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G6PD基因啟動子區(qū)的DNA擴增引物及其甲基化檢測方法

文檔序號:41953491發(fā)布日期:2025-05-16 14:17閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種g6pd基因啟動子區(qū)dna?pcr擴增引物,其特征在于,所述引物序列如seq?idno.1和seq?id?no.2所示。

2.一種g6pd基因啟動子區(qū)甲基化檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測方法,其特征在于,步驟(1)提取的dna來自離體人體組織的dna,具體為人外周血和/或其他脫落組織細胞。

4.根據(jù)權利要求2所述的檢測方法,其特征在于,步驟(1)所述甲基化處理為亞硫酸氫鹽甲基化處理;處理輸入的dna濃度為每樣本20微升體系500ng?dna,dna變性和亞硫酸鹽轉化溫度時間為98℃/10分鐘變性,60℃/150分鐘轉化。

5.根據(jù)權利要求2所述的檢測方法,其特征在于,步驟(2)所述pcr擴增的程序為,

6.根據(jù)權利要求2所述的檢測方法,其特征在于,步驟(3)所述pcr擴增產物檢測為瓊脂糖凝膠電泳檢測,瓊脂糖凝膠電泳檢測時的瓊脂糖的濃度為1.0%,電泳時電壓150v,時間20min。

7.根據(jù)權利要求2至6任一項所述的檢測方法,其特征在于,步驟(3)所述測序結果的比對,具體為一代測序結果與人類基因組序列即jan.2022(t2t?chm13v2.0/hs1)進行單堿基比對,對每個樣本的第1號-第28號cpg位點進行逐個判別,以測序峰圖為準,對于雙峰,c與t峰強小于等于1:1判定為t;峰強大于等于2:1判定為c,隨后對照g6pd基因原始cg堿基序列,與之對應的測序結果tg堿基序列判斷為該cpg位點為未甲基化cpg位點,測序結果依然為cg堿基序列的則判斷為甲基化cpg位點。

8.根據(jù)權利要求7所述的檢測方法,其特征在于,每個cpg位點的甲基化情況的判定方法和判斷標準分別為,


技術總結
本發(fā)明涉及一種G6PD基因啟動子區(qū)的DNA擴增引物及其甲基化檢測方法,屬于基因檢測技術領域,本發(fā)明設計了G6PD基因啟動子區(qū)亞硫酸鹽測序PCR(Bisulfite?Sequencing?PCR,BSP)甲基化定量檢測特異性擴增引物,包含正向引物和反向引物,利用該引物進行PCR擴增,G6PD基因啟動子區(qū)的DNA序列長度達251bp,共涵蓋啟動子區(qū)28個CpG位點,不需要純化即可直接進行測序,可方便快捷地在分子水平上實現(xiàn)對G6PD臨床異質性的患者病情發(fā)展檢測及預測提供甲基化指標,并為以G6PD基因啟動子區(qū)甲基化為靶點的分子檢測干預G6PD疾病提供科學依據(jù)。

技術研發(fā)人員:張杰,黃雅欣,江濤,劉芳,楊淑然,鄧雅菲,楊躍成,宋雨鑫
受保護的技術使用者:昆明理工大學
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/5/15
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