1.硝基還原酶小分子熒光探針的合成路線及方法：
2.2化合物2的合成:?稱取化合物1(1.19?g,6.0?mmol)加入無水四氫呋喃?(20?ml)中，冰浴條件下加入甲基氯化鎂(3mol/l在四氫呋喃中,?3.0?ml,?9.0?mmol)。反應(yīng)混合物55℃攪拌小時后，冰浴條件下加入10?ml的2?mol/l鹽酸溶液進(jìn)行酸化，并向上述溶液加入過量碘化鈉。過濾沉淀并用水和乙酸乙酯洗滌后進(jìn)行干燥，得橙色固體產(chǎn)物?(965?mg,82%),?mp109–110℃。1h?nmr?(600?mhz,?chloroform-d)?δ:?8.05?(dd,?j?=?7.5,?1.1?hz,?1h),7.93?–?7.86?(m,?2h),?7.70?–?7.58?(m,?3h),?4.86?(q,?j?=?7.5?hz,?2h),?3.12?(s,2h),?1.56?(t,?j?=?7.5?hz,?3h).;?13c?nmr?(151?mhz,?chloroform-d)?δ?167.94,142.23,?134.10,?133.68,?132.65,?132.25,?129.18,?129.00,?126.42,?123.06,116.35,?39.03,?14.38,?13.19。
3.3化合物3的合成:?稱取4-羥基間苯二甲醛(250?mg,1.65?mmol)和碳酸鉀（456?mg,3.3mmol）溶于10?ml無水n,n-二甲基甲酰胺中(10.0?ml)中,隨后加入4-硝基芐基溴(427.5mg,2.0?mmol),反應(yīng)混合物氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫攪拌反應(yīng)12小時。反應(yīng)結(jié)束后，混合物倒入100ml冰水中，析出固體，抽濾得粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物溶于少量二氯甲烷中，加入100?ml正己烷,析出大量白色固體固體，抽濾得化合物3(329?mg,70%)。1h?nmr?(600?mhz,?dmso-d6)?δ:10.49?(s,?1h),?9.98?(s,?1h),?8.31?–?8.22?(m,?3h),?8.20?(dd,?j?=?8.7,?2.2?hz,1h),?7.84?(d,?j?=?8.8?hz,?2h),?7.52?(d,?j?=?8.7?hz,?1h),?5.60?(s,?2h).?13c?nmr(151?mhz,?dmso-d6)?δ?194.22,?193.67,?163.07,?147.69,?141.35,?133.71,?131.97,131.48,?128.73,?125.72,?123.67,?116.43,?71.47。
4.4化合物4的合成:?稱取化合物2(160?mg,0.5?mmol)和化合物3(57?mg,0.2?mmol)溶于甲苯/正丁醇(5.0?ml/5.0?ml),反應(yīng)混合物在氮?dú)獗Ｗo(hù)下100℃攪拌12小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，得到的固體抽濾并用乙醚洗滌,得褐色固體(77?mg,60%)。1h?nmr?(600mhz,?dmso-d6)?δ:?9.54?(s,?1h),?9.12?(d,?j?=?5.9?hz,?1h),?8.90?–?8.83?(m,?2h),8.67?(dd,?j?=?19.6,?7.4?hz,?2h),?8.49?–?8.29?(m,?10h),?8.11?(dd,?j?=?13.9,6.6?hz,?2h),?8.02?(d,?j?=?8.4?hz,?2h),?7.97?–?7.91?(m,?2h),?7.52?(d,?j?=?8.5hz,?1h),?5.66?(s,?2h),?5.07?(d,?j?=?6.9?hz,?2h),?4.95?–?4.88?(m,?2h),?1.56(t,?j?=?7.1?hz,?3h),?1.42?(t,?j?=?7.1?hz,?3h).;?13c?nmr?(151?mhz,?dmso-d6),?δ:170.80,?156.67,?152.40,?150.80,?146.98,?146.90,?137.44,?128.60?(d,?j?=?6.6hz),?128.28?(d,?j?=?5.8?hz),?126.11,?122.53,?118.35,?118.23,?115.28,?115.16,114.48,?113.67,?76.01?(d,?j?=?4.0?hz),?42.74,?40.49,?38.60,?32.16,?27.91;hrms?(esi):?calcd?for?c43h35n3o3,?[m]+,?m/z,?320.6334;?found,?320.6353。