本公開涉及一種c端截短的β-半乳糖苷酶-1(glb1)重組蛋白；一種用于治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b的藥物組合物，該藥物組合物包含上述蛋白；一種治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b的方法，該方法包括向受試者施用上述藥物組合物。

背景技術(shù)：

1、gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥是一種遺傳性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)疾病，會(huì)破壞中樞和周圍神經(jīng)中的神經(jīng)細(xì)胞，其是由于glb1基因突變導(dǎo)致溶酶體中g(shù)lb1酶活性受損引起的。gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥的遺傳原因是glb1基因的常染色體隱性突變，該基因產(chǎn)生β-半乳糖苷酶-1。由于溶酶體中β-半乳糖苷酶-1酶活性不足，gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥會(huì)阻礙寡糖的降解，最終導(dǎo)致富含半乳糖的寡糖和硫酸角質(zhì)素在腦部和內(nèi)臟器官中積累，從而引發(fā)疾病。

2、根據(jù)發(fā)病年齡，gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥可分為三種表型：嬰兒型、青少年型和成人型。嬰兒型gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥(i型)表現(xiàn)為肝脾腫大、面部腫脹、上唇寬厚、上頜骨增生、牙齦增生和巨舌癥等癥狀。在大約六個(gè)月大時(shí)，可觀察到骨骼系統(tǒng)(例如脊柱)的變化，類似于hurler綜合征的表現(xiàn)。青少年型gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥(ii型)沒有可分辨的外部特征?；颊咴谝粴q之前通常表現(xiàn)正常，但之后會(huì)逐漸喪失控制功能，表現(xiàn)出自閉行為和/或變得遲鈍。這些癥狀可能發(fā)展為共濟(jì)失調(diào)、癲癇和/或痙攣性癱瘓。如果未經(jīng)治療，患者通常會(huì)在十歲之前死亡，并可能出現(xiàn)椎體斷裂等癥狀。成人型gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥(iii型)沒有任何可分辨的外部特征。該類型在兒童期發(fā)病，通常表現(xiàn)為類似于肌張力障礙、帕金森病和非典型小腦萎縮相關(guān)共濟(jì)失調(diào)的錐體外系癥狀，以及嚴(yán)重的癡呆。

3、據(jù)估計(jì)，gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥的發(fā)生率為每10萬至20萬新生兒中有一例，其中嬰兒型(i型)的報(bào)道頻率高于其他表型。

4、morquio綜合征是一種常染色體隱性遺傳疾病。morquio綜合征b型是由于β-半乳糖苷酶缺乏導(dǎo)致硫酸角質(zhì)素降解缺陷而引起的。morquio綜合征的癥狀在18至24個(gè)月大時(shí)變得明顯，如果未經(jīng)治療，多種并發(fā)癥會(huì)導(dǎo)致患者主要在20歲之前死亡。

5、morquio綜合征患者的身體特征包括：例如，身材矮小、面部粗糙、鼻梁低平、鼻翼寬大、嘴唇厚、巨頭畸形、角膜混濁、短頸、青光眼、視網(wǎng)膜變性和聽力喪失。此外，morquio綜合征患者可能伴有骨骼發(fā)育不良，導(dǎo)致胸骨突出、胸廓形狀異常和/或由于脊柱異常導(dǎo)致的嚴(yán)重脊柱后凸，這可能引發(fā)呼吸衰竭或脊髓壓迫。morquio綜合征的其他癥狀還包括腹股溝疝、肝腫大并伴隨由于齒狀突發(fā)育不全導(dǎo)致的齲齒。

6、目前，對(duì)于gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥和morquio綜合征尚無有效的治療方法，僅能進(jìn)行對(duì)癥治療。因此，針對(duì)gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥和morquio綜合征的治療需求迫切。

7、酶替代療法(ert)是一種通過向受試者系統(tǒng)性施用天然或重組蛋白和/或酶來治療疾病的方法，被認(rèn)為是治療由酶缺陷或缺乏引起的疾病的方法之一。

8、在此背景下，本公開涉及一種c端截短的glb1重組蛋白(以下簡(jiǎn)稱“glb1s”)，該重組蛋白不存在異源蛋白截短問題，并具有高酶活性。本公開展示了當(dāng)將重組蛋白glb1s施用于患者時(shí)，其在治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b方面的顯著效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開涉及一種與glb1相比具有c端截短的glb1重組蛋白(glb1s)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開涉及編碼該重組蛋白的多核苷酸、包含該多核苷酸的表達(dá)載體和/或包含該多核苷酸或該表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。

2、本公開旨在提供一種用于治療、預(yù)防和/或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b或其至少一種癥狀的藥物組合物，該藥物組合物包含上述重組蛋白(glb1s)。

