本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體地說，本發(fā)明涉及包括抗trka抗體或抗體片段、在治療、預(yù)防或緩解干眼癥中的用途。

背景技術(shù)：

1、隨著科技的進(jìn)步，電子產(chǎn)品的類型越來越多，電子產(chǎn)品不僅作為娛樂工具，更多的是作為工作、學(xué)習(xí)和生活必不可少的工具而存在，因此，使用電子設(shè)備的時間也越來越長，用眼的時間也越來越長。長時間的使用電子廠品，容易引起眼部的疲勞、酸脹和干澀，導(dǎo)致干眼癥的發(fā)生。干眼癥可稱角結(jié)膜干燥綜合癥(keratoconjunctivitissicca，kcs)或眼干燥癥。由淚液的量或質(zhì)及流體動力學(xué)異常引起的淚膜不穩(wěn)定和眼表損害，而導(dǎo)致眼不適癥狀及視功能障，長期發(fā)展可造成角膜上皮破損。常見癥狀以眼部干澀、異物感、眼部干燥引起綜合征，患者的眼結(jié)膜杯狀細(xì)胞密度降低、細(xì)胞核漿比增大、上皮細(xì)胞鱗狀化、角膜上皮結(jié)膜化、破損化，急需眼角膜眼結(jié)膜修復(fù)。目前干眼癥的治療多采用姑息療法，重點以使用人工淚液減輕癥狀。雖然這些姑息療法在短期內(nèi)能夠讓患者獲益，但它們在干眼癥的長期控制治療中效果有限。環(huán)孢素是臨床上另一類常用于干眼癥治療的藥物，然而，它們也存在起效時間長且容易引起局部不適的缺陷。干眼癥目前開始年輕化，即在年輕人中因電腦、手機(jī)的應(yīng)用，形成大量需預(yù)防或更進(jìn)一步地需受藥干預(yù)和臨床治療的實際臨床需求，急需干眼癥預(yù)防和臨床治療的創(chuàng)新藥面世。

2、有研究表明trka小分子激動劑可以刺激結(jié)膜杯狀細(xì)胞分泌粘蛋白，并在大鼠干眼癥模型中顯示治療效果。

3、然而，現(xiàn)有技術(shù)中尚未有trka抗體或抗原結(jié)合片段用于治療、預(yù)防或緩解干眼癥。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決此問題，一方面，本發(fā)明提供了一種能夠特異性識別trka的抗體或其抗原結(jié)合片段在制備用于治療干眼癥藥物中的用途，其特征在于，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)，

2、其包含seq?id?no:1所示的vl-cdr1、seq?id?no:2所示的所示的vl-cdr2和seq?idno:3所示的vl-cdr3；和

3、重鏈可變區(qū)，

4、其包含seq?id?no:4所示的vh-cdr1、seq?id?no:5所示的vh-cdr2和seq?id?no:6所示的vh-cdr3。

5、kasenvggyvs(seq?id?no:1)。

6、gassrht(seq?id?no:2)。

7、gqnyiypft(seq?id?no:3)。

8、nywlg(seq?id?no:4)。

9、dfyprtgntfynenfkg(seq?id?no:5)。

10、agtgfdy(seq?id?no:6)。

11、seq?id?no:1～6根據(jù)kabat編號方案進(jìn)行定義。

12、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述抗體含有重鏈框架區(qū)序列和輕鏈框架區(qū)序列的至少之一，所述重鏈框架區(qū)序列和輕鏈框架區(qū)序列的至少之一的至少一部分來自于鼠源抗體、人源抗體、靈長目源抗體或其突變體的至少之一。

13、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述的抗體輕鏈可變區(qū)具有seq?id?no:7所示的氨基酸序列或者具有與seq?id?no:7至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的氨基酸序列。

14、eivmtqspatlslsvgervtlsckasenvggyvswyqqkpdqspklliygassrhtgv?pdrftgsgsetdftltissvqaedlaayhcgqnyiypftfgggtkleik(seq?id?no:7)。

15、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述的抗體重鏈可變區(qū)具有與seq?id?no:8所示的氨基酸序列或者具有與seq?id?no:8至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的氨基酸序列。

16、evqllesggglvqpggslklsckasgyaftnywlgwmkqrpghglewigdfyprtg?ntfynenfkgkvtltadkssntaymqlssltsedsavylcaragtgfdywgqgttltvss(seq?id?no:8)。

17、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述抗體含有重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的至少之一，所述重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)的至少之一的至少一部分來自于鼠源抗體、人源抗體、靈長目源抗體或其突變體的至少之一。

18、優(yōu)選地，所述抗體的輕鏈恒定區(qū)和重鏈恒定區(qū)均來自于人源igg抗體或其突變體。

19、優(yōu)選地，所述抗體的輕鏈恒定區(qū)和重鏈恒定區(qū)均來自于人源igg4。

20、優(yōu)選地，所述抗體恒定區(qū)的全長序列如seq?id?no:9或10所示。

21、具體地，所述抗體或抗原結(jié)合片段還包括seq?id?no:9所示的全長輕鏈恒定區(qū)。

22、rtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte?qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq?id?no:9)。

23、具體地，所述抗體或抗原結(jié)合片段還包括seq?id?no:10所示的全長重鏈恒定區(qū)。

24、astkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslg(seq?id?no:10)。

25、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述抗體輕鏈具有seq?id?no:11所示的氨基酸序列或者具有與seq?id?no:11至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的氨基酸序列。

26、eivmtqspatlslsvgervtlsckasenvggyvswyqqkpdqspklliygassrhtgvpdrftgsgsetdftltissvqaedlaayhcgqnyiypftfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seq?idno:11)。

27、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述抗體重鏈具有seq?id?no:12所示的氨基酸序列或者具有與seq?id?no:12至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的氨基酸序列。

28、evqllesggglvqpggslklsckasgyaftnywlgwmkqrpghglewigdfyprtgntfynenfkgkvtltadkssntaymqlssltsedsavylcaragtgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslg(seq?idno:12)。

29、進(jìn)一步地，所述抗體或抗原結(jié)合片段還包括重鏈恒定區(qū)ch1區(qū)。

30、具體地，本發(fā)明所述的重鏈恒定區(qū)為ch1區(qū)(如seq?id?no:13所示的氨基酸序列)；全長重鏈恒定區(qū)(或者重鏈全長恒定區(qū))，包括重鏈恒定區(qū)(ch1區(qū))和fc區(qū)；其中fc區(qū)包括鉸鏈區(qū)、ch2區(qū)和ch3區(qū)。

31、astkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqss?glyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrv(seq?id?no:13)。

32、具體地，所述fc部分具有seq?id?no:14、15、16、17或18所示的氨基酸序列。

33、進(jìn)一步地，所述fc部分具有與seq?id?no:14、15、16、17或18所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的氨基酸序列。

34、dkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlpppseelalnelvtltclvkgfypsdiavewlqgsqelprekyltwapvldsdgsfflysilrvaaedwkkgdtfscsvmhealhnrftqksldrspgk(seq?id?no:14)。

35、dkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqpfrpevhllppsreemtknqvsltclargfypkdiavewesngqpennykttpsrqepsqgtttfavtskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqktislspgk(seq?id?no:15)。

36、eskygppcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslg(seq?id?no:16)。

37、eskygppcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppcqeemtknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslg(seq?id?no:17)。

38、eskygppcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvctlppsqeemtknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqegnvfscsvmhealhnrftqkslslslg(seq?id?no:18)。

39、其中，通過對fc野生型進(jìn)行一個或多個氨基酸的取代、缺失或添加從而獲得fc突變型。獲得的fc突變型仍保留fc野生型具有的生物學(xué)特性。

40、其中，fc部分突變位點至少包括s228、f234、l235、r409以及k447。

41、進(jìn)一步地，fc部分突變位點至少包括s228、f234、l235、s354、t366、r409以及k447。

42、具體地，fc部分突變位點至少包括s228p、f234a、l235a、s354c、t366w、r409k以及k447缺失。

43、進(jìn)一步地，fc部分突變位點至少包括s228、f234、l235、y349、t366、l368、y407、r409、h435、y436以及k447。

44、具體地，fc部分突變位點至少包括s228p、f234a、l235a、y349c、t366s、l368a、y407v、r409k、h435r、y436f以及k447缺失。

45、其中，突變位點的編號是按照eu索引定義的。

46、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述抗體為單鏈抗體、多聚抗體或cdr移植抗體。

47、根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述單鏈抗體(scfv)包括seq?id?no:7所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和seq?id?no:8所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)，其中所述重鏈可變區(qū)的c端通過連接肽linker與所述輕鏈可變區(qū)的n端相連，或所述輕鏈可變區(qū)的c端通過連接肽linker與所述重鏈可變區(qū)的n端相連。需要說明的是，本技術(shù)所述的單鏈抗體的“連接肽linker”為用于連接抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的連接肽，其可為制備單鏈抗體的常用連接肽linker，也可為經(jīng)過科研工作者改造后的連接肽linker。在某些實施方式中，所述連接肽可以為富含g的多肽，例如，其可以選自(g)3-s(即“gggs”)、(g)4-s(即“ggggs”)和(g)5-s(即“gggggs”)，例如ggggsggggsggggs。

48、gggs(seq?id?no:19)。

49、ggggs(seq?id?no:20)。

50、gggggs(seq?id?no:21)。

51、ggggsggggsggggs(seq?id?no:22)。

52、進(jìn)一步地，所述抗體或抗原結(jié)合片段還包括串聯(lián)的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；所述重鏈可變區(qū)與輕鏈可變區(qū)通過linker連接；所述linker選自seq?id?no:22所示的氨基酸序列。

53、根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述抗原結(jié)合片段包括fab、fab’、f(ab)2、f(ab’)2、fv、scfv-fc融合蛋白或scfv-fv融合蛋白。

54、根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明提供一種核酸分子；所述核酸分子編碼本發(fā)明所述的抗體或其抗原結(jié)合片段；根據(jù)本發(fā)明實施例，核酸分子所編碼的抗體或抗原結(jié)合片段可特異性靶向結(jié)合trka受體，阻斷ngf和trka結(jié)合。

55、進(jìn)一步地，所述核酸分子為dna。

56、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述核酸分子具有seq?id?no:23或seq?id?no:24所述的核苷酸序列。

57、gagatcgtgatgacccagtccccagccacactgagcctgtctgtgggagagagggtgaccctgtcttgcaaggcttccgagaacgtgggcggctacgtgagctggtatcagcagaagcccgaccagtctcctaagctgctgatctacggagcctccagcaggcacacaggagtgccagaccggttcaccggatccggaagcgagacagacttcaccctgacaatctcttccgtgcaggctgaggatctggccgcttatcattgtggccagaattacatctatcccttcacctttggcggcggcacaaagctggagatcaagcggaccgtggctgccccctccgtgttcatcttccccccttccgacgagcagctgaagtccggcaccgctagcgtggtgtgtttactgaacaacttctaccctcgtgaggccaaggtgcagtggaaggtggacaacgctttacagtccggcaactcccaagaatccgtgaccgagcaagattccaaggactccacctactctttatcctccactttaactttatccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcttgtgaggtgacccatcaaggtttatcctcccccgtgaccaagtccttcaatcgtggcgagtgc(seq?id?no:23)。

