技術特征：

1.一種限制性核酸內切酶輔助的dna中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的一種限制性核酸內切酶輔助的dna中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，其特征在于，步驟（5）中，所述限制性核酸內切酶為sal?ⅰ。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種限制性核酸內切酶輔助的dna中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，其特征在于，步驟（2）中，對所述dna樣品進行處理，根據(jù)所要測序的微量修飾堿基選擇相應的處理方法：

4.根據(jù)權利要求3所述的一種限制性核酸內切酶輔助的dna中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，其特征在于，當所要測序的微量修飾為尿嘧啶或8og時，采用所述糖苷酶處理dna樣品的條件如下：將糖苷酶在糖苷酶緩沖液中與dna樣品在37?℃反應。

5.根據(jù)權利要求3所述的一種限制性核酸內切酶輔助的dna中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，其特征在于，當所要測序的微量修飾為ap位點時，采用所述ape1酶處理dna樣品的條件如下：將ape1酶在ape1酶緩沖液中與待測的dna在37?℃反應1-12?h。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種限制性核酸內切酶輔助的dna中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，其特征在于，步驟（5）中，采用所述限制性核酸內切酶處理的具體操作如下：添加1?u限制性核酸內切酶，2?μl?10?×quickcut?buffer，將反應體系置于37?℃反應1-16?h。

7.一種定位檢測dna中微量修飾的試劑盒，包含糖苷酶、ape1酶、dna聚合酶、限制性核酸內切酶。

8.限制性核酸內切酶在定位檢測dna中微量修飾的應用。

9.限制性核酸內切酶在制備定位檢測dna中微量修飾的試劑盒中的應用。

技術總結
本發(fā)明提供了一種限制性核酸內切酶輔助的DNA中微量修飾堿基的單堿基分辨率測序方法，屬于生物技術領域。通過對片段化的DNA進行末端修復和接頭連接在DNA兩端添加含有限制性核酸內切酶位點的接頭，基于糖苷酶能夠特異性識別并切割微量修飾或APE1酶能夠特異性識別并切割AP位點，進行延伸反應并添加接頭P5，最后通過限制性核酸內切酶切除背景DNA，并通過PCR擴增和測序獲得對應DNA序列，根據(jù)接頭P5和DNA連接序列的差異確定微量修飾的位置。本發(fā)明提供的方法操作簡單、準確性高且具有較高的普適性，為測序分析DNA上的微量修飾提供強大的工具。本發(fā)明提供的方法將極大地推動相關領域的科學研究，特別是在推動微量修飾的產生及其修復機制的研究中展現(xiàn)出巨大潛力。

技術研發(fā)人員：袁必鋒,季彤彤,謝能彬
受保護的技術使用者：武漢大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15