1.一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:
2.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s100和步驟s200中的rna為mrna。
3.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s100中的不加帽rna通過t7聚合酶體外轉錄制備。
4.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s200中的加帽rna的帽狀結構為cap?0、capⅰ、capⅱ型結構中的一種;所述加帽rna通過酶法加帽或者共轉錄加帽制備。
5.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s300中的純化方式為磁珠純化、柱純化、酚/氯仿純化或氯化鋰純化。
6.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s400中的待測rna?5’utr為rna自5’序列開始第1~53nt堿基序列;所述探針形式為rna片段10~20nt+dna片段4~6nt,rnase?h探針無任何修飾,所述待測rna與rnase?h探針的比例為1:1~1:10。
7.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s500中變性為在85~95℃變性1~10min;所述退火為依次在65℃持續(xù)2min、55℃持續(xù)2min、45℃持續(xù)2min、37℃持續(xù)2min、30℃持續(xù)2min、22℃持續(xù)2min。
8.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s600中的rna水解酶為rnase?h、rnase?hⅰ和rnase?hⅲ中的一種;所述rna水解酶反應溫度為20~37℃,反應時間為0~3h。
9.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s600中的混合切割片段包括未參與反應的全長rna、長3’切割產物、加帽的短5’切割產物、未加帽的短5’切割產物和rnase?h探針。
10.根據權利要求1所述的一種使用無標記rnase?h探針和lc-ms對mrna進行加帽率分析的方法,其特征在于:所述步驟s700中所述的混合短片段為加帽的短5’切割產物、未加帽的短5’切割產物和rnase?h探針。