)料補(bǔ)加葡萄糖溶液10次,如此反復(fù)補(bǔ)加。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述iptg的濃度為0.5?mmol/l。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效表達(dá)豬鏈球菌光譜抗原gdp的方法,其特征在于所述?gdh蛋白的純化包括如下步驟: