本發(fā)明涉及脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體由包含磷脂酰絲氨酸的外小葉以及包含磷脂酰絲氨酸和磷脂酸的內(nèi)小葉組成，其特征在于，所述脂質(zhì)體的ζ電位為-25mv至-100mv，并且總磷脂酰絲氨酸與磷脂酸之間的摩爾比為5:1至35:1，更優(yōu)選為16:1至18:1，甚至更優(yōu)選為17:1。本發(fā)明還涉及所述脂質(zhì)體和/或包含所述脂質(zhì)體的組合物在治療細(xì)菌感染，優(yōu)選在治療由分枝桿菌(mycobacteria)、特別是由非結(jié)核分枝桿菌(nontuberculousmycobacteria)引起的感染中的用途。

背景技術(shù)：

1、分枝桿菌是革蘭氏可變桿菌(gram-variable?bacilli)屬，其為分枝桿菌(mycobacteriaceae)科中唯一能夠在人中引發(fā)多種疾病的屬。

2、分枝桿菌的細(xì)胞壁的特征在于：肽聚糖薄層與阿拉伯半乳聚糖、分枝菌酸和酚糖脂結(jié)合。這樣的復(fù)雜的細(xì)胞壁使分枝桿菌具有對(duì)一些在醫(yī)學(xué)治療中最常用的物質(zhì)完全不通透的優(yōu)勢(shì)，這部分地解釋了分枝桿菌對(duì)常用抗生素的已知抗性。

3、在醫(yī)學(xué)上，分枝桿菌傳統(tǒng)上被分為3組。

4、第一組包括結(jié)核分枝桿菌(tuberculous?mycobacteria)，即能夠在動(dòng)物宿主中引發(fā)結(jié)核病。這一組由所謂的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mycobacterium?tuberculosis?complex)的細(xì)菌組成：結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium?tuberculosis)(導(dǎo)致人結(jié)核病)、非洲分枝桿菌(mycobacterium?africanum)(對(duì)生物體的感染程度與結(jié)核分枝桿菌的相似，但不太可能引發(fā)疾病)和牛分枝桿菌(mycobacterium?bovis)(導(dǎo)致牛結(jié)核病，為可通過(guò)食物傳播給人的人畜共患病)。

5、第二組由非結(jié)核分枝桿菌組成，即在人宿主中但僅在與降低所定植生物體免疫防御的特定條件同時(shí)存在下引發(fā)除結(jié)核病以外的一系列病理狀況的分枝桿菌(因此它們是機(jī)會(huì)性病原體)。

6、第三組以麻風(fēng)病的病原體麻風(fēng)分枝桿菌(mycobacterium?leprae)為代表，其盡管可歸入非結(jié)核分枝桿菌組，但具有獨(dú)特的臨床和生物學(xué)特征。

7、非結(jié)核分枝桿菌是由超過(guò)150種不同的物種組成的細(xì)菌異質(zhì)群體，其中一些能夠感染人并在人中引發(fā)除結(jié)核病以外的疾病。

8、已知大多數(shù)被非結(jié)核分枝桿菌感染的對(duì)象將不發(fā)生感染的臨床癥狀。

9、已經(jīng)觀察到對(duì)非結(jié)核分枝桿菌感染最易感的對(duì)象是以免疫系統(tǒng)減弱為特征的那些，例如aids患者或正在接受移植的患者，或者因吸煙或先前的結(jié)核病而具有肺部病變的人，或者受肺疾病例如肺氣腫、copd或囊性纖維化影響的人。

10、由非結(jié)核分枝桿菌引起的感染可能由于這些生物體對(duì)用于治療細(xì)菌感染的常用處方抗生素具有抗性而難以治療并且需要長(zhǎng)時(shí)間來(lái)根除。

11、在非結(jié)核分枝桿菌的物種中，由膿腫分枝桿菌(mycobacterium?abscessus)引起的感染由于對(duì)常用抗微生物藥物具有抗性而更難以治療。

12、膿腫分枝桿菌(m.abscessus)的抗生素抗性歸因于多種機(jī)制，其中有固有藥物抗性、細(xì)胞壁的低通透性、誘導(dǎo)藥物外排泵、分枝桿菌酶中存在不將前藥轉(zhuǎn)化為活性代謝物的突變和/或表達(dá)許多可中和藥物或改變其特定靶標(biāo)的酶。

13、膿腫分枝桿菌可導(dǎo)致肺疾病、皮膚感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、菌血癥、眼感染和另一些不太常見(jiàn)的疾病，這些在免疫功能低下的患者中變得非常嚴(yán)重。

