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一種基于α-2,8型唾液酸轉移酶的體外酶化學標記檢測與富集糖基化RNA的方法

文檔序號:41949026發(fā)布日期:2025-05-16 14:06閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種基于α-2,8型唾液酸轉移酶的體外酶化學標記糖基化rna的方法,其特征在于,包括以下步驟:使用α-2,8型唾液酸轉移酶、帶有標記基團的cmp-sialic?acid,將帶有標記基團的唾液酸轉移至rna樣品中sialoglycorna的糖鏈末端唾液酸上,得到帶有標記基團的sialoglycorna。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法,其特征在于,所述α-2,8型唾液酸轉移酶為cst?ii、lin3b,及其衍生的具備α-2,8型唾液酸轉移酶活性的相應突變體、截短體,優(yōu)選為cst-iiδ32i53s。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述帶有標記基團的cmp-sialic?acid中的標記基團包括可檢測基團、或可進一步通過反應引入可檢測基團的基團;

4.根據(jù)權利要求3所述的方法,其特征在于,所述帶有標記基團的cmp-sialic?acid中的標記基團為可進一步通過反應引入可檢測基團的基團,所述方法進一步包括通過標記基團參與的反應將可檢測基團引入到唾液酸上,得到帶有可檢測基團的sialoglycorna;

5.根據(jù)權利要求1-4任一所述的方法,其特征在于,包括以下步驟,將rna樣品、α-2,8型唾液酸轉移酶、帶有標記的cmp-sialic?acid、金屬離子、以及任選的rnase抑制劑在緩沖溶液中在一定溫度下共孵育一段時間,得到帶有標記基團的sialoglycorna。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法,其特征在于,反應體系中,所述緩沖溶液的ph=6.0-7.5,優(yōu)選地,ph=6.0-7.0。

7.根據(jù)權利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述緩沖溶液為tris緩沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、hepes緩沖液,所述緩沖溶液的濃度為5-200mm;優(yōu)選地,所述緩沖溶液為tris·hcl、醋酸鈉緩沖液,所述緩沖溶液的濃度為50-150mm。

8.根據(jù)權利要求5-7任一所述的方法,其特征在于,所述金屬離子選自mg2+、ca2+,所述金屬離子由其金屬氯化物、金屬溴化物、金屬硝酸鹽、金屬硫酸鹽提供,反應體系中金屬離子濃度為1-20mm;優(yōu)選地,所述金屬離子由mgcl2提供,反應體系中金屬離子濃度為5-10mm。

9.根據(jù)權利要求5-8任一所述的方法,其特征在于,反應體系中,所述rna濃度為0.01-10mg/ml,所述α-2,8型唾液酸轉移酶的濃度為0.01-10mg/ml,所述帶有標記的cmp-sialicacid的濃度為1μm-20mm;優(yōu)選地,所述rna濃度為0.1-1mg/ml,所述α-2,8型唾液酸轉移酶的濃度為1-5mg/ml,所述帶有標記的cmp-sialic?acid的濃度為1-15mm。

10.根據(jù)權利要求5-9任一所述的方法,其特征在于,所述孵育溫度為4-40℃,孵育時間為10min-360min;優(yōu)選地,所述孵育溫度為35-38℃,孵育時間為60-240min。

11.根據(jù)權利要求1-10任一所述的方法,其特征在于,包括以下步驟:

12.權利要求1-11任一所述的方法的用途,其特征在于,其用于檢測糖基化rna、富集糖基化rna、糖基化rna的rna部分測序或糖基化rna的糖基部分測序。

13.一種基于α-2,8型唾液酸轉移酶的體外酶化學標記檢測或富集糖基化rna的試劑盒,其特征在于,其包括:


技術總結
本申請屬于生物學技術領域,具體地,涉及一種基于α?2,8型唾液酸轉移酶的體外酶化學標記檢測與富集糖基化RNA的方法。本申請使用α?2,8型唾液酸轉移酶,如CST?II,將帶有標記基團的唾液酸轉移至SialoglycoRNA糖鏈末端的唾液酸上,可直接得到帶有可檢測基團的SialoglycoRNA,或進一步通過后續(xù)反應引入可檢測基團,即可進行后續(xù)的信號檢測或富集;并且可以進一步對RNA部分和糖基部分進行測序。本申請為SialoglycoRNA的檢測和富集提供了一種非常高效簡便的檢測手段,具有高特異性和高靈敏性的特點,具有廣闊的應用前景。

技術研發(fā)人員:萬香波,范新娟,王云龍,曾廣冬,南昊,馮莉莉,涂承娥,陳旭輝,馬毅
受保護的技術使用者:鄭州大學
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/5/15
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