3、本公開涉及一種治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b或其至少一種癥狀的方法，該方法包含施用包含所述重組蛋白(glb1s)的藥物組合物。

4、在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，具有c端截短的glb1重組蛋白(glb1s)在蛋白質(zhì)制造過程中不存在蛋白截短問題。在一個(gè)實(shí)施方案中，該重組截短的glb1具有與全長(zhǎng)glb1蛋白等同的酶活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，該重組截短的glb1具有至少與全長(zhǎng)glb1蛋白等同的酶活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，該重組glb1蛋白的短形式(glb1s)可能會(huì)增加患者血液中g(shù)lb1的酶活性。在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，與全長(zhǎng)glb1蛋白相比，該重組glb1蛋白的短形式(glb1s)或包含其的藥物組合物可用作具有更好有效性的藥物，用于治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b。

5、本公開涉及一種生產(chǎn)包含如seq?id?no:1所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)的方法，該方法包含：a)將編碼包含如seq?id?no:1所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)的目標(biāo)基因引入載體；b)用該載體轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞；c)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞并收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液；d)純化上清液以獲得該蛋白質(zhì)。

6、在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，該宿主細(xì)胞是中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)細(xì)胞。

7、本公開涉及通過上述生產(chǎn)包含如seq?id?no:1所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)的方法所生產(chǎn)的蛋白質(zhì)。

技術(shù)特征：

1.一種蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含與如seq?id?no:1所示的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)包含如seq?id?no:1所示的氨基酸序列。

3.一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼如權(quán)利要求1或2所述的蛋白質(zhì)。

4.一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含如權(quán)利要求3所述的多核苷酸。

5.一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含如權(quán)利要求3所述的多核苷酸或如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體。

6.一種治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b的方法，包含：

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中在施用治療有效量的所述藥物組合物后，gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b的至少一種癥狀的強(qiáng)度、嚴(yán)重程度或頻率降低，或至少一種癥狀的發(fā)作延遲。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中治療有效量的所述藥物組合物以0.1mg/kg至100mg/kg的劑量施用。

9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中治療有效量的所述藥物組合物通過腦室內(nèi)(icv)施用或靜脈內(nèi)(iv)給藥施用。

10.如權(quán)利要求9所述的方法,其中所述腦室內(nèi)(icv)施用包含通過包含儲(chǔ)液器和連接至所述儲(chǔ)液器的導(dǎo)管的腦室內(nèi)導(dǎo)管系統(tǒng)向患者施用治療有效量的所述藥物組合物。

11.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)具有與全長(zhǎng)glb1蛋白等同的酶活性。

12.如權(quán)利要求6所述的方法，其中治療有效量的所述藥物組合物被配置為使所述患者的血液中的glb1酶活性增加至少50％。

13.如權(quán)利要求6所述的方法，其中治療有效量的所述藥物組合物以每周一次、每?jī)芍芤淮巍⒚吭聝纱位蛎吭乱淮问┯谩?/p>

14.如權(quán)利要求6所述的方法，其中治療有效量的所述藥物組合物減少所述患者一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部器官中的硫酸角質(zhì)素含量。

15.一種用于治療、預(yù)防或改善gm1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或morquio綜合征b的藥物組合物，所述藥物組合物包含如權(quán)利要求1或2所述的蛋白質(zhì)。

16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述蛋白質(zhì)具有與全長(zhǎng)glb1蛋白等同的酶活性。

17.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物被配置為使所述患者的血液中的glb1酶活性增加至少50％。

18.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物減少所述患者一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部器官中的硫酸角質(zhì)素含量。

19.一種生產(chǎn)包含如seq?id?no:1所示的氨基酸序列的蛋白質(zhì)的方法，包含：

20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述宿主細(xì)胞為中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)細(xì)胞。

21.一種蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)通過如權(quán)利要求19或20所述的方法生產(chǎn)。

技術(shù)總結(jié)
本公開涉及一種C端截短的β?半乳糖苷酶?1(GLB1)重組蛋白；一種用于治療、預(yù)防或改善GM1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或Morquio綜合征B的藥物組合物，該藥物組合物包含上述蛋白；一種治療、預(yù)防或改善GM1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或Morquio綜合征B的方法，該方法包括向受試者施用上述藥物組合物；以及一種生產(chǎn)上述蛋白質(zhì)的方法。在本公開的一個(gè)實(shí)施方案中，C端截短的GLB1重組蛋白不存在異質(zhì)性蛋白截短問題，顯示出與全長(zhǎng)GLB1蛋白等同的酶活性，并增加患者血液中的GLB1酶活性。本公開表明，上述蛋白質(zhì)可用于治療、預(yù)防或改善GM1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥或Morquio綜合征B。

技術(shù)研發(fā)人員：陳東奎
受保護(hù)的技術(shù)使用者：新型醫(yī)藥公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/22