14、此外，特別是膿腫分枝桿菌可在患有潛在肺疾病(例如囊性纖維化、支氣管擴(kuò)張和/或先前的結(jié)核病)的易感宿主中引起慢性肺疾病。

15、膿腫分枝桿菌還可在免疫缺陷患者中、近期接受過(guò)手術(shù)干預(yù)、紋身或針灸的患者中引起皮膚感染。

16、膿腫分枝桿菌感染的發(fā)生率似乎隨時(shí)間提高(lee?et?al.,mycobacteriumabscessus?complex?infections?in?humans,emerg?infect?dis.2015,sep?21(9):1638–46)，并且特別令人擔(dān)憂的是在免疫功能脆弱的患者中報(bào)道的膿腫分枝桿菌醫(yī)院感染的暴發(fā)。

17、鑒于以上，顯然需要提供對(duì)抗生素抗性細(xì)菌，特別是對(duì)分枝桿菌、優(yōu)選非結(jié)核分枝桿菌具有抗微生物效力的新的產(chǎn)品。

18、用于治療由細(xì)菌和/或病毒引起的，特別是由分枝桿菌引起的肺感染的可用的產(chǎn)品是wo2009/011007中描述的脂質(zhì)體。

19、wo2009/011007中描述的脂質(zhì)體是不對(duì)稱脂質(zhì)體，其包含在外脂質(zhì)層中的磷脂酰絲氨酸分子以及在內(nèi)脂質(zhì)層中的至少一種生物活性脂質(zhì)。存在于脂質(zhì)體的內(nèi)脂質(zhì)層中的生物活性脂質(zhì)選自磷脂酸、溶血磷脂酸、花生四烯酸、鞘磷脂、鞘氨醇、鞘氨醇1-磷酸、神經(jīng)酰胺、白三烯、類(lèi)前列腺素、環(huán)戊烯酮前列腺素或其衍生物。

20、然而，這種以小于25mv的絕對(duì)ζ電位值為特征的脂質(zhì)體似乎具有高不穩(wěn)定性。

21、已知ζ電位的測(cè)量用于預(yù)測(cè)靜電分散或相互作用的穩(wěn)定性。特別地，ζ電位是由于形成雙電層而產(chǎn)生的電位。

22、實(shí)際上，當(dāng)在溶液中移動(dòng)時(shí)(布朗運(yùn)動(dòng))，顆粒與離子雙層一起移動(dòng)。

23、高的絕對(duì)ζ電位值(即，小于-30mv和大于+30mv)導(dǎo)致納米粒保持彼此遠(yuǎn)離，回彈足以消除團(tuán)聚、聚集和/或絮凝的可能性。

24、低的ζ電位值，例如wo2009/011007中描述的脂質(zhì)體的ζ電位值導(dǎo)致顆粒聚集和絮凝。

25、實(shí)際上，以絕對(duì)ζ電位值小于25mv為特征的脂質(zhì)體極其不穩(wěn)定，并且當(dāng)其處于溶液中時(shí)傾向于形成聚集體。

26、除此之外，獲得wo2009/011007中描述的以這樣的高不穩(wěn)定性為特征的脂質(zhì)體的工業(yè)過(guò)程存在相當(dāng)多困難并且不容易規(guī)模化。

27、此外，wo2009/011007中描述的不對(duì)稱脂質(zhì)體具有高多分散指數(shù)，并且存在兩種或更多種不同尺寸的顆粒群。因此明顯的是，這樣的不對(duì)稱脂質(zhì)體的特征在于高的尺寸不均勻性。

28、因此，有必要通過(guò)提供具有較高穩(wěn)定性、較高尺寸均勻性并且可以通過(guò)規(guī)?；^(guò)程獲得的對(duì)抗生素抗性細(xì)菌具有抗微生物活性的產(chǎn)品、特別是脂質(zhì)體來(lái)克服已知技術(shù)的缺點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、申請(qǐng)人提出了通過(guò)提供以-25mv至-100mv的ζ電位為特征的脂質(zhì)體來(lái)解決現(xiàn)有技術(shù)中具有抗微生物活性的脂質(zhì)體的低穩(wěn)定性的技術(shù)問(wèn)題。

2、與現(xiàn)有技術(shù)中絕對(duì)ζ電位值低于25mv的不對(duì)稱脂質(zhì)體相比，根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體更穩(wěn)定，不發(fā)生絮凝和聚集現(xiàn)象，并且以更高的尺寸均勻性為特征。

3、除了特別穩(wěn)定之外，根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體的特征還在于高抗微生物活性，因?yàn)槠淠軌虼碳っ庖呦到y(tǒng)對(duì)一種或更多種病原體的響應(yīng)。實(shí)際上，如實(shí)驗(yàn)部分所示，本發(fā)明的脂質(zhì)體通過(guò)將已知參與抗細(xì)菌活性(通過(guò)吞噬溶酶體生物發(fā)生)或抗病毒響應(yīng)的脂質(zhì)中間體(脂肪酸、磷脂等)直接運(yùn)輸?shù)骄奘杉?xì)胞中來(lái)增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的殺微生物響應(yīng)。