58、gaggtgcagctgctggagtctggaggaggactggtgcagccaggaggctctctgaagctgtcctgcaaggccagcggctacgctttcaccaactattggctgggatggatgaagcagaggccaggacacggactggagtggatcggcgacttttaccctcggaccggcaacacattctataacgagaacttcaagggcaaggtgaccctgacagccgataagtccagcaataccgcttacatgcagctgtcttccctgacatccgaggactccgccgtgtacctgtgcgctagggctggaaccggattcgattattggggccagggcaccacactgacagtgagctctgccagcaccaagggccccagcgtgttccctctggctccttgtagccggtccacctccgagtccacagctgctctgggctgcctcgtgaaggactactttcccgaacccgttaccgtgagctggaatagcggcgctttaacctccggagtgcacaccttccccgctgtgctccagtcctccggtttatactctttatcctccgtggtgaccgtgccttcctccagcctcggcaccaagacctacacttgtaacgtggaccacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagggtggagtccaagtacggacctccttgtcccccttgccccgcccccgaggccgctggcggaccctccgtgttcctcttcccccccaaacccaaggacactttaatgatctcccggacccccgaagtgacttgtgtggtggtggacgtgtcccaagaagaccccgaggtgcagtttaactggtacgtggatggcgtggaggtgcacaacgccaagaccaagcctagggaggaacagttcaactccacctaccgggtggtgtccgtgctcaccgtgctgcatcaagattggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtgagcaacaagggactgcccagctccatcgagaagaccatcagcaaggccaaaggccagccccgggaacctcaagtttatacactgccccccagccaagaagagatgaccaagaaccaagtttctttaacttgtttagtgaagggcttctaccctagcgacatcgctgtggagtgggagtccaatggccagcccgaaaacaattataagaccaccccccccgtgctggactccgatggttctttttttttatactccaagctgacagtggacaagtctcgttggcaagaaggcaacgtgttctcttgtagcgtgatgcacgaggctttacacaaccactacacccagaagtctttatctctgtctttaggc(seq?id?no:24)。

59、其中，上述seq?id?no:23～24所示核苷酸序列分別編碼本發(fā)明所述的輕鏈、重鏈，其中下劃線部分分別編碼本發(fā)明所述的輕鏈可變區(qū)、重鏈可變區(qū)。

60、其中，dyg047由seq?id?no:11所示的氨基酸序列的輕鏈和seq?id?no:12所示的氨基酸序列的重鏈組成。

61、其中，seq?id?no:23所示核苷酸序列編碼dyg047受試抗體的輕鏈；seq?id?no:24所示核苷酸序列編碼dyg047受試抗體的重鏈。

62、根據(jù)本發(fā)明實施例，本發(fā)明提供一種表達(dá)載體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述表達(dá)載體攜帶前面所述的核酸分子。根據(jù)本發(fā)明實施例的表達(dá)載體導(dǎo)入合適的受體細(xì)胞后，可在調(diào)控系統(tǒng)的介導(dǎo)下，有效實現(xiàn)前面所述的特異性識別trka的抗體或其抗原結(jié)合片段表達(dá)，進(jìn)而實現(xiàn)所述抗體或抗原結(jié)合片段的體外大量獲得。

63、根據(jù)本發(fā)明實施例，本發(fā)明提供一種能夠特異性識別trka的抗體或其抗原結(jié)合片段、一種編碼本發(fā)明所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸分子或一種攜帶所述核酸分子的表達(dá)載體在制備用于治療、預(yù)防或緩解干眼癥藥物中的用途。

64、根據(jù)本發(fā)明實施例，所述藥物用于用于上調(diào)淚液分泌量，緩解干眼癥癥狀。

65、本發(fā)明提供包含抗trka抗體或抗原結(jié)合片段可以通過激活trka下游mapk信號通路，上調(diào)erk的磷酸化水平，從而，

66、1)刺激結(jié)膜黏蛋白分泌，穩(wěn)定淚膜，

67、2)改善角膜愈合并可能減少眼表損傷，

68、3)支持神經(jīng)元的存活和分化，并可能改善感覺反應(yīng)，進(jìn)而治療、預(yù)防或緩解干眼癥，

69、抗trka抗體或抗原結(jié)合片段在干眼癥的治療、預(yù)防或緩解上，能夠促進(jìn)粘蛋白的分泌，改善角膜愈合及感覺反應(yīng)。

70、下面的描述中闡述了本發(fā)明的一個或多個實施方案的細(xì)節(jié)。本公開的其它特征或優(yōu)點將通過以下附圖和對幾個實施例的詳細(xì)描述并且還通過所附權(quán)利要求書變得顯而易見。