本發(fā)明屬于控制菊花花期，具體涉及一種控制露地菊開花的重組載體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、菊花是一種短日照植物，花期較為集中，目前如何改變或調(diào)節(jié)花期已成為菊花研究的熱點問題。成花誘導(dǎo)是植物生命周期中的一個至關(guān)重要的階段。近年來，隨著對植物開花機制的深入研究，發(fā)現(xiàn)表觀遺傳修飾在植物開花途徑中發(fā)揮著重要的作用。利用表觀等位基因，進(jìn)行定向育種在作物品質(zhì)改良方面具有廣泛的應(yīng)用。露地菊具有高度雜合性及復(fù)雜的遺傳背景，通過傳統(tǒng)的育種方法，難以進(jìn)行定向育種。

2、露地菊是一種多年生宿根草本植物，屬于栽培種菊花。植株矮小且結(jié)實，不僅能夠耐寒抗旱，防御病蟲侵害，而且花色艷麗，花型多樣，在露天環(huán)境也能夠繁茂開花。早在1990年，王彭偉等選育出了第一批地被菊。1992至1995年，劉曉東等在黑龍江省四個地區(qū)進(jìn)行栽培試驗，創(chuàng)制出了適宜當(dāng)?shù)卦耘唷⒛軌蛟诼短飙h(huán)境下越冬的新品種，簡稱為‘露地菊’。作為一種常見的觀賞植物，其獨特的美麗和耐寒性使其深受園藝愛好者和專業(yè)種植者的喜愛。露地菊大多具有復(fù)雜的六倍體基因組結(jié)構(gòu)，這使得露地菊品系豐富多彩，在生物學(xué)研究和商業(yè)應(yīng)用中都具有極高的價值。這種基因的多樣性為菊花的遺傳改良和新品種創(chuàng)制提供了無限可能，在全球花卉市場中的地位日益重要。

3、菊花按照自然花期可分為春菊(4月下旬-5月下旬)、夏菊(5月下旬-8月)、夏秋菊(8-9月)、秋菊(10月下旬-11月下旬)、寒菊(12上旬-次年2月)。大多菊花品種屬于秋菊，花期比較集中，自然花期偏晚，維持時間較短，難以滿足市場需求。露地菊是一種短日照植物，具有光周期依賴性，花期集中在9月到10月之間，持續(xù)約40到50天。然而，由于黑龍江省地處高緯度地區(qū)，露地菊的盛花期常常與霜降時間相沖突。當(dāng)氣溫降低時，植株容易過早枯萎，嚴(yán)重影響了觀賞價值。因此，如何通過分子育種手段延長或調(diào)節(jié)其觀賞期已成為露地菊研究的熱點問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了提供一種調(diào)控露地菊的花期的方法。

2、本發(fā)明提供一種控制菊花開花的重組載體，所述重組載體是將seq?id?no.13所示的序列的靶點連接到crispr-dcas9-tet1cd載體上或dcas9-suntag-ntdrmcd載體上，獲得的重組載體。

3、進(jìn)一步地限定，所述靶點序列如seq?id?no.26-seq?id?no.31中的任意一個或多個所示。

4、進(jìn)一步地限定，所述菊花為露地菊。

5、本發(fā)明提供一種上述的重組載體在控制露地菊開花花期中的應(yīng)用。

6、本發(fā)明提供一種含有上述的重組載體的微生物細(xì)胞在控制露地菊開花花期中的應(yīng)用。

7、進(jìn)一步地限定，所述微生物細(xì)胞為真核微生物細(xì)胞或原核微生物細(xì)胞。

8、本發(fā)明提供一種培育提前開花的露地菊的方法，所述方法的具體步驟如下：

9、步驟1：重組載體是將seq?id?no.13所示的序列的靶點連接到dcas9-suntag-ntdrmcd載體上，獲得的重組載體；

10、步驟2：將步驟2獲得的重組載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中，獲得重組農(nóng)桿菌；

11、步驟3：將步驟3獲得的重組農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入露地菊中，獲得轉(zhuǎn)基因露地菊。

12、進(jìn)一步地限定，所述靶點序列如seq?id?no.26-seq?id?no.31中的任意一個或多個所示。

13、本發(fā)明提供一種培養(yǎng)延遲開花的露地菊的方法，所述方法的具體步驟如下：

14、步驟1：重組載體是將seq?id?no.13所示的序列的靶點連接到crispr-dcas9-tet1cd載體上，獲得的重組載體；

15、步驟2：將步驟2獲得的重組載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中，獲得重組農(nóng)桿菌；

16、步驟3：將步驟3獲得的重組農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入露地菊中，獲得轉(zhuǎn)基因露地菊。

17、進(jìn)一步地限定，所述靶點序列如seq?id?no.26-seq?id?no.31中的任意一個或多個所示。

18、有益效果：crispr-dcas9-tet1cd-sgrna能夠降低cmfda基因啟動子區(qū)的dna甲基化修飾程度，轉(zhuǎn)入crispr-dcas9-tet1cd-sgrna載體的露地菊未現(xiàn)蕾，表現(xiàn)為開花延遲，利用dcas9-suntag-ntdrm2cd系統(tǒng)將ntdrmcd定向到cmfda啟動子區(qū)域，誘導(dǎo)露地菊早期開花。cmfda過表達(dá)導(dǎo)致露地菊開花延遲。cmfda基因沉默導(dǎo)致露地菊延遲開花。

技術(shù)特征：

1.一種控制菊花開花的重組載體，其特征在于，所述重組載體是將seq?id?no.13所示的序列的靶點連接到crispr-dcas9-tet1cd載體上或dcas9-suntag-ntdrmcd載體上，獲得的重組載體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組載體，其特征在于，所述靶點序列如seq?id?no.26-seqid?no.31中的任意一個或多個所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組載體，其特征在于，所述菊花為露地菊。

4.權(quán)利要求1所述的重組載體在控制露地菊開花花期中的應(yīng)用。

5.含有權(quán)利要求1所述的重組載體的微生物細(xì)胞在控制露地菊開花花期中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述微生物細(xì)胞為真核微生物細(xì)胞或原核微生物細(xì)胞。

7.一種培育提前開花的露地菊的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述靶點序列如seq?id?no.26-seq?idno.31中的任意一個或多個所示。

9.一種培養(yǎng)延遲開花的露地菊的方法，其特征在于，所述方法的具體步驟如下：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述靶點序列如seq?id?no.26-seq?idno.31中的任意一個或多個所示。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種控制露地菊開花的重組載體及其應(yīng)用，屬于控制菊花花期技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明為了提供一種調(diào)控露地菊的花期的方法。本發(fā)明提供一種控制露地菊開花的重組載體，所述重組載體是將SEQ?ID?NO.13所示的序列的靶點連接到CRISPR?dCas9?TET1cd載體上或dCas9?SunTag?NtDRMcd載體上，獲得的重組載體。為控制露地菊的花期提供更扎實的理論基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：張旸,薛婉杰,石佳旭,李玉花
受保護的技術(shù)使用者：東北林業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15