4、根據(jù)本發(fā)明，這些脂質(zhì)中間體通過(guò)以外小葉上存在磷脂酰絲氨酸為特征的脂質(zhì)體運(yùn)輸?shù)骄奘杉?xì)胞中。

5、實(shí)際上，外小葉中存在磷脂酰絲氨酸使得根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體類(lèi)似于凋亡小體。特別地，凋亡小體可被巨噬細(xì)胞以及用于識(shí)別和吞噬凋亡小體的病毒性和細(xì)菌性肺感染的靶細(xì)胞即成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞吞噬。

6、一旦被所述細(xì)胞吞噬，根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體就向其中釋放生物活性脂質(zhì)，已知這些生物活性脂質(zhì)參與抗細(xì)菌活性。詳細(xì)地說(shuō)，生物活性脂質(zhì)參與吞噬過(guò)程的從病原體的內(nèi)化開(kāi)始到吞噬溶酶體的成熟的所有步驟，并且通過(guò)募集、保留和調(diào)節(jié)所涉及特定蛋白質(zhì)的活性而參與激活固有免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的殺菌響應(yīng)。

7、此外，有利的是，巨噬細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的吞噬作用與抗炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生相關(guān)(hoffmann?p.r?et?al.j.immunol.2005；174:1393-1404)，這降低了損傷組織的炎性響應(yīng)。

8、因此，本發(fā)明的第一方面是脂質(zhì)體，其由包含磷脂酰絲氨酸的外小葉以及包含磷脂酰絲氨酸和磷脂酸的內(nèi)小葉組成，其特征在于，所述脂質(zhì)體的ζ電位為-25mv至-100mv，并且總磷脂酰絲氨酸與磷脂酸之間的摩爾比為5:1至35:1。

9、優(yōu)選地，在根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體中，總磷脂酰絲氨酸與磷脂酸之間的摩爾比為16:1至18:1，甚至更優(yōu)選為17:1。

10、根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的方面，如實(shí)驗(yàn)部分所示，當(dāng)磷脂酰絲氨酸、特別是l-α-磷脂酰絲氨酸與磷脂酸、特別是l-α-磷脂酸的摩爾比為17:1(旨在為總磷脂酰絲氨酸與磷脂酸之間的摩爾比)時(shí)，針對(duì)膿腫分枝桿菌的抗微生物響應(yīng)的效力提高。因此，在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的脂質(zhì)體包含摩爾比為17:1的磷脂酰絲氨酸和磷脂酸。

11、任選地，根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體還可包含膽固醇，所述膽固醇可排布在外小葉上、內(nèi)小葉上或其兩者上。

12、在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體并入了一種或更多種抗生素，例如選自一線抗結(jié)核抗生素；二線抗結(jié)核抗生素；氨基糖苷類(lèi)；甘氨酰環(huán)素類(lèi)；青霉素類(lèi)；碳青霉烯類(lèi)；單環(huán)β-內(nèi)酰胺類(lèi)；喹諾酮類(lèi)；唑烷酮類(lèi)；和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)。

13、根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體可以通過(guò)脂質(zhì)膜水合法(實(shí)施例1)產(chǎn)生，或者優(yōu)選地，通過(guò)微流體流體動(dòng)力學(xué)聚焦技術(shù)(實(shí)施例2)產(chǎn)生。因此，本發(fā)明涉及如上所述的通過(guò)脂質(zhì)膜水合法或通過(guò)微流體流體動(dòng)力學(xué)聚焦技術(shù)產(chǎn)生的脂質(zhì)體。

14、本發(fā)明的第二方面涉及藥物組合物，其包含至少一種根據(jù)本發(fā)明第一方面的脂質(zhì)體，以及一種或更多種可藥用賦形劑和/或輔料。

15、本發(fā)明的第三方面涉及如上所限定的脂質(zhì)體和/或包含所述脂質(zhì)體的藥物組合物在治療細(xì)菌感染，特別是由分枝桿菌、優(yōu)選由非結(jié)核分枝桿菌引起的感染中的用途。

16、如實(shí)驗(yàn)部分所示，根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體已顯示出對(duì)膿腫分枝桿菌具有特定效力，該膿腫分枝桿菌是以廣泛且固有的抗生素抗性為特征的機(jī)會(huì)性病原體。

17、因此，在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)體和/或包含所述脂質(zhì)體的組合物用于治療由膿腫分枝桿菌引起的感染。

18、本發(fā)明的最后一方面是藥盒，其包含如上所限定的藥物組合物以及一個(gè)或更多個(gè)容器。